TWP was funded by the Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. WTP was funded by R01 HL095712 and an AHA Established Investigator Award.

모든 기술 단계는 보스턴 아동 병원의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행되었다. 1 준비 <ol><li> 심근 내 주입을위한 최적의 고정 센서의 위치가 해부학 및 기능 평가를 서술을위한 최적의 표준 뷰를 생성하지 수 있으므로, 이전에 주입 프로토콜을 시작으로 심 초음파에 의한베이스 라인 심장 해부학 및 기능 평가를 수행합니다. </li><li> 사출 설치는도 1a-1c에 표시됩니다. 피복 빈 바늘 주사기를 놓고, 위쪽으로 경사 배향은, 주사기 클램프 (도 1c 참조)와 검사 헤드 클램프 초음파 변환기 프로브를 고정 (도 1b 참조). 스캔 헤드 클램프 공 잠금 조인트 (도 1b)를 느슨하게하고 바늘의 축에 평행하게 정렬되도록 트랜스 듀서 방향을 조작. 스캔 - 수정스캔 머리 클램프 볼 잠금 관절을 조여 헤드 위치. 참고 : 성인 쥐에 주사를 들어, 1 / 2.5 cm 길이 30 G 바늘이 최적입니다. 기밀 주사기는 작은 볼륨의보다 정확한 제어 (5 ~ 10 μL)에 사용할 수있는 동안 한 ML의 주사기는 더 큰 볼륨을 사용할 수 있습니다. </li><li> 전체가 함께 머리를 보호하기 위해 주걱으로 트랜스 듀서 팁에 자유롭게 초음파 젤을 적용합니다. 조심스럽게 바늘을 unsheathe 바늘 직접 트랜스 듀서에서와 시각화를위한 초음파 젤 내에 바늘을 사전에 컨트롤을 장착 사용합니다. 니들은 초음파 영상에서 그 길이를 따라 명확하게 가시화되도록 바늘 제어를 탑재하여 미세 조절. 변환기가 적절 단계 1.4에서 바늘에 평행하게 정렬 된 경우는 전진 및 분사 제어 노브 (도 1C)와 같이 배출된다 후 바늘 촬상면 내에 유지한다. </li><li> 후속 단계에서, 요구를 방해하지 않는다수평 축에 하나를 이동하여 제작 / 트랜스 듀서 수평 정렬. 오히려, 바늘의 수직 (Y 축)의 위치를​​ 변경하여 장착하고 동물 플랫폼을 이동시켜 주사 중심의 특정 부분을 타겟팅. </li><li> 동물의 플랫폼에 마취 된 마우스의 후속 배치를 할 수 있도록 스캔 높이 제어 (그림 1B)를 사용하여 동물의 플랫폼에서 우량 변환기를 이동합니다. 이 바늘의 긴 축에 진동자의 X 축 배향을 방해하지 않을 것이다. </li><li> 주사기 클램프에서 정렬을 위해 사용 조심스럽게 폐기 된 주사기를 제거합니다. 새 바늘을 넣고 주사기 팁 죽은 공간을 허용, 최종 목표 볼륨으로 injectate 주사기. 공기 방울을 제거주의하십시오. 그 x 축 정렬을 조정하지 않고 주사기 클램프에 주사기를 놓습니다. 완전 분사 제어를 사용하여 주사기를 후퇴. 참고 : 초기 교육 목적을 위해, 에반의 파란색의 사용염료 (1 %)은, 트리 판 블루 스테인 (0.4 %) 또는 injectate 같은 형광 미립자의 현탁액을 주입 능력과 표적의 확인에 성공 연산자를 어시스트 할 수있다. </li></ol> 2 사출 <ol><li> 가열 플랫폼의 통합 따뜻한 켜고 37 ° C &#39;의 설정합니다. 운영자에 가장 가까운 동물의 마취 호스 클램프 및 머리, 일반적인 영상 방향에서 동물의 플랫폼 180 °를 놓습니다. 이것은 (가슴의 왼쪽에) 마음이 주사기 클램프와 바늘 동측 될 수 있습니다. 주 : 동물 플랫폼에 추가 작은 시계 방향으로 회전 조정 분사 (그림 2A)에 사용되는 흉골 단축 영상 평면에 대해 올바르게 마음을 방향을해야 할 수도 있습니다. </li><li> 이전에 구를보고 심장 초음파 검사 생쥐를 준비합니다. 2 % 이소 플루 란으로 유도 챔버에 마우스를 마취. 머리 제거 크림과 함께 가슴 털을 제거공막의 건조를 방지하기 위해 두 눈에 젤 윤활 적용 거라고. </li><li> 스캔 헤드 높이 제어 (도 1b)을 사용하여 트랜스 듀서를 올린다. 1-3%의 이소 플루 란 (그림 2A-2B)를 제공하는 코 콘 내 주둥이로 가열 된 동물 플랫폼 꼭대기 마취 마우스 부정사를 놓습니다. 부드럽게 직장 프로브를 삽입하고 전기 접촉 전극 젤을 적용, ECG 전극에 네 발을 테이프. NOTE : 마취 적정 수준이 동물의 치료를 위해 인간을 확보해야한다. 