시작하려면 수집된 인간 정액 샘플을 액화하고 파스퇴르 피펫을 사용하여 완전히 균질화합니다. 그런 다음 100 마이크로 리터의 정액 샘플을 원심 분리기 튜브로 옮깁니다. 이 튜브에 900 마이크로 리터의 염색 용액을 첨가하십시오.
피펫팅으로 반복적으로 혼합하고 반응물을 완전히 균질화합니다. 실온에서 200분 동안 30분 동안 200RPM으로 연속 교반을 위해 튜브를 2차원 셰이커에 놓습니다. 염색 반응을 기다리는 동안 CASA 시스템을 사용하여 정자 농도 분석을 진행합니다.
시스템을 켠 후 SCAscope 아이콘을 두 번 클릭하여 응용 프로그램 소프트웨어를 엽니다. 그런 다음 피펫팅으로 정액 샘플을 완전히 혼합하고 SCA 계수 챔버에서 최대 10마이크로리터의 샘플을 옮깁니다. 정액 샘플이 표류를 멈출 때까지 60초 동안 기다립니다.
그런 다음 SCA 계수 챔버를 CASA 시스템의 샘플 홀더에 놓습니다. 어플리케이션 소프트웨어에서 대화 상자에 환자 정보를 입력합니다. 시작 버튼을 클릭하면 정액의 정자 농도를 기록할 수 있습니다.
그런 다음 30분 염색 반응이 완료되면 쉐이커를 멈춥니다. 분석하기 전에 피펫팅으로 원심분리기 튜브의 내용물을 혼합합니다. 최대 10 마이크로 리터의 반응물을 정자 계수 챔버로 옮기고 전용 유리 커버 슬립으로 덮습니다.
정자 계수 챔버를 현미경 스테이지에 놓고 광학 현미경을 켭니다. 그런 다음 반응물 샘플이 표류를 멈출 때까지 60초 동안 기다립니다. 10x 대물 렌즈에서 코스와 미세 조정 노브를 조정하여 필드를 선택합니다.
그런 다음 40x 대물렌즈로 전환하여 정자 및 과산화효소 양성 백혈구를 관찰합니다. 전자 계수기 시스템을 사용하여 최소 200개의 정자와 갈색의 과산화효소 양성 백혈구 수를 계산합니다. 이 기술을 사용하여 과산화효소 양성 백혈구를 정액 샘플에 염색했습니다.
과산화효소 양성 백혈구는 염색되지 않은 평범한 원형 세포와 대조되는 갈색 색조를 나타냈습니다.
