우리는 생활 자금, 오클라호마 대학 학부 연구 기회 프로그램, 그리고이 작품을 자금에 대한 동물학의 부 감사합니다. 또한 편집에 도움 박사 마리엘의 Hoefnagels 감사합니다.

1. 사전 녹음, 라이브 동물 준비 <ol><li> 자사 홈 병의 전갈을 제거하고 미리 차게 유리 컨테이너에 배치, 다음, 두 분 최소 냉동 환경 (-5 ° C)에 전갈이 들어있는 항아리를 놓습니다. 이 시간은 연령에 따라 다를 수 있습니다, 크기, 연구에서 구체적인 전갈의 종류 등. 동물이 움직이지되면 그러나 일반적으로 냉동 환경 단계가 완료되었습니다. </li><li> 이분 후, 차가운 유리 용기에서 고정 전갈을 제거하고, 현미경 슬라이드에 복부 쪽을 놓으십시오. 스팅거, 꼬리, 다리, 그리고 moldable 점토 (석유 기반의 반 아켄 Plastalina)와 pedipalps를 확보. </li><li> 전갈의 pectines 넣어하는 플랫폼을합니다. 펙튼의 크기에 따라 플랫폼의 길이와 너비를 조정합니다. 일반적으로, 우리의 플랫폼은 현미경 커버 유리 밖으로 건설하고 약 10 (L) X 18 (W) mm입니다. </li><li> 에 맞게 (필요한 경우) 테이프를 트리밍, 펙튼 플랫폼에 양면 접착 테이프를 준수합니다. </li><li> pectinal 챔버하려면, 3~4mm의 깊이에 미리 녹인 왁스 (우리는 100 % 밀랍 칩을 사용)으로 플랫폼의 사면 세를 넣어. 우리는 뜨거운 접시에있는 유리 페트리 접시 안에 칩을 배치하여 왁스를 녹여. pectinal 챔버의 가장자리에 왁스가 상온으로 냉각되면, 이것은 높이 1mm에 대해 왁스의 벽을 만들어야합니다. </li><li> 동물, pectinal 삽입 지점을 찾아, 그것을 단지 사후 플랫폼의 취소 왁스칠 가장자리 (테이프 측면까지)를 놓으십시오. 그 후 부드럽게 동물의 다리를 제지하는 데 사용되는 점토 상대로 좌우 주변 가장자리를 눌러 플랫폼을 (이것은 나중에 이동하지 않도록) 안정화. </li><li> 챔버 내부의 펙튼 또는 pectines을 신중하게 배치하기 위해 미세하게 밀고 집게를 사용하십시오. 특히 집게를 사용하여 pectinal 척추 함께 펙튼을 보유하고 부드럽게 커버 유리 아래에서 펙튼을 지참 접착제 플랫폼 바닥에 그것을 낮추십시오. 조심스럽게 pectinal 척추에 압력을 적용하여 펙튼 - 투 - 테이프 본드를 설정합니다. </li><li> 이제 플랫폼의 취소 왁스칠 가장자리에 녹인 왁스를 (우리가 사전에 가열 금속 주걱을 사용하여)이 적용됩니다. 목적은 펙튼 확보하고 완벽하게 미래의 광유 소개 챔버 묶으을 두 배입니다. 너무는 뜨겁다 왁스와 펙튼 손상을 수 있습니다 것처럼, 동물의 펙튼 위에 왁스를 적용할 때주의를 사용합니다. </li><li> 펙튼 챔버 공사가 완료되었습니다. 다음 두 꼬리 세그먼트 사이에 은색 철사를 삽입하여 동물의 hemolymph와 무관심 전극 연결을 설정합니다. </li></ol> 2. 동시 세포외 녹화 및 화학적 자극 <ol><li> 우리는 다른 이유 중 (고정 위치에 즉, 동물성 조정), 수, 세포, 팁 - 녹음을 수행하기 전에 동물 24 H를 준비하는 시간을 지정하게되면 특정 (sensillum -에 따라 다름) 팁 - 직경의 자극제의 pipettes합니다. 