시작하려면 제브라피쉬 장착 및 위치 지정에 필요한 실험과 재료를 준비합니다. 실체 현미경으로 마비된 제브라피쉬 유충을 관찰하여 움직임이 멈췄는지 확인합니다. 심장 박동을 확인하여 유충의 건강을 시각적으로 평가하십시오.
이어서, 이송 피펫을 사용하여, 단일 유충 제브라피쉬를 아가로스 겔이 들어 있는 1.5-밀리리터 마이크로원심분리 튜브에 넣는다. 아가로스 젤을 페트리 접시에 부어 1-2 밀리미터 코트를 만듭니다. 이송 피펫을 사용하여 마이크로 원심분리기 튜브에서 페트리 접시로 유충을 옮깁니다.
유충을 접시 중앙에 놓아야합니다. 집게를 사용하여 머리와 꼬리가 평평 해 지도록 유충을 원하는 방향으로 배치하십시오. 그런 다음 집게를 사용하여 유충을 돌려 양쪽 눈을 수평으로 만듭니다.
정렬이 완료된 후 페트리 접시에 계란 물을 채우기 전에 아가로스 젤이 응고될 때까지 기다리십시오. 이미지 획득을 위해 유충이 묻힌 접시를 현미경 스테이지에 놓습니다. 현미경을 켜고 시야 중앙에서 유충을 찾습니다.
이미지 획득 소프트웨어를 사용하여 이미징 파라미터를 설정합니다. 이미지가 포화되면 레이저 출력을 줄이십시오. 다음으로 스테이지를 움직여 유충의 뇌를 찾고, 소프트웨어에서 라이브 뷰 모드를 사용하여 초점면을 수동으로 위아래로 변경하여 두께를 결정합니다.
볼륨의 하한과 상한을 설정합니다. 그런 다음 설정된 시야에 대한 이미지 획득을 진행합니다. 체적 구조 이미징의 경우 각 Z면의 2D 이미지를 순차적으로 획득하여 전체 뇌의 3D 이미지를 획득합니다.
단일 Z-평면의 기능적 이미징을 위해 특정 깊이에서 뇌의 신경 활동에 대한 시계열 이미지를 획득합니다.
