이 작품은 하워드 휴즈 의학 연구소와 배아 조혈 연구에 대한 NIH에서 교부금에 의해 지원됩니다.

1 부. 사출 재료의 준비 <ol><li> TG (globin : GFP) 세포 : </li><li> 길 뒤에 찔린 물고기 헤파린 (1unit/ul)에 코팅 10ul 피펫 팁을 사용하여 성인 기증자 물고기 출혈. </li><li> 적혈구를 기음과 셀 버퍼에 분배 (0.9X PBS + 5% FBS + 1 %의 펜 / Strep). </li><li> 필터 셀 40uM 메쉬 이상의 정지 및 이전 르블랑 외 의해 설명한대로 hemocytometer를 사용하여 세포의 농도를 결정한다. </li><li> 스핀 다운 및 최종 사출 량이 5ul 이상 없다는 등 원하는 농도에서 세포 버퍼에 resuspend. 여기 1.5-2000000 세포 /받는 사람을 주입. </li><li> dextran, 텍사스 레드 ® 들어, 10-12 MG / ML의 최종 주입 농도에 대한 DPBS에 염료를 해산. 물고기마다 네 UL을 주입 계획입니다. </li></ol> 2 부. 주사 <ol><li> (4.2ml (4mg/ml) tricaine/100ml 물고기 물) tricaine 물고기를 마취. </li><li> 와시 해밀턴 주사기 이전 70 % 에탄올을 사용하여 주사하는 3-4 회. 0.9X DPBS로 3-4 회 린스. </li><li> 플레이스 최대 생선 등의 측면과 젖은 스폰지에 바로 직면. </li><li> 오른손과 플런저에 검지 손가락으로 해밀턴 주사기 들고. 천천히 왼쪽 손으로 물고기의 시체를 안정화. </li><li> 물고기의 눈이 시계라면, 바늘이 7시 위치와 물고기 (그림 1)에 45도 각도 가리키는 것이 같은를 직면하고있는 베벨과 바늘을 위치. </li><li> 부드럽게 7시 위치에 바늘 1~2밀리미터를 삽입하고 천천히 플런저를 우울. </li><li> 신선한 E3 물에 복구하는 물고기를 허용합니다. </li><li> 다른 시약의 주사 사이에 위에서 설명한 바와 같이, 바늘을 씻으십시오. </li><li> 셀 clumping을 방지하기 위해 세포마다 몇 분 resuspend에 플릭 셀 솔루션입니다. </li><li> 감염을 피하기 위해 매일 물을 변경 1 주일 동안 흐름에서 생선 보관하십시오. 우리는 (10mL 스트레스 코트 + 5mL pemafix + 38리터 E3 물 당 5mL melafix)이 기간 동안 ICU 소금물에 생선을 보관. </li></ol> 부 3. 대표 결과 제대로 수행하면, 그것이 어떤 식으로든 표시되었는지 주입 자료를 시각화 할 수 있습니다. 예를 들어, TG (globin : GFP) 적혈구는 그림 2와 같이 빨리 주입 후받는 캐스퍼 물고기의 vasculature의 순환 형광등 해부 현미경 아래에서 볼 수 있습니다. 마찬가지로, 텍사스 레드 ®에 복합 70kDa dextran의 주입은 역전사 궤도 분사 바로 다음에 투명 물고기 (그림 3)의 vasculature에 시각하실 수 있습니다. TG (β - 굴지 : GFP)에서 형광 신장 세포 기증자 물고기도 조사 캐스퍼받는 생선으로 역전사 orbitally 주입 수 있습니다. 이 세포는 결국 다음 몇 주 (그림 4B) 후 신장을 repopulate하기 위해받는 사람 골수 (그림 4A)로 가정에 갈 수 있습니다. 주사가 너무 얕은하거나 바늘의 각도는 복고풍 - 궤도 정맥 부비동의 캐비티를 무시하는 경우, 주입 물질은 눈 주위 풀링 또는 밖으로 흐르는 시각 수 있습니다. 주사가 너무 깊은 경우 그들은 여전히​​ 복구할 수 있지만 또한, 물고기, 조직 손상이나 과도한 출혈이 발생할 수 있습니다. 제대로 수행되면, 복고풍 - orbital은 주사 후 사망률 총 주입 생선과 혈류에 납품 성공의 5 % 이하의 총 주입 물고기보다 90 % 이상되어야한다. <img src="/files/ftp_upload/1645/1645fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 : 역전사 궤도 분사 기법의 일러스트 레이션. 물고기의 오른쪽 눈은 일곱 O 클럭 위치가 올바른 주사 장소에 해당하는 아날로그 시계로 표현된다. <img src="/files/ftp_upload/1645/1645fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : TG (globin : GFP) 삼일 역 궤도 분사 이후 성인 캐스퍼 물고기의 꼬리 vasculature에 순환 적혈구. <img src="/files/ftp_upload/1645/1645fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 레드 텍사스에 복합 70kDa dextran ® 염료는 투명 성인 생선, 캐스퍼의 형광 vasculature을 생산하고 쉽게 표준 전체 동물의 형광 현미경을 사용하여 볼로 사용 성공적으로 주입. <img src="/files/ftp_upload/1645/1645fig4a.jpg" alt="그림 4A" /> 그림 4A : TG (β - 굴지 : GFP)의 전체 신장 골수 세포의 복고풍 - 궤도 분사 다음과 같은 세 가지 일 기증자 물고기, 세포가 조사 성인 캐스퍼받는 물고기의 신장 골수에 돌입 시각하실 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1645/1645fig4b.jpg" alt="그림 4B" /> 그림4B : TG (β - 굴지 : GFP)의 전체 신장 골수 세포의 복고풍 - 궤도 분사 다음 4 주 기증자 생선, 녹색 기증자 전체 신장 골수 세포로받는 신장의 repopulation이 조사 성인 캐스퍼받는 물고기의 시각하실 수 있습니다.