우리는 이러한 사양을 달성 micropipette의 풀러를 사용합니다. 이상적으로, pipettes의 직경은 sensillar의 기공 직경보다 ≈ 2 μm의 큰 것입니다. 우리는 각 동물에 대해 적절하게 우리 micropipette 사양을 조정합니다. </li><li> 녹음하기 전에 1 H, 우리는 석유에서 펙튼을 잠수함이 잠수, pectinal 실로 광유 5 μl를 추가합니다. 그렇다면, 우리는 장거리 목표와 에피 조명 일을 가진 고성능 현미경, 아래 동물을 위치. </li><li> 화학적 페그 sensilla을 촉진하기 위해, 우리는 석유 매체를 통해 수성 tastants (예 : 구연산과 소금) 소개합니다. 첫째, 우리는 자극의 피펫에 자극제를 주입하는 micropipette 필러를 사용합니다. 참고 : 모든 자극제 솔루션은 전기 전도성에 대한 전해질을 포함해야합니다. </li><li> 다음 micromanipulator (녹화 장비)에 흥분제의 피펫을 위치 후, 흥분제의 피펫의 무딘 오픈 엔드에 기록 전극을 삽입합니다. 금속 전극과 전해 흥분제 솔루션 사이의 접촉을 보장하는 것이 중요합니다. </li><li> 일단 준비는 전기 오일 매체 통해 sensillar의 구멍에 피펫 단순히 낮은 (무관심 전극을 통해) 접지입니다. pectinal sensillum 당 화학 자극의 기간은 많은 서른로 분 거리로 작은로 두 번째 다를 수 있습니다. 일반적으로, 우리는 피펫마다 여러 펙스 (&gt; 30)을 샘플 수 있습니다. 흥분제의 피펫는 분 파편들로 가득 찼어되고있는 경우, 단순히 새로운 않는 피펫에 대한 막힌 피펫을 교환. </li></ol> 3. 실험의 여러 일 동안 동물 준비 <ol><li> 동물이 확장 기간 동안 사용할 수있다면, 우리는 pectinal 챔버를 재사용하고 각 레코딩 세션에 대해 미네랄 오일 드롭을 대체하는 것이 좋습니다. 특정 일의 레코딩 세션이 완료되면 설정 녹음에서 동물을 제거하고 미네랄 오일 세척을 수행합니다. </li><li> Specifically, 실로 미네랄 오일의 다른 드롭 (5 μl)을 추가하고 모든 기름을 제거합니다. 이것은 레코딩 세션 동안 피펫 밖으로 유출 있습니다 잔여 자극의 존재를 최소화하는 데 도움이됩니다. </li><li> 다음 세션 전에, 앞에서 설명한 것처럼 기름 한 방울을 추가합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 : 적어도 3시 1분의 N 비율 : (특정 앰프 예를 들어, 하드웨어 등 디지타이징) 사용 녹음 장비에 따라 대표적인 결과는 S와 세포외 기록이다. 그것은 극지 (물 기준) 화학 tastants 8를 전달하기위한 매체를 제공하는 등 미네랄 오일 챔버의 성공적인 건설은 개인 sensilla에 화학 자극을 분리 필요합니다. 전혀 너무 작은 기름이나 없음이있다면, 흥분제 솔루션은 화학 자극 8 장기간, 통제 한판 승부를 일으킬 가능성이 그 이웃 sensilla에 기록된 sensillum에서 전염됩니다.

