O-링 대동맥 밴딩 대 압력 과부하로 인한 심장 비대 모델링을 위한 기존의 횡대동맥 수축

요약

본 프로토콜은 심장 비대에 압력 과부하를 유도하기 위해 마우스에서 대동맥 밴딩의 새로운 기술을 기술한다. 밴딩에는 내경이 고정 된 고무 링이 사용됩니다. 이 새로운 기술은 향후 실험을 위해 변동을 줄이고 재현 가능한 데이터를 약속합니다.

초록

마우스의 대동맥 밴딩은 심장 압력 과부하로 인한 심장 비대 및 심부전 유도에 가장 일반적으로 사용되는 실험 모델 중 하나입니다. 이전에 사용 된 기술은 협착을 만들기 위해 무딘 27G 바늘 위에 묶인 대동맥 궁 주위의 나사산 봉합사를 기반으로합니다. 이 방법은 외과 의사가 수동으로 실을 조이는 것에 달려 있으므로 직경 크기의 차이가 커집니다. Melleby et al.이 설명한 새롭게 정제 된 방법은 수술 후 변동성이 적고 재현성이 높아집니다. 새로운 기술인 O-링 대동맥 밴딩(ORAB)은 실이 있는 봉합사 대신 미끄럼 방지 고무 링을 사용하여 압력 과부하의 변화를 줄이고 심장 비대의 재현 가능한 표현형을 제공합니다. 수술 중 O- 링은 상완 동맥과 왼쪽 경동맥 사이에 위치합니다. 성공적인 수축은 심 초음파로 확인됩니다. 1일 후, 링을 올바르게 배치하면 O-링으로 인한 협착에 대한 횡대동맥의 유속이 증가합니다. 2 주 후, 손상된 심장 기능은 박출률 감소 및 벽 두께 증가로 입증됩니다. 중요하게도, 직경 크기의 변동이 적을 뿐만 아니라, ORAB는 횡대동맥 수축(TAC)에 비해 수술 중 및 수술 후 사망률이 낮다는 것과 관련이 있습니다. 따라서 ORAB는 일반적으로 사용되는 TAC 수술보다 우수한 방법을 나타내며 결과적으로 재현 가능한 결과와 필요한 동물 수를 줄일 수 있습니다.

서문

생리적 심장 비대는 발달, 운동 및 임신 중에 관찰 될 수 있지만 병리학 적 심장 비대는 동맥 고혈압, 판막 심장 질환 또는 유전자 돌연변이와 같은 혈역학 적 스트레스 상태에 반응합니다. 처음에 심장은 심장 기능을 유지하기 위해 심근 세포 크기가 증가하고 심실 벽이 두꺼워지는 것을 특징으로하는 리모델링을 거칩니다 ^1,2. 반면에 병리학 적 심장 리모델링은 부정맥, 갑작스런 사망 및 높은 사망률의 위험 증가와 관련이 있습니다. 마지막으로, 시간이 지남에 따라 심실 확장, 수축 기능의 강력한 감소, 그리고 결국 높은 이환율, 사망률 및^{사회적 비용과 관련된} 심부전(HF)으로의 진행을 초래합니다3. 따라서 새로운 치료 전략을 개발하기 위해서는 분자 배경을 이해하는 것이 시급합니다⁴.

대동맥 밴딩은 마우스⁵에서 압력 과부하 유발 좌심실 (LV) 비대 및 심부전을 모방하는 모델입니다. 이 방법을 사용하면 생체 내에서 압력 과부하 유발 심장 리모델링의 병리 메커니즘을 검사 할 수 있습니다. 마우스의 첫 번째 대동맥 밴딩 절차는 Rockman et ^al.6에 의해보고되었습니다. 압력 과부하는 대동맥 주위의 실 봉합 기반 결찰에 의해 유도됩니다 (상완 두개와 왼쪽 총 경동맥 사이). 0.4mm 직경의 협착을 만들기 위해 봉합사를 27G 바늘과 대동맥 주위에 놓습니다. 결찰 후 바늘을 제거합니다 ^6,7.

