이식 전 췌장 동종이식의 보존을 위한 Normothermic Ex Vivo 췌장 관류

요약

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP)은 췌장 동종 이식편의 보존을 위해 거의 연구되지 않았습니다. 우리는 이식 전에 췌장 동종 이식편에 대한 혁신적인 보존 기술을 제시합니다.

초록

췌장 이식(PTx)은 당뇨병(DM) 진단의 부담을 안고 살아가는 사람들을 위한 근치적 치료법입니다. 그러나 장기 부족과 PTx에 등록되는 환자 수의 증가로 인해 이식에 사용할 수 있는 이식편의 수를 늘리기 위한 새로운 전략이 필요합니다.

정적 냉장 보관(SCS)은 표준 기준 기관의 황금 표준으로 간주됩니다. 그러나 표준 기준 기증자(SCD)가 부족해지고 확장 기준 기증자(ECD)의 장기 수용률을 높일 수 있는 새로운 전략이 시급히 필요합니다.

Normothermic ex vivo perfusion (NEVP)은 지난 수십 년 동안 점점 인기를 얻은 전략 중 하나입니다. 이 보존 방법은 이미 다른 장기(간, 신장 및 폐)에서 성공적으로 사용되었지만 췌장 이식에서는 최소한으로 연구되었습니다. 췌장에 대한 방법을 설명하는 몇 가지 논문은 거의 성공을 거두지 못했으며 부종이 주요 문제 중 하나입니다. 다음 원고는 돼지 췌장을 관류하기 위해 우리 그룹이 개발한 성공적인 NEVP 방법 및 설정을 설명합니다.

서문

국가 당뇨병 통계 보고서에 따르면 2019년 미국에서 총 2,870만 명이 당뇨병 진단을 받고 살고 있었습니다. 이들 중 약 180만 명이 제1형 당뇨병^진단을 받았습니다. PTx는 현재 복잡한 제1형 진성 당뇨병에 대한 가장 효과적이고 유일한 치료법^이며2, 이들 환자의 기대 수명과 삶의 질을 모두 증가시키는 시술이다³.

췌장은 사망한 기증자로부터 회수한 후 가장 자주 버려지는 장기이다⁴. 장기가 계속 부족하고 대기자 명단 시간이 늘어남에 따라 이식 센터는 순환기 사망 후 기증(DCD^)을 포함하여 ECD의 췌장 이식편을 더 많이 사용하고 있습니다5. 확장된 기준 기증자로부터 오는 동종이식을 안전하게 보존, 관류, 평가 및 수리하기 위한 전략이 필요합니다.

NEVP는 폐⁶, 간 ^7,8 및 신장 이식편 ^9,10의 보존에 성공한 것으로 입증되었습니다. 그러나 저체온 또는 정상 체온 췌장에 대한 기계 관류를 연구하는 그룹의 수와 출판물의 수는 이식 부종 및 부상으로 인해 적고 제한적입니다^11,12,13,14.

이 연구의 목적은 궁극적으로 이식 전 장기 보존, 장기 평가 및 복구를 위한 플랫폼을 제공하는 것을 목표로 돼지 모델을 사용하여 정상 체온 생체 외 췌장 관류(NEVPP)에 대한 프로토콜을 제시하는 것입니다. 이를 통해 다른 연구 그룹은 췌장 동종 이식편 연구를 위한 관류 모델을 구축할 수 있습니다.

프로토콜

본 연구에 사용된 모든 동물은 미국 국립의학연구회(National Society for Medical Research)에서 제정한 '실험동물 관리 원칙(Principles of Laboratory Animal Care)'과 캐나다 온타리오주 국립보건원(National Institutes of Health)에서 발행한 '실험동물 관리 가이드(Guide for the Care of Laboratory Animals)'에 따라 인도적 관리를 받았습니다. 모든 연구는 토론토 종합 연구소의 동물 관리위원회의 승인을 받았습니다.

참고: 이 연구 프로토콜은 돼지 모델을 기반으로 합니다. 이식편은 2시간 동안 냉장 보관한 다음 이식 전에 3시간 동안 정상 체온 기계 관류를 거칩니다(그림 1).

1. 동물

1. 수컷 요크셔 돼지 (40-50 kg)를 사용하십시오.