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	<li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+a+Primary+Chemoreceptor+unit.">Physiology of a Primary Chemoreceptor unit.</a> Science. 12, 417-418 (1955).</li><li>Newland, P. L., Christensen, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+processing+in+the+insect+nervous+system.">Taste processing in the insect nervous system.</a> Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 289-318 (2005).</li><li>Foelix, R. F., M&#252;ller-Vorholt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+scorpion+sensory+organs+II.+Pecten+sensilla.">The fine structure of scorpion sensory organs II. Pecten sensilla.</a> Bull. Br. Arachnol. Soc. 6, 68-74 (1983).</li><li>Carthy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+structure+and+function+of+the+sensory+pegs+on+the+scorpion+pecten.">Fine structure and function of the sensory pegs on the scorpion pecten.</a> Experientia. 22, 89-91 (1966).</li><li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+properties+of+chemosensory+peg+sensilla+on+the+pectines+of+scorpions.">Response properties of chemosensory peg sensilla on the pectines of scorpions.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 291-300 (1997).</li><li>Wolf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pectine+organs+of+the+scorpion,+Vaejovis+spinigerus:+Structure+and+(glomerular)+central+projections.">The pectine organs of the scorpion, Vaejovis spinigerus: Structure and (glomerular) central projections.</a> Arthropod Struct. Dev. 37, 67-80 (2008).</li><li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+evidence+of+synaptic+interactions+within+chemosensory+sensilla+of+scorpion+pectines.">Electrophysiological evidence of synaptic interactions within chemosensory sensilla of scorpion pectines.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 301-307 (1997).</li><li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+to+examining+scorpion+peg+sensilla:+the+mineral+oil+flood+technique.">A new approach to examining scorpion peg sensilla: the mineral oil flood technique.</a> J. Arachnol. 37, 379-382 (2009).</li><li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+tip-recording+method+to+test+scorpion+pecten+chemoresponses+to+water-soluble+stimulants.">A new tip-recording method to test scorpion pecten chemoresponses to water-soluble stimulants.</a> J. Neurosci Methods. , .</li><li>Haupt, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antennal+sucrose+perception+in+the+honey+bee+(Apis+mellifera+L.):+behaviour+and+electrophysiology.">Antennal sucrose perception in the honey bee (Apis mellifera L.): behaviour and electrophysiology.</a> J. Comp. Physiol. A. 190, 735-745 (2004).</li><li>Bland, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensilla+on+the+antennae,+mouthparts,+and+body+of+the+larva+of+the+alfalfa+weevil,+hypera+postica+(gyllenhal)+(Coleoptera+:+Curculionidae).">Sensilla on the antennae, mouthparts, and body of the larva of the alfalfa weevil, hypera postica (gyllenhal) (Coleoptera : Curculionidae).</a> Int. J. Insect Morphol. Embryol. 12, 261-272 (1983).</li><li>Cate, H. S., Derby, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooded+Sensilla+Homologues:+Structural+Variations+of+a+Widely+Distributed+Bimodal+Chemomechanosensillum.">Hooded Sensilla Homologues: Structural Variations of a Widely Distributed Bimodal Chemomechanosensillum.</a> J. Comp. Neurol. 444, 345-357 (2002).</li></ol>