심장 박동의 변화와 가슴 벽을 통해 바늘의 위치에 대한 응답이 없어야합니다. 저체온증은 상대적 서맥, 심실 팽창, 가능한 불편을 초래할 것 같이 동물 플랫폼의 통합 항상성 온도 컨트롤은 정상 체온 (37 ± 0.5 ° C)를 유지하는 데 사용되어야한다. </li><li> 마우스 동물 플랫폼 보안되면 depila 상에 트랜스 듀서를 낮출스캔 헤드 높이 조절 (그림 1B)를 사용하여 테드의 가슴. 심장이 표준 심 초음파 기법에 따라, 흉골 단축 방향으로 가시화 될 때까지 주입을위한 최적의 초음파 설정입니다. 단축 영상 평면 (그림 2A-2B) 주입을위한 최적의 음향 창을 얻기 위해 동물 플랫폼에게 20 ~ 30 ° 시계 방향으로 돌립니다. 주 : 대안 적으로, 주입은 동물 플랫폼 (도 2c)의 반 시계 방향 회전에 의해 흉골 장축 방향에서 수행 될 수있다. </li><li> 시야를 조정하고 좌심실의 심근에서 원하는 주사 부위를 대상으로 동물 플랫폼 조절 제어를 사용합니다. 좌심실 심근 (도 3A-3C)에서 원하는 주입 위치를 대상으로 심장의베이스에 정점으로부터 전후 패닝. 참고 : midpapillary 흉골 짧은 축보기 (그림 3a는) reproducibl을 제공합니다주사 부위의 후속 영상을 허용 전자의 랜드 마크. 참고 : 또는 흉골 장축이 미리 정의 된 주입 부위 (도 3D)을 대상으로 사용될 수있다. </li><li> 완전히 수축 된 주사기 클램프 주사기를 시작으로 천천히 분사 제어를 시계 방향으로보기 (그림 4A)를 돌려 동물의 가슴쪽으로 주사기를 진행합니다. 그 가슴에 접근 심장 및 바늘 끝 모두 명확한 초음파 시각화를 허용하기 위해, 가슴의 왼쪽 위에 초음파 겔을 충분히 사용하고 심장 초음파 제어에 넓은 시야를 설정하여 음향 창을 최적화. 주사에 대한 대상 사이트에 초점 / 시간대를 설정합니다. 바늘에 약간의 조정은 제어가 그 길이를 따라 니들의 이미지를 최적화 할 수 마운트. NOTE : 일부 초음파 시스템은 디지털 목표 심근까지 바늘의 장축을 따라 선을 연장 봉침 소프트웨어 기능을 갖는다(그림 4B). 이러한 소프트웨어 도구가 도움이 될 수 있지만 필수적인 것은 아니다있다. </li><li> 동물 적절 진정으로 신중 전혀 모따 바늘 끝의 위치를​​ 관찰하고, 마우스의 흉부 벽을 통해 심근에 바늘을 전진 (1-3 %의 이소 플루 0.5-0.8 L / 분으로 100 %의 산소와 혼합) 배. 니들 팁이 목표 심근 (도 4C) 내에서 전진 할 때 멈춘다. 전체 빗면 팁 심낭 공간으로 injectate 누출을 피하기 위해, 안전하게 심근 내에 있어야한다. </li><li> 선단이 원하는 위치에있을 때, 시린지 플런저를 밀어 injectate을 제공한다. 5 ~ 30 초 동안 천천히 injectate를 제공​​ (볼륨에 따라 전달되는). injectate의 최대 50 μL은 심실 기능을 손상시키지 않고 전달 될 수있다. 주입 된 심근 지역에 과도 echobright 모양이 성공적으로 주입 후 분명있을 수 있습니다. 상대 bradycard의 개요 (초) 기간아이오와 때때로 심근에 주입 언급하고 신속하게 해결됩니다. </li><li> injectate 투여되면, 즉시 분사 제어 노브의 반 시계 방향 회전에 의해 바늘을 인출. 마우스가 보존 심실 기능없이 postprocedural 합병증을 확인하기 위해 심 초음파 관찰 몇 분 동안 마취 유지되어야한다. 표시하는 경우, 복수의 영역의 심근 직렬 동물 플랫폼의 조정에 의해 접근 니들의 각도로 재배치하여 주입 할 수있다. 심근 내 주사 후, 마우스는 그 자체 케이지에 넣고 관찰 하에서 마취에서 회복시킨다. </li><li> 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 회복 할 때까지 다른 동물의 회사에 심근 주사를 겪었다 동물을 반환하지 않습니다. 새장은 재와 온도 조절 패드에 배치해야물과 마우스 다이어트의 ADY 제공. Postprocedural 불편이 예상 적절 곧 개입 후 정상적인 동작을 재개 실패는 잠재적 인 합병증 (토론 참조) 제안하지 않습니다. </li><li> 조심스럽게 심근 내 주입의 완료가 운영자 또는 방관자로 날카로운 물건 손상의 위험을 최소화하기 위해 바늘 직후 폐기. 바늘을 재사용하면 더 도전 심근를 관통 할 수있게 팁의 둔화 및 합병증의 위험이 높은 결과가 발생할 수 있습니다. </li></ol>