2. 장기 조달

참고: 수술 전 절차와 수술 절차의 일부는 그룹¹⁵ 에서 발표한 이전 논문과 동일하며 다음과 같습니다.

1. 돼지를 최소 7일 동안 연구 시설에 수용하여 적응을 허용하고 스트레스 수준을 줄입니다.
2. 마취를 유도하기 전에 최소 6시간 동안 돼지를 금식시킵니다.
3. 미다졸람(0.15mg/kg), 케타민(25mg/kg) 및 아트로핀(0.04mg/kg)을 근육내(IM) 주사하여 돼지를 진정시킵니다.
   참고: 이것은 주거 시설에서 이루어집니다.
4. 동물을 주거 시설에서 수술실 (OR)로 옮기면 장기 회복이 수행됩니다.
5. 돼지를 수술실 테이블에 앙와위 자세로 놓고 턱이 이완될 때까지 산소 2L와 이소플루란 5%가 함유된 안면 마스크를 놓습니다.
6. 후두경을 사용하여 성대를 시각화하고 삽관 중 경련을 예방하기 위해 2% 리도카인을 뿌립니다. 삽관을 시도하기 전에 최소 30초 동안 마스크를 산소와 이소플루란으로 교체하십시오.
7. 7mm 기관내관을 삽입하고 5mL의 공기로 커프를 막습니다. 카프노메트리를 사용하여 튜브가 올바른 위치에 있는지 확인하십시오.
8. 이소플루란 가스를 2.5%로 낮춥니다. 인공호흡기를 켜고 15-20회/분으로 설정하고 일회 호흡량을 10-15mL/kg 체중으로 설정합니다. 심박수와 산소 포화도를 지속적으로 모니터링하십시오.
9. Seldinger 기법¹⁶을 사용하여 8.5 Fr. x 10cm 카테터를 경정맥(오른쪽 또는 왼쪽)에 삽입합니다.
10. 경정맥 카테터를 사용하여 250mL/hr에서 펜타닐(링거 500mL에 2.5mL) 주입을 시작합니다.
11. 마취의 깊이를 결정하기 위해 근육 반사를 확인하십시오. 턱 톤은 가장 신뢰할 수 있는 근육 반사입니다 ¹⁷.
    참고: 하악 근육의 경직이 확인되면 이소플루란 및/또는 펜타닐 주입을 늘리십시오.

3. 수술 절차

1. 수술 부위를 소독하고 덮으십시오. xyphoid에서 pubic symphysis까지 정중선 절개를 수행하십시오. 더 나은 노출을 위해 왼쪽 측면 절개로 수술 부위를 확장합니다.
2. 복부 대동맥에서 하대정맥(IVC)을 해부합니다. 주변 조직에서 대동맥을 더 제거하고 작은 요추 대동맥 가지를 결찰합니다. 양쪽 신장 동맥 주위에 합자를 식별하고 배치합니다.
   참고: 이 시점에서 합자가 묶여 있으면 안 됩니다.
3. 대동맥 뒤쪽이 자유로워지면 그 주위에 두 개의 합자를 통과시킵니다. 하부 합자는 결국 장골 동맥 분기점 바로 위에 묶이고 상부 합자는 이전 결찰보다 5cm 위에 묶입니다.
4. 간 문턱을 해부하십시오. 모든 동맥을 가능한 한 간에 가깝게 묶습니다. 총 담관을 확인하고 두 개의 합자를 간 가까이에 놓고 구조를 나눕니다.
5. 대동맥 주변을 해부하되 이 시점에서 절단하지 마십시오. 대동맥의 간상 부분을 식별하고 해부하고 그 주위에 넥타이를 매십시오.
   참고: 이 시점에서 합자가 묶여 있으면 안 됩니다.
6. 얼음이 췌장을 식힐 수 있도록 작은 주머니를 엽니다. 플러시하기 전에 췌장을 가능한 한 적게 움직입니다.
7. 중심선을 통해 기증자 체중 kg 당 500 IU의 헤파린을 투여하십시오. 5분 정도 기다렸다가 경정맥 카테터를 사용하여 구연산염, 인산염, 포도당, 식염수, 아데닌, 포도당 및 만니톨(CPD/SAG-M) 백에서 채혈을 시작합니다.
8. 하대동맥 합자를 묶고, 장골 분기 넥타이 위의 플러시 라인으로 대동맥을 캐뉼러하고, 상부 타이로 캐뉼라를 고정합니다. 양쪽 신장 동맥을 합자합니다.
9. 충분한 혈액이 수집되면(600mL) 간상대동맥(크로스클램프)을 묶습니다. 희생을 위해 염화칼륨 10mL를 투여하십시오.
10. 위스콘신 대학교(UW) 보존 솔루션으로 플러시를 시작합니다. 문맥의 개구부 (가능한 한 높음)와 환기를 위해 카바를 잘라냅니다. 복강에 얼음을 넣으십시오.
11. 1L의 UW 용액을 세척한 후 췌장 꼬리와 십이지장 C-루프를 평가합니다. 적절한 세척이 이루어지면 절개를 시작하고 장간막 혈관을 식별하고 고정합니다. UW의 두 번째 리터에 대한 세척 속도를 늦춥니다.
12. 문맥 확장을 위해 췌장 이식편과 카바 또는 장골 정맥 부분을 검색합니다.
    참고: 췌장 이식편은 비장과 함께 제거됩니다.
13. 얼음으로 채워진 대야 안에 놓인 오르간 가방 안에 오르간을 넣습니다.