우리는 이전에 두 저널, 놀턴 및 Gaffin (2009)와 놀턴 및 Gaffin (보도)에 이러한 방법을 발표했습니다.

위의 프로토콜 electrophysiological 연구 사막 초원 전갈 (Paruroctonus utahensis)를 준비하는 방법을 설명합니다. 특히, 우리는 석유에 따라 pectinal chemosensory 뉴런의 제어 세포 끝 - 녹음을위한 챔버를 빌드하는 방법을 보여줍니다. 기름과 물을 혼합하지 않기 때문에, 그것은 화학 자극 (물 기반 각성제)를 단일 sensilla로 분리 수 있습니다. 그것은 스트레스를해야한다는 P. utahensis는 비교적 작은 동물 (≈ 2.5-5 ㎝)이며 큰 동물이 프로토콜을 적용하면 여러 크기와 같은 동물의 플랫폼, 챔버의 크기 조정, 그리고 적용 기름 양을 요구할 수 있습니다. 우리는 물을 기반의 화학 자극의 전달 제어에 필요한 석유의 최소 금액을 테스트하기 위해 파일럿 연구를 실시하는 것이 좋습니다. 또한, 우리는 pectinal sensilla 8 시간 기준 신경 활동에 기름의 영향을 찾을 수 없습니다. 이것은 이전 chemoresponsiveness를 평가하기 위해,뿐만 아니라 다른 모델 시스템을위한 확인하여야한다. 이 방법은 감각 분야에서 sensilla 간의 chemoresponse 상호 작용 효과에 대해 테스트하는 다른 방법과 함께 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 한 sensillum에서 끝 - 기록 (석유 이하)이 가능합니다 같은 우리 이웃 sensillum 9 시부터베이스 레코드 (텅스텐 전극을 통해). 이러한 녹음 구성은 기본 - 기록 sensillum의 신경 활동에 영향을 미치는 지 여부를 화학적으로 한 sensillum을 자극하지 평가하기 위해 사용할 수 있습니다. 지금까지 아무도 전갈 pectinal sensilla이 테스트를하지 있으며, 그것뿐만 아니라 다른 chemosensory 시스템을위한 열린 질문 유지됩니다. 요약하면, 우리는 석유 진보 arthropod 맛보기의 신경 기초로 electrophysiological 조사의 범위를 아래의 팁 - 녹음 방법을 생각합니다. 이 원고에서는, 우리는이 방법에 대한 동물을 준비 프로토콜을 제공하고, 우리는 주변 감각 신경 시스템의 진학 확고한 기반을 제공합니다 바랍니다.

<table><tbody><tr><td>Lift-N-Press tab</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>16082</td><td>Doubled-sided adhesive</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MF34G</td><td>Micropipette filler</td></tr><tr><td>Standard Glass Capillaries</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B100F-6</td><td>Glass pipettes</td></tr><tr><td>Micr&amp;#8211;lectrode Holder</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MEH3SBW10</td><td></td></tr></tbody></table>

electrophysiology of scorpion peg sensilla

우리는 electrophysiologically 짧은 감각 sensilla 3,4 PEG - 같은 조사에 대한 기존의 팁 - 녹음 기술의 1,2의 수정을 설명합니다. 모든 전갈의 중간 복부 표면의 밀도 분야가 pectines라는 두 개의 부속, 메카 및 chemosensory 말뚝 sensilla 5,6입니다. 이러한 sensilla의 chemoresponsiveness 평가하기위한 한 가지 방법은 휘발성 odorant이 감각 필드 5,7에 소개로 extracellularly sensillum 내에서 신경 활동을 기록을위한 텅스텐 전극을 사용합니다. 이 방법의 제한 속도가 느린 데이터 수집 및 통제 흥분제 소개 및 페그 분야에서 제거를 포함합니다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 우리는 각각의 말뚝 sensilla 8,9 물을 기반 tastants를 제공하는을 통해 매체로 무극 성 미네랄 오일을 사용하는 새로운 팁 - 녹화 기술을 개발했습니다. 우리는 성공적으로 구연산 초산, 에탄올, 그리고 소금에 sensillar의 chemoresponses를 얻는이 방법을 적용했습니다. 여기 우리는 이러한 연구 9 실험 프로토콜을 설명합니다. 우리는이 새로운 방법은 곤충 10, 11, 갑각류 12 포함한 다른 arthropod chemosensory 시스템의 응답 특성을 공부하는 데 유용할 수 있습니다 생각합니다.

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Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

이 문서는 광유에 따라 세포, 팁 - 녹음을 통해 개별 sensilla에 화학 자극을 분리에 대한 electrophysiological 방법을 설명합니다.

전갈 페그 Sensilla의 전기 생리학

We describe a modification of an existing tip-recording technique1,2 for electrophysiologically investigating short, peg-like sensory sensilla3,4. On the ...

electrophysiology-of-scorpion-peg-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.0K 조회수.  University of Oklahoma. 이 문서는 광유에 따라 세포, 팁 - 녹음을 통해 개별 sensilla에 화학 자극을 분리에 대한 electrophysiological 방법을 설명합니다.