<ol>
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The authors have nothing to disclose.

생물 의약품은 혈류를 통해 직접 심근 내 주입, intrapericardial 주사, 또는 간접적으로 관리하여 심근에 전달 될 수있다. 심근 경색 모델에서 최근 세포 기반 치료 임상 시험 injectate 12-14의 전달에 개흉술 방식을 설명했다. 심근 치료 적 개입의 성공에 중요 인자는 전달 경로의 선택에 달려있다. 생물의 높은 로컬 도즈는 심근 15,16 전달함으로써 달성된다. 직접 시각화에서 심근 내 주?...

심장 질환은 매년 600,000 사망 한 회계, 미국에서 남성과 여성 모두 사망의 주요 원인이다. 심혈관 질환의 생쥐 모델은 병리 생리 학적 메커니즘을 조사 및 치료 가능성을 둘러보기에 매우 중요하다. 유전자 치료 벡터의 심근 전달, 세포 RNA를 변성하고, 심장 질환에 대한 그들의 2-7 치료 가능성의 다른 치료제 허가 조사 줄기. 현재 마우스 모델 6 치료제의 심근 전달을위한 제한된 옵션이 있습니다. 직접적인 시각화 하에서 심근 내 주입 흔히 사용하지만, 흉골 또는 개흉술을 요구하고 심장의 노출 된 영역에 한정되어있다. 이러한 LAD 결찰 같은 다른 실험 조작의 시간에 수행 될 때 편리하지만, 심근 배달 침습 절차에 대한 필요성이 전위 실험 설계를 제한하고 소개절차와 뉴 부가 효과 (예, 개흉술에 의한 섬유화). 바이러스 벡터의 경피적 심낭 전달보고되었지만 사이트 및 치료제의 분포는 균일하지 않으며 8 제어하는 것이 곤란하다. 주입 물질 있지만 효율적이고 재현 관상 전달보다 균일 분포 경피적 관상 동맥 주입 결과 뮤린 모델에 도전하고있다. 여기에, 우리는 초음파지도하에 치료제의 최소 침습, 운영자 제어 타겟팅을 할 수있는 닫힌 가슴 심근 내 주입 기술을 설명합니다. 기술은 쉽게 배울 개흉술 또는 흉골 및 부수적 인 실험 합병증의 필요성을 제거하고, 타이밍 및 심근 주사 부위에 더 큰 유연성을 제공한다. 따라서, 심장 초음파를 이용한 심근 내 주입 조작의 기술적으로 간단하고 매우 효과적인 방법을 나타낸다쥐 실험 모델에서 심근.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="743">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Vevo 2100 ultrasound imaging system&#160;</td>
			<td style="width:144px;">Visualsonics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Vevo Integrated Rail System III</td>
			<td style="width:144px;">Visualsonics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Microscan MS400 transducer</td>
			<td style="width:144px;">Visualsonics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Microscan MS550D transducer</td>
			<td style="width:144px;">Visualsonics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">PrecisionGlide needles</td>
			<td style="width:144px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305128</td>
			<td>30G x 1 inch</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">1cc slip tip syringe</td>
			<td style="width:144px;">Exel International&#160;</td>
			<td style="width:119px;">26048</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Gastight 50ul glass syringes</td>
			<td style="width:144px;">Hamilton&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Trypan blue stain (0.4%)</td>
			<td style="width:144px;">Gibco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">15250</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:144px;">Baxter</td>
			<td style="width:119px;">AHN3640</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Aquasonic 100</td>
			<td style="width:144px;">Parker Laboratories</td>
			<td style="width:119px;">(01-08)</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:313px;">Polystyrene microspheres (red fluorescent)</td>
			<td style="width:144px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">F-8842</td>
			<td>or equivalent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrasound-guided transthoracic intramyocardial injection in mice