바늘 직경이 고정되어 있더라도 실의 조임은 외과 의사에 크게 의존하므로 심장 비대의 유도 표현형에 영향을 미칩니다. 또한 실/봉합사 기반 방법에서는 수술 후 협착 직경의 정도가 다양하여^사망률의 높은 변동과 관련이 있습니다^8,9. 또한이 방법을 훈련하는 것은 특히 나사를 조이는 데 올바른 수준과 일관성을 찾는 것과 관련하여 어렵습니다. 마지막으로, 훈련 시작시 대동맥의 파괴 또는 기타 조직 손상으로 인한 수술 중 및 수술 후 사망률이 높고 생존 동물의 협착 정도가 크게 변합니다.

최근에, 대동맥 밴딩의 최적화 된 절차가 Melleby et ^al.10에 의해 기술되었다. 그들은 내경이 0.71mm, 0.66mm 및 0.61mm인 고정 미끄럼 방지 고무 O-링을 사용하여 협착의 변동이 적고 압력 과부하의 재현성이 높은 ORAB(O-링 대동맥 밴딩) 방법을 제시했습니다. 요컨대, O- 링을 잘라내어 오름차순 아치 주위에 놓고 나사산으로 다시 닫습니다. 이러한 O-링을 사용하는 다른 과학자들은 유도된 심장 비대에서 더 적은 변동성을 보고^{했습니다9.} 그들은 또한 수술 중 및 수술 후 사망률뿐만 아니라 유도 된 비대 표현형 ^9,11의 재현성이 향상되고 변동이 적다는 것을 관찰했습니다. 이 기사에서는 단계별 프로토콜에서이 고유 한 전략의 절차를 설명합니다. 이 보고서에서 공유 된 전문 지식은 다른 과학자들이이 분야에서 기술을 향상시키는 데 도움이 될 것입니다.

6주 후 심부전을 유발하는 심장 비대를 유도하려면 12주 된 C57BL/6N 수컷 마우스를 수술에 권장합니다. 마우스 하위 균주 C57BL/6N과 C57BL/6J 사이의 대동맥 밴딩 2주 후 비교는 C57BL/6N 마우스에서 심각한 심장 기능 장애 및 관련 사망률 증가를 보여주었습니다. 따라서 이들은 심부전 모델에 더 적합합니다¹². 12 주 된 수컷과 암컷 마우스는 대동맥의 노출과 특수기구로 O- 링을 배치하기에 최적의 크기를 가지고 있습니다.

프로토콜

동물 실험은 지역 위원회(Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, 허가 번호: V242-21249/2020 [38-4/20])의 원칙에 따라 수행되었습니다. 본 연구에 사용된 마우스는 상업적 공급원으로부터 수득하였다( 재료 표 참조). 동물들은 12 시간 빛, 12 시간 야간 사이클을 갖는 표준 조건 하에서 유지되었다; 물과 음식은 자유롭게 제공되었습니다.

1. 동물 관리

1. 침구, 둥지 재료, 은신처, 식수 및 음식에 대한 적절한 접근이있는 특수 케이지에 생쥐를 수용하십시오.
2. 동물을 지속적으로 전문화 된 수의사 통제 및 치료하에 두십시오.
   알림: 외부 공급 업체가 주문한 마우스의 경우 절차를 시작하기 전에 7 일의 순응을 보장하십시오.

2. O-링의 준비

알림: 0.4 주 후에 심장 비대를 유도하기 위해 고정 직경 2mm의 O- 링을 권장합니다. 유도된 심장 표현형의 범위 및 중증도는 O-링 직경의 크기에 의존한다.

1. 먼저 대동맥 주위에 배치할 수 있도록 가위나 메스를 사용하여 현미경으로 O-링( 재료 표 참조)을 한 번 절단합니다(그림 1A, B).
2. 8-0으로 연결된 바늘로 컷에 가까운 각 링 측면을 뚫습니다. 비 흡수성 봉합사와 실을 당깁니다. 마지막 단계에서 대동맥 주위에 O- 링을 고정하기 위해 한쪽에 2-3cm, 다른쪽에 2cm를 자르고 남겨 둡니다 (그림 1C, D).
3. 수술 전에 결찰 보조제 (종 도구, 재료 표 참조)를 사용하여 수축 구멍을 통해 한쪽 링면의 실 끝 (더 오래 유지됨)을 당깁니다 (그림 1E, F). 다음 단계(6단계)에서 배치하기 위해 부착된 O-링이 있는 결찰 보조 장치를 따로 두십시오.
4. 링과 실을 소독하려면 링을 알코올 용액에 30 분 동안 두십시오. 그런 다음 셀룰로오스에 놓아 건조시킵니다. 사용할 때까지 말린 링을 밀폐된 욕조나 케이스에 보관하십시오. 수술 중 결찰 보조 장치를 통해 실을 당긴 후 사용할 때까지 깨끗한 표면에 링을 놓습니다.

