Yeast Cell Culture and Cell Harvesting for Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification

YPD 플레이트의 대조군 및 재조합 효모 균주를 5mL의 YPR 배지에 접종하는 것으로 시작하여 섭씨 30도 및 200RPM에서 밤새 배양액을 성장시킵니다. 다음으로, 2밀리리터를 100밀리리터의 신선한 YPR 배지에 접종하고 섭씨 30도, 200RPM에서 밤새 배양하여 배양을 확대합니다. 각 균주에 대해 1, 800 밀리리터의 오토클레이브 효모 펩톤 배지와 200 밀리리터의 오토클레이브 20% 라피노스 용액을 2개의 5리터 삼각 플라스크에 분배합니다.

각 효모 균주를 각 배지에서 600나노미터에서 0.2 광학 밀도로 접종하고 200RPM에서 약 6시간 동안 또는 세포가 원하는 1.0 광학 밀도에 도달할 때까지 배양합니다. 2% 갈락토오스 200밀리리터와 효모 짝짓기 인자 알파 또는 YMFA 110마이크로리터를 동시에 첨가하여 G1 단계의 세포를 포획하고 2시간 동안 배양합니다. 세포 현탁액을 1개 리터 분리기 물통으로 옮기고 10 분 동안 6의, 000 G 및 4 섭씨 온도에 물통을 분리하십시오.

상층액을 버리고 세포 펠릿을 10-15 밀리리터의 증류수에 재현탁시킵니다. 그런 다음 25밀리리터 주사기를 루어 플러그로 밀봉하고 물을 채운 50밀리리터 원뿔형 튜브 안에 넣습니다. 셀 현탁액을 주사기 어셈블리로 옮깁니다.

원심분리기 버킷을 증류수 5ml로 세척하여 나머지 세포를 수집합니다. 그런 다음, 어셈블리를 실온에서 2, 397G에서 10분 동안 원심분리하고 상층액을 폐기합니다. 그런 다음 주사기에서 루어 플러그를 제거하고 세포를 액체 질소로 압출하여 세포 스파게티를 형성합니다.

마지막으로 냉동 셀 스파게티를 50밀리리터 원뿔형 튜브에 옮기고 나중에 사용할 때까지 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.