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요약

여기에서는 Marsdenia tenacissima (Roxb.)를 사용하여 톡 쏘는 사포닌이 풍부한 생물 변형 제품을 생산하기 위한 체계적이고 포괄적인 공동 발효 시스템을 구축하기 위한 프로토콜을 설명합니다. Wight et Arn. (MT) Ganoderma lucidum의 발효 매체로. 이것은 다른 민족 약물 개발을 위한 방법론적 참고 자료가 될 것입니다.

초록

Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Arn. (MT)는 중국 전통 약초와 다이족 약초로 항염증, 항균, 항종양 특성이 있습니다. 그러나 대부분의 주요 활성 물질은 테나시제닌 A 및 테나시제닌 B와 같은 아글리콘입니다. MT의 생체이용률이 낮고 의약 활성 성분을 합성하기 어렵기 때문에 주로 생체 내 변형에 의해 연구됩니다. 본 연구는 MT를 Ganoderma lucidum (G. lucidum)의 발효 매질로 사용하여 매운 사포닌이 풍부한 생물 변형 제품을 생산하는 것을 목표로 합니다.

3가지 약용 곰팡이에 대한 예비 스크리닝을 통해 G. lucidumOphiocordyceps sinensis (O. sinensis)가 일반적으로 MT의 배지에서 자랄 수 있음이 밝혀졌습니다. 따라서, 두 가지 유형의 곰팡이의 발효 효능은 폐암의 마우스 모델을 사용하여 스크리닝되었습니다. 마지막으로, 추가 조사를 위해 G. lucidum 과 MT의 동시 발효를 선택했습니다. G. lucidum co-fermentation과 함께 MT 산물에 대해 비표적 대사체학 분석을 수행했습니다. 발효 산물 에서 MT의 12가지 특정 사포닌을 확인하고 발효 산물에서 단량체 화합물인 tenacigenin A를 얻었습니다.

대부분의 테나시제닌은 테나시제닌 A와 테나시제닌 B 수치를 통해 상당한 상승 추세를 보였다. 그 결과, G. lucidum에 의한 발효 후 MT의 효능이 향상되는 것으로 나타났습니다. 또한, MT에서 C21 스테로이드 배당체의 생체 내 변환은 이 발효 과정에서 중심 반응이었습니다. 요약하면, 본 연구는 MT에 대한 체계적이고 종합적인 공동발효 시스템과 약력학 평가 방법을 확립하였으며, 이를 통해 MT의 유효활성물질의 활용도를 높였을 뿐만 아니라 다른 민족 약물 개발을 위한 방법론적 참고자료를 제공하였다.

서문

폐암은 중국 전통 의학에서 "폐 수석"의 범주에 속합니다. 폐 수석의 발병기전은 환자의 건강한 "기"의 약화, 음과 양의 불균형, 독소, 폐의 정체로 인해 폐 기능 장애, 혈액 막힘 및 폐의 체액 손실로 이어집니다. 따라서 장기간의 혈액 정체와 폐의 가래 독소는 폐 덩어리1을 형성합니다. 따라서 기를 강화하고 병원성 요인을 제거하는 것이 폐암 치료의 기본 원칙입니다. 음(陰)에 영양을 공급하여 음(陰)과 양의 균형을 잡고, 열을 제거하고, 침체를 해독 및 분산시키고, 기(氣)를 보충하고 음에 영양을 공급하고, 가래를 제거하는 방법 등이 폐 연골의 형성을 치료하고 예방하는 데 사용된다2.

Marsdenia tenacissima (MT)는 Wuguteng으로도 알려진 Asclepiadaceae (Marsdenia ssp.)에 속하는 약용 식물입니다. 열을 맑게 하고 해독하는 효과가 있으며 기침과 천식을 완화하는 효과가 있으며 항종양 특성이 있습니다3. Xiaoaiping 주사, MT의 단 하나 나물에게서 한 준비는, 계속 진료소....