그림 1: 결찰을 위한 O-링 준비 수행 . (A) 직경이 고정 된 O- 링을 한쪽면에 가위 또는 메스로 자릅니다. (B) O-링의 이미지. (C) 각 O-링 측면은 8-0으로 피어싱됩니다. 프롤렌 스레드. (D) 두 개의 나사산으로 뚫린 O-링. (E) O- 링의 한 링 측면의 나사산이 결찰 보조기구의 구멍을 통해 당겨집니다. (F) 배치 전 최종 위치 : 한쪽의 나사산은 결찰 보조 장치의 구멍을 통해 배치되고 다른 쪽의 나사산은 느슨하게 유지됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

3. 마우스의 사전 투약 및 수술 분야의 준비

1. 수술 중 충분한 진통제를 받으려면 수술을 진행하기 20 분 전에 진통제 부 프레 노르 핀 (0.1mg / kg, 재료 표 참조)을 복강 주사하십시오.
   참고 : 본 연구에서는 진통제가 Gesellschaft für Versuchstierkunde / Society of Laboratory Animal Science (GV-SOLAS)의 권고에 따라 사용되었습니다.
2. 사전 투약 후, 마우스를 유도 챔버에서 100 % O 2의 0.5-1.0 L / min과 혼합 된₂ % -4 % 이소 플루 란으로 마취시킨다.
3. 진정 된 마우스의 왼쪽 흉부에있는 털을 면도하십시오. 면도 후 마우스를 이소 플루 란으로 채워진 챔버에 다시 넣고 동물에게 삽관하기 전에 충분한 진정 작용을 기다립니다.
   알림: 진정제의 적절한 시점은 느린 호흡을 나타내지 만 스냅 호흡을 피합니다. 이소플루란 가스 설정에 따라 적절한 수준의 진정 작용을 달성하는 데 2-3분이 걸립니다.
4. 동물의 체온 (37 ° C)을 유지하기 위해 수술 전에 가열 패드를 켜십시오. 가열 패드를 직장 프로브( 재료 표 참조)에 연결하여 마우스의 체온을 자동으로 유지합니다.

4. 생쥐의 삽관

1. 필요한 기기를 준비합니다(그림 2A). 수술 전에 후두경을 약 1-3 분 동안 알코올에 넣은 다음 밤새 건조시켜 소독하십시오.
2. 가열 패드 주위에 고무 밴드를 펴서 마우스를 플레이트의 앞니에 고정합니다. 진정 된 마우스를 앙와위 자세로 가열 패드에 놓습니다.
3. 동물의 앞니 위에 고무 밴드를 놓아 접시의 목을 확장합니다.
4. 기관 내 삽관을위한 기관 개구부를 잘 볼 수 있도록 광원을 목구멍에 집중시킵니다 (그림 2B).
5. 한 손으로 삽관 보조제(수제 후두경, 재료 표 참조)를 놓고 입을 부드럽게 벌립니다(그림 2A[3]).
6. 다른 손과 작은 집게로 혀를 부드럽게 움직여 기관의 개구부를 청소하십시오.
7. 이 손을 사용하여 기관 내 튜브를 기관에 도입하십시오. 반면에 삽관 보조기구를 여전히 잡고 있습니다. 삽관의 경우 22G 캐뉼러를 사용하십시오( 재료 표 참조)(그림 2A[1]).
8. 3방향 스톱콕을 통해 기관내 튜브 위치를 생쥐용 인공호흡기( 재료 표 참조)에 연결하여 올바른 기관내 튜브 위치(기관내)를 확인합니다.
9. 제조업체의 지침(일회 호흡량 200μL 및 호흡수 100-150회/분)에 따라 올바른 환기를 모니터링합니다(그림 2C).
10. 발가락 꼬집음 반사 검사(반사 반응 없음)로 충분한 마취 깊이를 확인합니다.
11. 마취 설정을 0.5-1.0 L / min 100 % O 2와 혼합 된₂ % 이소 플루 란으로 돌립니다.
12. 수술 중 건조를 피하기 위해 눈에 안과 연고를 바르십시오.
13. 면봉을 사용하여 시중에서 판매하는 소독액으로 수술 부위를 3 번 소독하십시오 ( 재료 표 참조).