4. 췌장 이식편의 백 테이블 준비 (그림 2A)

1. 대동맥의 말단부에서 플러시 라인을 제거하고 넥타이로 닫습니다. 오르간 백에 남은 UW 용액을 채웁니다. 비장을 포함한 부착 조직에서 췌장을 제거하십시오.
2. 이전에 회복된 카바 또는 장골 정맥을 6-0 Prolene으로 사용하여 문맥 확장을 수행합니다. 문맥과 근위 대동맥을 1/4 in x 3/8 in 감속기로 캐뉼라합니다.
3. 십이지장의 말단 부분을 Malecot 카테터와 넥타이로 캐뉼라하십시오. 십이지장 내용물이 쏟아지지 않도록 카테터 끝을 고정하십시오. 4-0 Prolene으로 장간막 혈관을 감독했습니다.
4. 이식편의 무게를 등록하십시오. NEVPP가 시작될 때까지 이식편을 정적 냉장 보관(SCS)에 보관하십시오.

5. 생체 외 췌장 관류(NEVPP)

참고: 관류 회로는 신생아 심폐 바이패스 장비로 만들어집니다(그림 3).

1. 해당 튜브를 산소 공급기와 정맥 저장소에 연결하고 동맥 라인을 산소 공급기의 유출에 연결하고 버블 필터를 홀더에 놓습니다. 버블 필터에서 정맥 저장소로 가는 퍼지 라인을 연결합니다. 버블 필터 캡을 열어 모든 공기를 배출합니다.
2. 정맥 라인을 정맥 저장소의 입구에 연결하십시오. 투석액이 주입될 투석 필터와 튜브를 연결합니다. 유량계 센서, 압력 라인 및 온도 프로브를 연결합니다. 동맥 및 정맥 샘플 라인을 샘플 포트에 연결합니다.
3. 췌장실(그림 3)을 Mayo 테이블에 놓고 이 목적을 위한 구멍을 통해 동맥 및 정맥 튜브를 삽입합니다. 외부 히터 장치를 연결하고 켭니다.
4. 흡입 튜브를 롤러 펌프 내부에 놓고 한쪽 끝을 챔버에서 나오는 튜브에 연결하여 유체를 수집하고 다른 쪽 끝을 정맥 저장소에 연결하여 모든 장기 손실을 관류액을 수집합니다.
5. 산소 튜브(녹색)를 카보겐 혼합물(95% O 2/5% CO₂)과 산소 공급기가 들어 있는 가스 탱크에 연결합니다. 히터 펌프 장치 튜브를 산소 공급기에 연결합니다.
6. 클램프 동맥 및 정맥 유출 라인뿐만 아니라 정맥 저장소의 유출.

