Mouse Ocular Lens Equatorial Region Whole Mount Preparation and Confocal Imaging to Understand the Lens Structural-Developmental Relationship

고정 렌즈의 전체 마운트 준비를 시작하여 고정 아가로스 웨지를 만듭니다. 이렇게하려면 유리 바닥 접시를 가져 와서 PBS의 녹은 2 % 아가로스 약 5-6 밀리리터를 붓습니다. 아가로스가 굳을 때까지 기다리십시오.

그런 다음 날카로운 칼날을 사용하여 응고된 아가로스에 삼각형 디봇을 만듭니다. 아가로스 웨지를 제거하고 접시에 PBS 1밀리리터를 추가합니다. 절단 후 남은 잔류 아가로스를 흡인합니다.

필요한 경우 여러 렌즈에 맞도록 단일 접시에 여러 웨지를 만듭니다. 금형을 보관하려면 섭씨 4도에서 유지하기 전에 PBS 1밀리리터를 넣으십시오. 구부러진 핀셋을 사용하여 PBS 1밀리리터가 들어 있는 아가로스 웨지에 렌즈를 넣습니다.

적도 영역이 컨포칼 대물렌즈 위에 놓였을 때 현미경 유리 위를 향하도록 렌즈를 조정합니다. 접시를 현미경 s에 놓습니다.tag이자형. 적도 영역에 초점이 맞춰져 있는지 확인하려면 핵을 시각화하여 일렬로 정렬되도록 합니다.

또한 불규칙하게 채워지고 형성된 적도 상피 세포와 세포막에서 F-actin 염색으로 표시되는 정밀하게 정렬되고 육각형 모양의 자오선 행 세포를 확인합니다. 시야에서 핵의 무작위 패킹은 렌즈 앞쪽이 대물렌즈를 향하고 있음을 나타냅니다. 핵을 관찰할 수 없는 경우, 수정체의 뒤쪽이 대물렌즈를 향하고 있음을 나타낼 수 있습니다.

이러한 경우 곡선 핀셋을 사용하여 렌즈 적도에서 정확하게 정렬된 핵이 관찰될 때까지 렌즈를 회전시킵니다.