먼저 기기를 켜고 터치스크린 인터페이스에서 T 세포 transduction 프로세스를 선택합니다. 실행을 클릭하여 절차를 시작하고 제공된 화면의 지시를 따릅니다. 주변 입력 화면에서 작업자 이니셜, 튜빙 세트, 로트 번호 및 만료 날짜를 입력합니다.
그런 다음 프로세스 설정 화면에서 전체 프로세스를 선택합니다. 이제 CD4, CD8 선택 방법에 대한 선택 시약 바이알 2개를 선택합니다. 튜빙 세트를 설치하고 모든 루어 연결이 단단히 설정되었는지 확인하고 터치스크린의 지침에 따라 상부 및 하부 무결성 테스트를 완료합니다.
이제 화면 안내에 따라 매체 및 처리 버퍼 백을 부착하고 튜빙 세트의 자동 프라이밍을 시작합니다. 전사 세포 제품 화면이 나타나면 해동된 T 세포 제품을 150밀리리터 전사 백에 옮기고 튜브 세트의 도포 백에 멸균 용접합니다. 다음으로, 품질 관리 파우치를 사용하여 애플리케이션 백에서 샘플을 얻고 혈액학 분석기를 사용하여 세포 계수를 수행합니다.
CD4 및 CD8 시약 바이알을 튜빙 세트에 연결하고 T 세포 농축을 위한 선택 프로세스를 시작합니다. 농축 후 재도포 백 품질 관리 파우치에서 선택한 세포의 샘플을 제거합니다. 원하는 세포 농도와 시작 번호를 입력합니다.
이제 화면의 지시에 따라 활성화 시약의 바이알을 부착합니다. 그런 다음 이산화탄소 농도를 5%로 설정하고 배양실 온도를 섭씨 39도로 설정합니다. 향상된 급지 프로토콜을 시작점으로 사용하여 활동 매트릭스를 설정하고 개별 단계를 최적화된 특정 프로토콜로 수정합니다.
이 경우 형질도입 활성 시간을 파종 후 24시간으로 설정하고 배양 세척을 형질도입 후 48시간으로 설정합니다. 배양 세척을 시작한 후 30분 후에 Shaker 활성화 시간을 시작하도록 설정합니다. 중형 봉투 교환 및 폐기물 봉투 교환 활동은 더 이상 필요하지 않으므로 삭제합니다.
그런 다음 화면에서 확인을 눌러 재배를 시작합니다. 기기가 재도포 백에서 배양 챔버로 필요한 부피를 자동으로 펌핑하도록 합니다. 계산된 벡터 부피를 해동하고 차가운 배지가 있는 20밀리리터 시약 백에 담아 최종 부피 10밀리리터에 도달하도록 준비합니다.
활동 매트릭스를 조정하여 변환 시간을 2분 후로 설정하고 확인을 눌러 변환 작업을 시작합니다. 화면의 지시에 따라 벡터 백을 튜브 세트에 멸균 용접합니다. transduction 후 48시간 후에 예정된 배양 세척을 사용하여 실제 transduction 시작 시간에 따라 활성 매트릭스를 수정합니다.
Shaker 활성화 시간을 배양 세척 후 30분으로 예약합니다. 마지막으로, 미디어 교환이 6일째 오후 2:00에 발생하는지 확인합니다. 샘플 버튼을 누르고 화면의 지시에 따라 활성 배양에서 품질 관리 샘플을 얻습니다.
다양한 분석을 위해 샘플을 1밀리리터 부분 표본 3개로 나눕니다. 최종 제형 완충액을 준비하여 나중에 동결 보호제 준비를 위해 일부를 저장합니다. 다음으로, 활동 매트릭스를 조정하여 문화권의 끝을 2분 후로 설정합니다.
최종 배합 완충액을 튜빙 세트에 부착하고 수확을 시작합니다. 대상 셀 백을 밀봉하고 제거합니다. 이 백에는 주입 또는 냉동 보존이 가능한 CAR T 세포가 들어 있습니다.
임상시험의 RT 실행은 46%였으며, 이는 TCT 과정이 세포 확장을 효과적으로 촉진했음을 나타냅니다. 최종 산물의 세포 생존율은 88 내지 94%였고 CD3 T 세포 순도는 89 내지 93%엔도톡신, 마이코플라스마, 무균성, 복제 가능 렌티바이러스 및 잔류 백혈병 세포는 검출되지 않았다.
