시작하려면 길이 16cm, 너비 12cm, 두께 20마이크로미터의 폴리에틸렌 플라스틱 필름을 사용합니다. 유리 연삭 도구를 사용하여 표준 96웰 PCR 레이아웃에서 30개의 반원형 돌출부를 압착합니다. 압착된 폴리에틸렌 플라스틱 필름의 양면을 자외선에 1시간 동안 노출시켜 소독합니다.
반원형 표면에 소량의 10% 폴리비닐 알코올을 첨가합니다. 다음으로, 약 3, 000 마취 된 암컷 trichogramma dendrolimi 말벌을 수집 상자에 넣습니다. 필름 에그 카드의 볼록한 면을 수거 상자 쪽으로 놓고 가장자리를 고무 밴드로 고정합니다.
이제 각 돌출부에 4마이크로리터의 아미노산 용액을 추가합니다. 그런 다음 다른 폴리에틸렌 플라스틱 필름으로 덮으십시오. 고무 밴드를 사용하여 두 장의 플라스틱으로 수거함을 단단히 덮습니다.
말벌이 4-8 시간 동안 자유롭게 기생하도록하십시오. 기생하는 동안 젖은면을 통해 10 %의 자당수를 제공하십시오. 다음으로, 인공 계란 카드의 내부 돌출부에서 기생 아미노산 용액을 얻어 1.45 밀리리터 튜브의 캡으로 옮긴다.
직경 25mm의 10마이크로미터 나일론 그물로 튜브 캡을 덮습니다. 그런 다음 나일론 그물을 튜브에 가볍게 고정합니다. 오른쪽 상단 튜브를 1, 360g에서 10초 동안 원심분리합니다.
독이 포함된 여과된 용액을 수집합니다. 추가 분석을 위해 독을 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 독 샘플의 BCA 분석은 독 단백질의 농도가 마이크로리터당 0.35에서 0.46마이크로그램 사이임을 보여주었습니다.
아미노산 용액의 음성 대조군은 마이크로리터당 0.03 내지 0.05 마이크로그램의 단백질 농도만을 가졌다. 독의 SDS-PAGE 분석은 10 킬로달톤 이하에서 130 킬로달톤 이상에 이르는 단백질 범위를 보여주었습니다.