그림 2: 마우스 삽관. (A) 삽관기구 : (1) 22G IV 캐뉼러는 기관 내 튜브 (만다린 제외)로 사용됩니다. (2) 집게; (3) 수제 후두경 (나무 막대기와 테이프로 접착 된 변형 / 평평한 캐뉼러). (B) 위치 가열 패드에 삽관을 수행합니다. (C) 인공 호흡기에 연결된 삽관 된 마우스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

5. 수술 및 링 위치 결정 준비

알림: 감염을 피하기 위해 멸균 물질과기구를 사용하십시오.

1. 가위를 사용하여 xyphoid 과정과 왼쪽 겨드랑이 사이의 선 중간에 0.5-1cm 길이의 피부 절개를하십시오. 집게를 사용하여 밑에있는 갈비뼈에서 근육층을 분리하고 두 개의 견인기 (길이 5mm, 재료 표 참조)를 절개 부위에 삽입하여 흉곽을 노출시킵니다.
2. 왼쪽 개흉술을 시작하려면 마이크로 스프링 가위를 사용하여 두 번째와 세 번째 갈비뼈 사이의 늑간근에 작은 절개 (~ 1-2mm)를 수행하십시오. 흉강을 열고 45° 각도의 집게로 절개 부위를 펼칩니다.
3. 3 개의 흉부 견인기 (길이 1.0-2.5mm)를 절개 부위에 삽입하여 흉강을 열어 시각화를 개선합니다.
4. 대동맥궁을 노출시키려면 45° 각도의 가는 팁 겸자로 흉선과 지방 조직을 들어 올려 아치에서 부드럽게 분리하십시오.

6. O- 링과 횡단 대동맥의 연결

1. 한 손에 45° 각도의 집게로 대동맥궁을 노출시킵니다. 다른 한편으로는 한쪽의 나사산을 통해 결찰 보조제와 연결된 O-링을 위치시킵니다(단계 2).
2. 대동맥 궁 아래의 결찰 보조 장치를 사용하여 꼬리 쪽에서 상완 두부 동맥과 왼쪽 총 경동맥 사이의 횡 대동맥의 두개골 쪽으로 실을 통과시킵니다 (그림 3A).
3. 집게로 결찰 보조기구와 대동맥궁 사이의 두 실을 조심스럽게 잡습니다. 결찰 보조장치를 수축 및 제거하고 양쪽의 나사산을 당겨 아치 주위에 O-링을 부드럽게 배치합니다(그림 3B).
4. 성공적으로 위치를 잡은 후 나사산과 수술 매듭으로 O- 링을 고정하십시오. 양쪽의 매듭이 열리지 않도록 추가로 매듭을 만드십시오(그림 3C).

그림 3: O-링 이식 수행. (A) 대동맥궁은 1.0-2.5mm의 3개의 견인기에 의해 노출됩니다. 한쪽 고리면의 긴 실이 모두 대동맥 아래를 통과합니다. (B) O- 링은 링을 부드럽게 밀고 나사산을 당겨 배치됩니다. (C) is O-링이 올바른 위치에 있고 하나의 두개골이 양쪽에 꼬리 실로 매듭이 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