비디오: Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

연구

신경과학

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of electrical transmission between distant cells in an organism requires in vivo, artifact-free recordings of cells embedded within their native environment. The transmission of electrical signals from wounded to unwounded areas in a plant has since long piqued the interest of botanists. The phloem, the living part of the plant vasculature that is spread throughout the plant, has been postulated as a major tissue in electrical transmission in plants. The lack of suitable electrophysiological methods poses many challenges for the study of the electrical properties of the phloem cells in vivo. Here we present a novel approach for intracellular electrophysiology of sieve elements (SEs) that uses living aphids, or other phloem-feeding hemipteran insects, integrated in the electrical penetration graph (EPG) circuit. The versatility, robustness, and accuracy of this method made it possible to record and study in detail the wound-induced electrical signals in SEs of central veins of the model plant Arabidopsis thaliana1. Here we show that EPG-electrodes can be easily implemented for intracellular electrophysiological recordings of SEs in marginal veins, as well as to study the capacity of SEs to respond with electrical signals to several external stimuli. The EPG approach applied to intracellular electrophysiology of SEs can be implemented to a wide variety of plant species, in a large number of plant/insect combinations, and for many research aims.

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

체관부 체 요소에 전기 신호를 획득 및 측정을위한 전기 침투 그래프 (EPG)의 새로운 응용 프로그램

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

환경과학

Electrophysiological Measurements from a Moth Olfactory System

Insect olfactory systems provide unique opportunities for recording odorant-induced responses in the forms of electroantennograms (EAG) and single sensillum recordings (SSR), which are summed responses from all odorant receptor neurons (ORNs) located on the antenna and from those housed in individual sensilla, respectively. These approaches have been exploited for getting a better understanding of insect chemical communication. The identified stimuli can then be used as either attractants or repellents in management strategies for insect pests.

Insect olfactory systems provide unique opportunities for recording odorant-induced responses in the forms of electroantennograms (EAG) and single sensillum recordings (SSR), which are summed responses from all odorant receptor neurons (ORNs) located on the antenna and from those housed in individual sensilla, respectively.

모쓰 강한 시스템에서 Electrophysiological 측정

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Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of the woodboring beetle, Chlorophorus caragana Xie &#38; Wang (2012), for both types of electron microscopy. The scanning electron microscopy (SEM) sample preparation protocol was based on sample chemical fixation, dehydration in a series of ethanol baths, drying, and sputter-coating. By adding Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) to the fixative and the wash solution, the insect body surface of woodboring beetle was washed more cleanly in SEM. This study&#39;s transmission electron microscopy (TEM) sample preparation involved a series of steps including fixation, ethanol dehydration, embedding in resin, positioning using fluorescence microscopy, sectioning, and staining. Fixative with Tween 20 enabled penetrate the insect body wall of woodboring beetle more easily than it would had been without Tween 20, and subsequently better fixed tissues and organs in the body, thus yielded clear transmission electron microscope observations of insect sensilla ultrastructures. The next step of this preparation was determining the positions of insect sensilla in the sample embedded in the resin block by using fluorescence microscopy to increase the precision of target sensilla positioning. This improved slicing accuracy.

In order to observe ultrastructure of insect sensilla, scanning and transmission electron microscopy (SEM and TEM, respectively) sample preparation protocol were presented in the study. Tween 20 was added into the fixative to avoid sample deformation in SEM. Fluorescence microscopy was helpful for improving slicing accuracy in TEM.