6. 관류물의 준비와 회로의 프라이밍

1. 정맥 저장소를 관류액으로 채웁니다(표 1).
2. 혈관 확장제(에포프로스테놀)를 8mL/h의 속도로 동맥 라인에 지속적으로 투여하려면 하나의 주사기 펌프를 사용하십시오. 효소 억제제를 정맥 저장소(15mg, 10mL/h)에 직접 지속적으로 투여하려면 두 번째 주사기 펌프를 사용합니다.
3. 심폐 기계(HLM)를 켜고 압력, 온도 및 타이머 패널을 시작합니다. 히터 펌프를 켜서 관류 용액을 38°C로 데웁니다. O 2/CO₂ 공급 장치를 엽니다.
4. 정맥 저장소의 유출구에 놓인 튜브 클램프를 제거하고 원심 펌프를 시작한 다음 최대 1,500rpm으로 이동합니다. 동맥 필터를 우회하여 튜브를 고정하고 동맥 필터에서 공기를 방출합니다. 동맥 및 정맥 압력 라인을 제로화합니다.

7. 췌장 이식편 관류(그림 2B)

1. 췌장이 보관되어있는 장기 주머니를 엽니 다. 동맥 캐뉼라를 통해 200mL의 알부민으로 씻어냅니다. 얼음에서 췌장을 제거하고 장기 챔버 내부에 위치시킵니다. 동맥과 정맥관에 공기가 없는지 확인하십시오.
2. 동맥 쪽에서 클램프를 풀고 동맥과 정맥 튜브 사이의 지름길을 클램프하십시오. 동맥 튜브에서 혈액이 나오기 시작하면 동맥 캐뉼라에 라인을 연결합니다. 원심 펌프의 속도를 조절하여 동맥압을 20-25 mmHg로 설정하십시오. 정맥 캐뉼라에서 혈액이 나오기 시작하면 정맥 튜브를 연결하십시오.
3. 베라파밀(2.5mg/mL) 1바이알을 췌장이 완전히 연결되고 주요 출혈이 관찰되지 않을 때 동맥 쪽에 직접 투여합니다.
4. 압력, 동맥 흐름, 온도 및 십이지장 분비를 지속적으로 기록합니다. 혈액을 수집하고, 매시간 십이지장 출력을 기록하고, 부종을 매시간 육안으로 평가합니다. 관류 매개변수를 기록하고 분석을 위한 샘플(정맥 및 동맥혈 가스 샘플, 아밀라아제, 리파아제 및 LDH 샘플)을 채취합니다.
5. 관류가 끝나면 동맥관과 정맥관을 분리하고 장기 챔버에서 이식편을 제거하고 차가운 UW로 씻어내고 무게를 잰다. 이식 순간까지 멸균 된 장기 주머니에 얼음에 이식편을 보관하십시오.

결과

다가오는 데이터는 심장 박동 기증자 췌장 회수 모델을 사용한 7 가지 실험의 대표적인 결과를 보여줍니다. 대동맥 캐뉼라 삽입, UW 용액으로 플러시 및 췌장 회수 후, 적혈구가 준비되는 동안 이식편을 2시간 동안 SCS에 보관했습니다. NEVPP는 이 모델에서 3시간 동안 수행되었으며, 이는 향후 이식편 평가 및 수리가 의도된 경우 관류에 필요한 최소 시간으로 간주되었습니다. 샘플과 측정은 시간별 시점에서 기록되었습니다. (0 = 기준선, 오르간이 회로에 연결된 직후, 1 = 1시간, 2 = 2시간, 3 = 3시간).

췌장 이식편은 이 목적을 위해 맞춤 설계되었으며 히터(보충 파일)를 포함하는 장기 챔버에 배치되었습니다. NEVPP의 목적은 장기에 가까운 생리적 환경을 제공하는 것입니다. 이를 위해, 동맥압은 모든 관류에서 20-25 mmHg 사이로 유지되도록 설정되었다. 압력과 유량은 전체 관류에 걸쳐 측정되었으며 안정적으로 유지되었습니다(그림 4). 대사 활성은 다음 공식을 사용하여 이식편의 산소 소비량을 계산하여 추정하였다: [(pO2 art-pO2 ven)*유동/중량] (도 5). pH, 나트륨, 칼슘 및_HCO3의 측정은 전체 관류 동안 생리학적 값 내에 있었습니다(그림 6). 젖산과 칼륨 수치는 관류 중에 감소했으며 3시간에서 정상 값에 근접했습니다(그림 7). 회로가 폐쇄 시스템이기 때문에 관류 중에 아밀라아제 및 리파아제 수준이 증가할 것으로 예상됩니다(그림 8). 그러나 수치의 증가는 이식편 손상과 상관관계가 없는 것으로 보입니다(그림 9). 반정량적 척도를 사용하여 지방 및 실질 괴사와 섬 세포 무결성을 평가했습니다. (0 - 변화 없음, 1 - 경미한 변화, 2 - 보통 변화, 3 - 심각한 변화). 이것은 실험 그룹에 눈이 먼 병리학자에 의해 수행되었으며 췌장염의 징후는 관찰되지 않았습니다.