7. 봉합 및 수술 후 회복

1. 절개 부위에서 3 개의 가슴 견인기 (길이 2.5mm)를 제거하십시오.
2. 필요한 경우 따뜻한 0.9 % 등장 성 염 용액으로 채워 흉부에서 잔류 공기를 제거하십시오.
3. 봉합을 위해 흉부 절개를 노출하려면 두 개의 견인기 (길이 5mm)를 다시 가져 와서 피부를 옆으로 잡으십시오.
4. 2 개 또는 3 개의 6-0 비 흡수성 봉합사 ( 재료 표 참조)로 흉부를 닫고 인공 호흡기의 유출을 2 초 동안 꼬집어 폐를 다시 팽창시킵니다.
5. 2개의 견인기를 제거하고 3-5개의 4-0-흡수성 봉합사로 피부를 닫습니다.
6. 이소플루란을 끄고 모니터합니다. 동물이자가 호흡을 시작하면 수염이 움직이고 발가락 핀치 반사가 유발되어 마우스를 발관 할 수 있습니다. 관리 장치의 열 램프 아래 마우스를 왼쪽에 놓고 완전히 깨어날 때까지 관찰하십시오.
7. 충분한 의식을 회복 할 때까지 동물을 방치하지 마십시오.
   알림: 수술을받은 동물은 더 나은 회복을 위해 자체 치료 장치 (케이지)를 받아야합니다.
8. 필요한 경우 7일 동안 식수에서 트라마돌(1mg/mL)으로, 수술 후 3일 동안 복강 주사로 부프레노르핀(0.1mg/kg, 하루 3회)으로 통증 관리를 수행합니다.
   참고: 수술 후 진통제에 대한 지역 동물 윤리 위원회의 권장 사항을 따르십시오.
9. 매일 물병의 무게를 측정하여 약물을 확인하고 동물의 행동을 관찰하십시오.

8. 링의 성공적인 수축 및 올바른 위치 확인

1. 수술 후 하루, 협착에 대한 최대 유속을 측정하여 초음파를 사용하여 협착을 확인합니다.
2. 측정을 위해 초음파 시스템과 30MHz 주파수의 변환기 프로브가있는 심 초음파를 사용하십시오 ( 재료 표 참조).
3. 전술 한 바와 같이, 100 % O 2의 0.5-1.0 L / min으로 1.5 % -₂ % 이소 플루 란에서 마스크를 사용하여 마취를 유지하십시오.
4. 마취 된 동물을 앙와위 자세로 가열 패드에 놓습니다. 가열 패드를 직장 프로브와 연결하여 체온을 37 ° C± 1 ° C로 유지하고 4 개의 마우스 발 센서를 사용하여 ECG로 심박수를 모니터링합니다 ( 재료 표 참조).
5. 더 나은 시각화를 위해 탈모 크림을 사용하십시오.
6. 성공적으로 수행된 ORAB는 초음파(~2,400mm/s)로 측정한 협착에 비해 유속이 증가합니다(그림 4C). 이 측정을 위해 변환기 헤드를 오른쪽 흉부에 파라스터미로 배치하여 2차원(2D) 이미징("B-모드")으로 대동맥궁의 위치를 파악합니다.
   1. 컬러 도플러를 사용하여 대동맥의 혈류를 시각화하고 협착증에 대한 펄스파 도플러 혈류 속도로 측정합니다.
      알림: 가짜 수술 마우스(수축 없는 대조 수술)는 ~600-900mm/s의 혈류 속도를 보여줍니다. 또한 성공적인 ORAB는 마우스의 오른쪽 경동맥 (~ 150mm / s) (RC, 그림 4A)과 왼쪽 경동맥 (~ 300mm / s) LC, 그림 4B) 사이의 속도 흐름 비율을 증가시킵니다.
7. 2차원(2D) 이미징(B-모드)으로 오른쪽 및 왼쪽 동맥 경동맥을 시각화합니다. 트랜스듀서 헤드를 목의 왼쪽과 오른쪽에 45° 각도로 수평으로 놓고 펄스파 도플러를 사용하여 혈류 속도를 결정합니다.
   참고: 가짜 수술 마우스에서 두 동맥의 속도 흐름은 비슷합니다.

그림 4: 경동맥의 맥파 도플러 속도 측정을 사용한 횡대동맥 결찰 확인. (A) 우측 경동맥의 대표적인 맥파 도플러 속도 신호. (B) 협착은 왼쪽보다 오른쪽 경동맥에서 더 높은 유속을 초래합니다. (C) 수축에 의해 유도 된 협착은 하행 대동맥의 유속이 2,400mm / s 이상을 초래합니다. 가짜 마우스는 600-900 mm / s의 유속을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

결과

일반적으로 대동맥 밴딩은 인간 대동맥 협착증을 모방하고 마우스에서 심장 비대를 유도합니다. 성공적인 절차는 심장 비대 및 심장 기능 감소 ^5,6에 의해 반영된 심장 조직 리모델링을 특징으로합니다.