목공 딱정벌레의 부속물을 위한 주사 및 투과 전자 현미경의 시료 제조 방법

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable history as a model of nervous system function, with particular significance in studies of learning and memory. The typical preparations for such studies are ones in which the sensory and motoneurons are left intact in a minimally dissected animal, or a technically elaborate neuronal co-culture of individual sensory and motoneurons. Less common is the isolated neuronal preparation in which small clusters of nominally homogeneous neurons are dissociated into single cells in short term culture. Such isolated cells are useful for the biophysical characterization of ion currents using patch clamp techniques, and targeted modulation of these conductances. A protocol for preparing such cultures is described. The protocol takes advantage of the easily identifiable glutamatergic sensory neurons of the pleural and buccal ganglia, and describes their dissociation and minimal maintenance in culture for several days without serum.

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

We describe the dissection of the nervous system of the marine sea hare Aplysia after anesthesia, the isolation of neurons for short term-tissue culture, and recordings of single cell ion currents via the patch clamp technique.

의 감각 뉴런의 분리<em&gt; 군소 californica</em&gt; 글루타메이트 전류의 패치 클램프 녹음을위한

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable  history as a model of nervous system function, with particular significance in  studies ...

Neural Circuit Recording from an Intact Cockroach Nervous System

The cockroach ventral nerve cord preparation is a tractable system for neuroethology experiments, neural network modeling, and testing the physiological effects of insecticides. This article describes the scope of cockroach sensory modalities that can be used to assay how an insect nervous system responds to environmental perturbations. Emphasis here is on the escape behavior mediated by cerci to giant fiber transmission in Periplaneta americana. This in situ preparation requires only moderate dissecting skill and electrophysiological expertise to generate reproducible recordings of neuronal activity. Peptides or other chemical reagents can then be applied directly to the nervous system in solution with the physiological saline. Insecticides could also be administered prior to dissection and the escape circuit can serve as a proxy for the excitable state of the central nervous system. In this context the assays described herein would also be useful to researchers interested in limb regeneration and the evolution of nervous system development for which P. americana is an established model organism.

This article describes the cockroach ventral nerve cord dissection and extracellular recordings from the cercal nerve and connectives. Evoked responses are generated by electrical stimulation of the cercal nerve or direct mechanical stimulation of the cerci.

신경 회로 녹화 본래대로 바퀴벌레 신경계에서

The cockroach ventral nerve cord preparation is a tractable system for neuroethology experiments, neural network modeling, and testing the physiological ...

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

The freshwater leech, Hirudo medicinalis, is a versatile model organism that has been used to address scientific questions in the fields of neurophysiology, neuroethology, and developmental biology. The goal of this report is to consolidate experimental techniques from the leech system into a single article that will be of use to physiologists with expertise in other nervous system preparations, or to biology students with little or no electrophysiology experience. We demonstrate how to dissect the leech for recording intracellularly from identified neural circuits in the ganglion. Next we show how individual cells of known function can be removed from the ganglion to be cultured in a Petri dish, and how to record from those neurons in culture. Then we demonstrate how to prepare a patch of innervated skin to be used for mapping sensory or motor fields. These leech preparations are still widely used to address basic electrical properties of neural networks, behavior, synaptogenesis, and development. They are also an appropriate training module for neuroscience or physiology teaching laboratories.

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

This article describes three nervous system preparations using leeches: intracellular recording from neurons in ventral ganglia, culturing neurons from ventral ganglia, and recording from a patch of innervated skin to map sensory fields.