심혈관 질환의 생쥐 모델은 병리 생리 학적 메커니즘을 조사하고 잠재적 인 재생 치료를 탐험 중요하다. 심근 주입을 포함하는 실험은 현재 개흉술을 통해 직접 수술 접근에 의해 수행된다. 관상 동맥 결찰 같은 다른 실험 조작의 시간에 수행 될 때 편리하지만, 심근 배달 침습 절차에 대한 필요성이 전위 실험 설계를 제한한다. 지금까지 초음파 해상도와 고급 비 침습적 영상 방식을 개선, 그것은 정기적으로 초음파 유도 경피적 심근 내 주입을 수행 할 지금 가능하다. 이 양상은 효율적이고 안정적​​으로 심근의 대상 지역에 에이전트를 제공합니다. 이 기술의 장점은 수술 사망률의 회피, 선택적으로 초음파지도하에 심근의 지역을 대상으로 시설, myocardiu에 injectate을 제공 할 수있는 기회를 포함복수, 소정의 시간 간격 m. 연습 기술로, 심근 내 주입의 합병증은 드문와 마우스를 신속하게 마취에서 회복 정상적인 활동으로 돌아갑니다. 이 프로토콜에 설명 된 단계에 따라 기본 심 초음파 검사 경험이있는 운전자는 신속하게이 다재 다능 한, 최소 침습 기술에서 경쟁력이 될 수 있습니다.

블루 염료 또는 형광 마이크로 스피어와 쥐의 심근 내 주입 에반의 파란색 염료를 주입 연습을 위해 유용합니다. 곧 주사 후, 중간 유두근 수준에서 심근 침윤 청색 염료, 마우스를 안락사 및 주입 청색 염료의 위치를 시각화 할 심장을 제거.도 5를 성공적으로 주입의 일례를 나타낸다 (도 5a는, 영역 밀폐 )의 점선으로. 에반스 블루 염료는 몇 시간 내에 ...

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Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice

심장 초음파 유도 경피적 심근 주입 뮤린 마음에 유전자 전달 제 또는 세포의 전달을위한 효율적인 신뢰성 있고 타겟팅 양상을 나타낸다. 이 프로토콜에 설명 된 단계에 따라, 운전자는 신속하게이 다재 다능 한, 최소 침습 기술에서 경쟁력이 될 수 있습니다.

마우스의 초음파 유도 경 흉부 심근 내 주입

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. ...

ultrasound-guided-transthoracic-intramyocardial-injection-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K 조회수.  Boston Children's Hospital.  심장 초음파 유도 경피적 심근 주입 뮤린 마음에 유전자 전달 제 또는 세포의 전달을위한 효율적인 신뢰성 있고 타겟팅 양상을 나타낸다. 이 프로토콜에 설명 된 단계에 따라, 운전자는 신속하게이 다재 다능 한, 최소 침습 기술에서 경쟁력이 될 수 있습니다. 