수술 후 1 일 직후, 횡 대동맥의 O- 링 수축의 효과는 심 초음파¹³에 의해 생체 내에서 결정될 수 있습니다...

토론

스레드 / 봉합사 기반 대동맥 밴딩은 마우스에서 압력 과부하 심장 비대를 유도하기 위해 수년 동안 사용되어 왔습니다. 생체 내에서 심장 리모델링 및 질병 진행의 병리 메커니즘을 조사하는 확립 된 방법입니다. 한계는 협착 정도의 상대적으로 높은 차이와 결과적으로 리모델링입니다. Melleby et ^al.10 에 의해 처음 기술된 최근 도입된 ORAB 기술은 고무 O-링을 사용하여 기?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 x long Fixators, 6 cm		18200-01
2 x Blunt Retractors, 5 mm wide		18200-11
2 x Short Fixators, 3 cm		18200-02
2 x fine tip 45° angled forceps	FST (fine sience tools)	11160-10
3 x Blunt Retractors, 2.5 mm wide		18200-10
3 x Retractor Wires		18200-05
4-0 absorbable suture (Vicryl)	ETHICON	SABBKLT0	Used to suture skin
6-0 suture (Prolene), needle size:13 mm	ETHICON	JDP879	Used to suture chest muscle
8-0 suture (Prolene), needle size: 6.5 mm	ETHICON	RHBECH	Used to fast the Ring
Anesthetizing Box, Small	Havard apparatus	50-0108
C57BL/6N mice	Charles River
Fluosorber Activated Charcoal Filter Canister	Havard apparatus	34-0415	Used to induce and maintain anesthesia
Handmade laryngsopcope			Intubationshelp
Harvard Apparatus Anesthetic Vaporizer	Havard apparatus		Used to induce and maintain anesthesia
Heating pad + rectal probe (LSI Letica Scientific Instruments:Temperature control unit HB 101/2 )	Panlab/ Havard apparatus		Used to control and maintain body temperature
i.v. cannula blue 22-gauge (Vasofix Braunüle 0.9 x 25 mm)	B/Braunsharing Expertise	4268091B	intubation
isofluran	Baxter		Anesthesia
Kodan (betadine solution)	Schülke	20003960-A	Desinfection
ligation aid	FST (fine sience tools)	18062-12	Used to perform liagtion with O-ring
Microscope Lighting: Schott VisiLED Set MC1500/S80-55 (+ controller)	SCHOTT		Ligth
Microscope camera (Leica IC80 HD)	Leica		Used for visualiation operating field
MiniVac Complete Anesthesia Systems for small rodents	Havard apparatus	75-0233	Used to induce and maintain anesthesia
Mouse Ventilator MiniVent Type 845	Havard Apparatus	73-0044	Used to ventilation during surgery
Needle holder	FST (fine sience tools)	TE-10804
O-ring, non-slip rubber (0.0018 mm x 0.020 mm)	Apple Rubber Products		Liagtion of the aortic arch
Scissors	FST (fine sience tools)	14040-09	Used to cut the skin and threads
Small Animal Retraction System (Kit for Animals up to 200 g)	FST (fine sience tools)	18200-20
Small Base Plate, 20 x 30 cm		18200-03
Table intgerated with heating pad + rectal probe + ECG and  transducer tripod	FujiFilm Visual Sonics Imaging System		Echocardiography
Temgesic (Buprenorphin)	Indivior UK Limited	997.00.00	Pain pre-medication
three-way stop cock (blue)
Tramal (Tamadol)	Grünental		Pain post-medication
transducer probe MS400 (Visual Sonics)	FujiFilm Visual Sonics Imaging System		Echocardiography
Ultrasound system with cardioligy package	FujiFilm Visual Sonics Imaging System		Echocardiography
Vannas Spring Scissors - 2.5 mm Cutting Edge	FST (fine sience tools)	15000-08	Used to cut intercostal chest muscle
vet ointment	Bepanten		Used to prevent eyes from drying out