부종을 평가하기 위해 관류 전후에 췌장 동종이식편을 칭량했습니다(표 2).

그림 1. 연구 프로토콜. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2. 관류 전후의 췌장. (A) 관류 전. (B) 관류 후. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3. 관류 회로의 개략도. 신생아 심폐 우회술 기술 사용; 관류액은 정맥 저장소에 부어지고 원심 펌프를 사용하여 산소 공급기로 추진됩니다. 산소 공급기를 떠난 후 회로는 관류액을 투석 카세트로 보내고 다시 저장소로 보내는 튜브와 동맥 필터로 가는 튜브로 나뉩니다. 동맥 버블 필터를 통과 한 후, 관류액은 대동맥을 통해 췌장으로 20-25 mmHg의 압력으로 구동됩니다. 정맥 유출은 관류액을 정맥 저장소로 다시 유도합니다. ( ¹⁸에서 발췌). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4. 표준 편차(mL/min)가 있는 평균 동맥 흐름. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 5. 표준 편차(mL/min/g)가 있는 평균 산소 소비량. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 6. (A) 평균 pH, (B)_{HCO 3}, (C) 나트륨 및 (D) 표준 편차를 사용한 칼슘 측정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 7. (A) 평균 젖산 및 (B) 표준 편차가 있는 칼륨 측정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 8. (A) 평균 아밀라아제 및 (B) 표준 편차를 사용한 리파아제 측정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 9. 관류 전후의 핵심 생검. (A) 기계 관류 전의 정상적인 췌장 실질¹⁸. (B) 췌장 아시니 및 섬 세포의 양호한 보존을 통한 관류 후 생검. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

성분	분량
링거 젖산	260 mL의
스틴 솔루션	195 mL의
세척 된 적혈구	162.5 mL의
이중 역삼투압수(DRO)	35 mL
헤파린 (10000 IU / 10 mL)	1.3 밀리리터
중탄산나트륨(8.4%)	10.4 mL의
글루 콘산 칼슘 (10 %)	1.3 밀리리터
메틸프레드니솔론(Solu-Medrol)	325의 mg의
아프로티닌	15의 mg의

표 1. 관류액 조성물.

	이전 무게	이후 무게	이득	% 차이
사례 1	244 그램	240 그램	ᆞ 4g	-1.63
사례 2	154 그램	164 그램	10 그램	6.49
사례 3	184 그램	245 그램	61 그램	33.15
사례 4	190 그램	226 그램	36 그램	18.94
사례 5	198 그램	307 그램	109 그램	55.05
사례 6	205 그램	315 그램	107 그램	51.44
사례 7	193 그램	256 그램	63 그램	32.64

표 2. 관류 전후의 무게.

보충 파일: 관류를 위한 맞춤형 췌장 챔버. Princess Margaret Cancer Center의 Medical Physics - Radiation Medicine Program의 Machine Shop과 공동으로 설계되었습니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

토론

이 연구는 이전에 제시된 설정으로 3시간의 관류 후 최소한의 조직학적 손상으로 췌장 동종이식에 대해 안정적인 NEVPP를 달성할 수 있음을 보여줍니다. 동맥 흐름, 압력, pH,_HCO3 및 Na와 같은 관류 매개변수는 관류 동안 안정적으로 유지되며 K 및 젖산염의 감소 및 안정화를 관찰했습니다.