세포 내 기록, 감각이 필드를 매핑하고, 거머리의 배양 확인 된 뉴런, Hirudo의 medicinalis</i

The freshwater leech, Hirudo medicinalis, is a versatile model organism that has been used to address scientific questions in the fields of ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the researcher to measure gustatory responses directly and quantitatively, reflecting the sensory input that the insect nervous system receives from taste stimuli in its environment. This protocol outlines all key steps in performing this technique. The critical steps in assembling an electrophysiology rig, such as selection of necessary equipment and a suitable environment for recording, are delineated. We also describe how to prepare for recording by making appropriate reference and recording electrodes, and tastant solutions. We describe in detail the method used for preparing the insect by insertion of a glass reference electrode into the fly in order to immobilize the proboscis. We show traces of the electrical impulses fired by taste neurons in response to a sugar and a bitter compound. Aspects of the protocol are technically challenging and we include an extensive description of some common technical challenges that may be encountered, such as lack of signal or excessive noise in the system, and potential solutions. The technique has limitations, such as the inability to deliver temporally complex stimuli, observe background firing immediately prior to stimulus delivery, or use water-insoluble taste compounds conveniently. Despite these limitations, this technique (including minor variations referenced in the protocol) is a standard, broadly accepted procedure for recording Drosophila neuronal responses to taste compounds.

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

This protocol describes extracellular recording of the action potential responses fired by labellar taste neurons in Drosophila.

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; Labellar는 Sensilla 맛

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house single or multiple neurons inside, are considered to make the major contribution in responding to the chemical stimuli. By directly recording action potential in the olfactory sensillum after exposure to stimuli, single sensillum recording (SSR) technique provides a powerful approach for investigating the neural responses of insects to chemical stimuli. For the bed bug, which is a notorious human parasite, multiple types of olfactory sensillum have been characterized. In this study, we demonstrated neural responses of bed bug olfactory sensilla to two chemical stimuli and the dose-dependent responses to one of them using the SSR method. This approach enables researchers to conduct early screening for individual chemical stimuli on the bed bug olfactory sensilla, which would provide valuable information for the development of new bed bug attractants or repellents and benefits the bed bug control efforts.

Bed bugs rely on olfactory receptor neurons housed in their antennal olfactory sensilla to detect semiochemicals in the environment. Utilizing single sensillum recording, we demonstrate a method to evaluate bed bug response to semiochemicals and explore the coding process involved.

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 ​​Sensillum 기록을 사용하여

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house ...

Single Sensillum Recordings for Locust Palp Sensilla Basiconica

The palps of locust mouthparts are considered to be conventional gustatory organs that play an important role in a locust&#39;s food selection, especially for the detection of non-volatile chemical cues through sensilla chaetica (previously named terminal sensilla or crested sensilla). There is now increasing evidence that these palps also have an olfactory function. An odorant receptor (LmigOR2) and an odorant-binding protein (LmigOBP1) have been localized in the neurons and accessory cells, respectively, in the sensilla basiconica of the palps. Single sensillum recording (SSR) is used for recording the responses of odorant receptor neurons, which is an effective method for screening active ligands on specific odorant receptors. SSR is used in functional studies of odorant receptors in palp sensilla. The structure of the sensilla basiconica located on the dome of the palps differs somewhat from the structure of those on the antennae. Therefore, when performing an SSR elicited by odorants, some specific advice may be helpful for obtaining optimum results. In this paper, a detailed and highly effective protocol for an SSR from insect palp sensilla basiconica is introduced.

This paper describes a detailed and highly effective protocol for single sensillum recordings from the sensilla basiconica on the palps of insect mouthparts.

메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음

The palps of locust mouthparts are considered to be conventional gustatory organs that play an important role in a locust&#39;s food selection, especially ...

전갈 페그 Sensilla의 전기 생리학

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae

체관부 체 요소에 전기 신호를 획득 및 측정을위한 전기 침투 그래프 (EPG)의 새로운 응용 프로그램

모쓰 강한 시스템에서 Electrophysiological 측정

목공 딱정벌레의 부속물을 위한 주사 및 투과 전자 현미경의 시료 제조 방법

의 감각 뉴런의 분리

신경 회로 녹화 본래대로 바퀴벌레 신경계에서

세포 내 기록, 감각이 필드를 매핑하고, 거머리의 배양 확인 된 뉴런, Hirudo의 medicinalis

에서 전기 생리학 기록

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 Sensillum 기록을 사용하여

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Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 ​​Sensillum 기록을 사용하여

메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 Sensillum 기록을 사용하여