<ol>
	<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+route+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab Animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Pinkerton, W., Webber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+injecting+small+laboratory+animals+by+the+ophthalmic+plexus+route.">A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).</li><li>White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish.">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li></ol>

성인 zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사는 사망률의 가장 낮은 발병률과 혈류에 주입 물질의 전달 가장 높은 효율을 제공합니다. 때문에 분사 지점의 성격, 주사 감염과 혈액 손실 금액의 발생을 감소 신속하게 치유가 나타납니다. 사이트도 반복 예를 들어, 약물의 매일 주사를위한 짧은 시간 동안 주입 수 있습니다. 약물의 다량은 간단하게 포장되어과 관심의 약물을 포함하는 ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>2106</td>
<td>Preweighed vial of 300 USP units</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Western Chemical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MS-222</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran, Texas Red&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>D1830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5mM NaCl 
0.17 mM Kcl 
0.33 mM CaCl2 
0.33 mM MgSO2
</td>
</tr>
<tr>
<td>Microliter Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>80300</td>
<td>701N 10uL SYR (26s/2&#x201D;/2)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

retro-orbital injection in adult zebrafish

전체 동물의 약물 치료 약리 화학 유전 연구에 대한 모델 시스템에 필수적인 도구입니다. 정맥 주사 (IV) 주사가 종종 관심의 대리인의 전달의 가장 효과적이고 비침 투 형태입니다. zebrafish에서 (<em&gt; Danio rerio</em&gt;), 약물의 IV 주입 길이 때문에 작은 혈관 직경의 도전을했습니다. 이것은 또한 hematopoeitic 줄기 세포 이식하는 동안 세포의 주입을위한 중요한 장애물을 입증했다. 역사적으로, 혈류로 주사는 심장을 통해 직접 수행했다. 심장이 자주 감염, 과다 출혈이나 치명적인 장기 손상하는 경향이 물고기를 떠나 주입하는 동안 구멍이다 그러나,이 내부 심장 절차는 매우 높은 사망률이 있습니다. 마우스로 우리의 경험에 그리기, 우리는 사출 사이트가 눈 뒤에과 복고풍 - 궤도 정맥 부비동에있는 zebrafish의 새로운 주사 절차를 개발했습니다. 이 역 - 궤도 (RO) 사출 기술은 성공적으로 성인 물고기에서 약물 주입뿐만 아니라 전체 신장 골수 세포의 이식 모두에 채용되었습니다. RO 주입은 전통적인 내부 심장 주사보다 훨씬 낮은 사망률이 있습니다. 복고풍 - orbitally 주입 물고기 적은 다음과 같은 주사를 출혈하는 경향이 있고 심장과 같은 주요 장기에 부상의 훨씬 더 낮은 위험에 처해질 수 있습니다. 또한, 정상적으로 수행하면, 주입된 세포 및 / 또는 약물 빠르게 화합물들이 틈새 시장을 집에서 쉽게 전체 생선과 신장의 세포를 그들의 효과를 발휘 수 있도록 혈류를 입력합니다. 성인 물고기의 혈류로 재료의 효율적인 전송을 허용하는 동안 따라서,이 새로운 사출 기술은 사망률을 최소화합니다. 여기 TG의 역전사 궤도 주입하여이 기술을 예시 (<em&gt; globin</em&gt; 성인에 GFP) 전지<em&gt; 캐스퍼</em&gt; 생선뿐만 아니라 적색 형광 색소의 주입 (dextran, 텍사스 레드<em&gt;</em&gt;) 성인에<em&gt; 캐스퍼</em&gt; 물고기. 그러면 모든 동물의 형광 현미경에 의해 성공적으로 주사를 시각화.

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Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

여기 우리는 성인 zebrafish에서 역전사 궤도 주사를하는 방법을 보여줍니다.

성인 Zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

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24.5K 조회수.  Children’s Hospital Boston. 여기 우리는 성인 zebrafish에서 역전사 궤도 주사를하는 방법을 보여줍니다.