조달, 백테이블 준비 및 관류 중에 이식편을 가능한 한 적게 조작하는 것이 매우 중요합니다. 동맥압을 엄격하게 제어하는 것도 매우 중요합니다. 췌장은 저압 기관이기 때문에 압력이 증가하면 장기에 돌이킬 수없는 손상을 줄 수 있습니다.

이 연구를 위한 백테이블 준비는 인간 이식편 준비와 다릅니다(그림 2A). 췌장은 돼지에게서 채취한 유일한 기관이었기 때문에 우리는 체강 몸통과 상부 장간막 동맥을 포함하는 대동맥의 일부를 채취할 수 있었습니다. 문맥은 장골 정맥을 이용한 확장술을 시행하였다. 인간 이식편의 경우, 동맥 재건 및 문맥 연장을 위한 장골 이식편을 사용하여 이식할 때와 동일한 방식으로 백테이블 준비를 해야 한다¹⁹.

이 방법은 설정의 복잡성으로 인해 제한될 수 있습니다. 우리는 투석 카세트를 사용하지 않고 수행했을 때 이식편의 심각한 부종을 발견한 후 투석 카세트를 추가하기로 결정했습니다. 이러한 실험을 위해 맞춤형 오르간 챔버도 건설되었으며, 여기에는 이식편의 최적 관류에 도움이 되는 것으로 입증된 외부 열원이 포함되어 있습니다.

생체 외 정상 체온 췌 장 관류를 설명하는 연구는 거의 없습니다. 이러한 연구의 대부분에서 부종이 주요 제한 요인인 것으로 보입니다. 우리가 아는 한, 이 방법은 부종을 조절하기 위해 투석 카세트를 사용한 유일한 보고입니다.

췌장에 대한 Normothermic 생체 외 관류는 다른 장기에 비해 아직 초기 단계에 있습니다. 현재 프로토콜은 관류 중 이식편 손상을 평가하기 위한 확장 기준 기증자(DCD), 관류수 개선, 더 긴 관류 시간 및 바이오마커에 초점을 맞추고 있습니다. 아밀라아제와 리파아제 수치는 우리가 폐쇄 시스템을 사용하고 있기 때문에 신뢰할 수 있는 마커가 아닌 것으로 보이며 조직병리학과 상관관계가 없는 것 같습니다²⁰. 지금까지 우리 그룹은 관류 후 췌장 동종 이식편을 이식하여 좋은 결과를 얻었습니다¹⁸.

이 기술의 지속적인 개선을 통해 이 기술이 임상 이식에 적용되고 췌장 동종이식편을 평가하고 복구할 수 있기를 바랍니다. 이를 통해 궁극적으로 이식편 활용도를 높이고 환자 대기 시간을 줄이며 환자 결과를 개선할 수 있기를 바랍니다

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alburex 5	CSL Behring AG	187337	25 g of Albumin (human) in 500 mL of buffered diluent
Aprotinin from bovine lung	Sigma-Aldrich	A1153
Belzer UW Cold storage solution	Bridge to life Ltd	4055
Calcium gluconate (10%)	Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON)	C360019
Composelect (blood collection bags)	Fresenius Kabi Canada Ltd	PQ31555
Epoprostenol	GlaxoSmithKline Inc.	218761
Heart lung machine, Stöckert S3	Sorin Group Canada Inc.	Custom made	Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit
Hemoflow, Fresenius Polysulfone	Fresenius Medical Care North America	0520165A
Heparin (10000 IU/10 mL)	Fresenius Kabi Canada Ltd	C504710
Lactated Ringer's solution	Baxter	JB2324
Neonatal cardiopulmonary bypass techonolgy	Sorin Group Canada Inc	Custom made	Dideco perfusion tubing systems, centrifugal blood pump (Revolution), arterial blood filter, microporous hollow fibre memebrane oxygenator), cannulas
Pancreas chamber		Custom made	With external heater
Percutaneous Sheath Introducer Set with Integral Hemostasis Valve/side Port for use with 7-7.5 Fr Catheters	Arrow International LLC	SI-09880
Sodium bicarbonate (8.4%)	Fresenius Kabi Canada Ltd	C908950
Solu-Medrol	Pfizer Canada Inc.	52246-14-2
Steen	XVIVO	19004
Urethral catheter	Bard Inc	86020	20 Fr, malecot model drain
Verapamil	Sandoz Canada Inc.	8960