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프로토콜

본 연구는 민주대학교 실험동물센터(Criminal Center of Minzu University)의 권고에 따라 수행되었다(No. ECMUC2019008AA). 이 프로토콜은 민주대학교의 실험동물윤리위원회(Experimental Animal Ethical Committee)의 승인을 받았다. MT는 윈난성 쿤밍에서 수집되었습니다.

1. 연구 준비

  1. 뜨거운 물(100°C; MT/물 = 1/10, w/v)를 30분 동안 측정하고 MT 추출 잔류물을 시험 물질로 수집합니다.
  2. 10% 소 태아 혈청, 100 U/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신이 보충된 Dulbecco의 변형 이글 배지(DMEM)에서 LLC 마우스 폐암 세포주를 5%CO2 미만의 37°C의 가습 분위기에서 유지합니다.
  3. 57-8주 령, 체중 19 ± 2g의 C57BL/6J 마우스를 12시간/12시간 라이트/다크 주기와 음식과 물을 무제한으로 이용할 수 있는 환경 제어가 가능한 방에 보관하십시오. 정기적으로 소독하십시오.

2. 균주의 ....

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결과

균주의 예비 선별 결과
MT와 함께 발효할 수 있는 곰팡이를 탐색하기 위해 G. lucidum, I. obliquusO. sinensis의 세 가지 곰팡이를 선택했습니다. 먼저, 균주를 활성화시켰다: G. lucidum, I. obliquus O. sinensis도 1A-C에 도시된 바와 같이 PDA 배지에 접종하고; 도.......

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토론

균주 선별 실험 후, 우리는 모든 약용 곰팡이가 허브 물질에서 정상적으로 생존할 수 있는 것은 아니라는 것을 발견했습니다. 추가 매체가 없는 경우 약균의 생존은 필요한 탄소와 질소원을 합성하기 위해 자체 효소를 통해 의약 물질의 성분을 분해하는 데 달려 있습니다. I. obliquus 는 MT의 사포닌을 분해할 수 있는 효소를 포함하지 않을 수 있음을 추론할 수 있습니.......

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공개

저자들은 이 논문에 보고된 연구에 영향을 미칠 수 있는 경쟁적인 재정적 이해관계나 개인적 관계를 알려진 바가 없다고 선언합니다.

감사의 말

이 연구는 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, 81973977)의 보조금으로 지원되었습니다. MT 샘플은 Tongxiang-Liu 교수에 의해 식별되어 중국 민주대학교 약학대학에 보관되었습니다.

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자료

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileTonguang Fine Chemicals Company, Beijing, China20200923
AgarSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd., USANO.20080107
AutoclaveBinJiang Medical Co., Ltd., Jiangyin, ChinaLS-50LD
constant shaking incubatorZhicheng Inc. All rights reserved., Shanghai, ChinaZWY-100D
Ganoderma lucidumBeNa Culture Collection, Beijing, China31732
Inonotus obliquusBeNa Culture Collection, Beijing, China117822
LLC Mouse lung cancer cellNational Infrastructure of Cell Line Resource, Beijing, ChinaPUMC000673
Male C57BL/6J miceVital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd., Beiijng, ChinaNo.110011210107024684
MethanolTonguang Fine Chemicals Company, Beijing, China20210723
Ophiocordyceps sinensisBeNa Culture Collection, Beijing, China118371
Poly tetra fluoroethyleneJinteng Experiment Equipment Co., Ltd., Tianjing,ChinaNo.997
QTRAP 5500 LC/MSAB Sciex Pte. Ltd., USACV20231711
Rotary EvaporatorBUCHI Co., Ltd., Shanghai, ChinaR-300
SyringeZhiyu Medical Instrument Co., Ltd., Jinagsu, ChinaV500111
Ultra-clean benchBOXUN Medica Bioological Instrument Co., Ltd., Shanghai, ChinaSW-CJ-LFD

참고문헌

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