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	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy+of+leprosy+for+control+programmes.">Chemotherapy of leprosy for control programmes.</a> Technical Report Series. 675, 18-22 (1982).</li><li>Cole, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+gene+decay+in+the+leprosy+bacillus.">Massive gene decay in the leprosy bacillus.</a> Nature. 409, 1007-1011 (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leproma+Web+Server.">Leproma Web Server.</a> Leproma Web Server [Internet]. , (2004).</li><li>Groathouse, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+Polymorphic+Loci+for+Molecular+Typing+of+Strains+of+Mycobacterium+leprae.">Multiple Polymorphic Loci for Molecular Typing of Strains of Mycobacterium leprae.</a> J. of Clinical Microbiology. 42, 1666-1672 (2004).</li><li>Young, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Short+Tandem+Repeat+Sequences+to+Study+Mycobacterium+leprae+in+Leprosy+Patients+in+Malawi+and+India.">Use of Short Tandem Repeat Sequences to Study Mycobacterium leprae in Leprosy Patients in Malawi and India.</a> Public Library of Science: Neglected Tropical Diseases. 2, E214-E214 (2008).</li><li>Monot, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+Variable-Number+Tandem+Repeats+Appropriate+for+Genotyping+Mycobacterium+leprae.">Are Variable-Number Tandem Repeats Appropriate for Genotyping Mycobacterium leprae.</a> J. of Clinical Microbiology. 46, 2291-2297 (2008).</li><li>Kimura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Variable+Number+Tandem-Repeat+Genotyping+for+Mycobacterium+leprae+Clinical+Specimens.">Rapid Variable Number Tandem-Repeat Genotyping for Mycobacterium leprae Clinical Specimens.</a> J. of Clinical Microbiology. 47, 1757-1766 (2009).</li><li>Weng, X. i. a. o. m. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+Distribution+of+Mycobacterium+leprae+Genotypes+in+a+Region+of+High+Leprosy+Prevalence+in+China:+a+3-Year+Molecular+Epidemiological+Study.">Identification and Distribution of Mycobacterium leprae Genotypes in a Region of High Leprosy Prevalence in China: a 3-Year Molecular Epidemiological Study.</a> J. of Clinical Microbiology. 45, 1728-1734 (2007).</li><li>Weng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+leprosy+in+Qiubei+County,+Yunnan,+China:+Insights+from+an+eight+year+molecular+epidemiology+investigation.">Transmission of leprosy in Qiubei County, Yunnan, China: Insights from an eight year molecular epidemiology investigation.</a> Infection, Genetics and Evolution. , (2010).</li><li>Sakamuri, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population-Based+Molecular+Epidemiology+of+Leprosy+in+Cebu,+Philippines.">Population-Based Molecular Epidemiology of Leprosy in Cebu, Philippines.</a> J. of Clinical Microbiology. 47, 2844-2854 (2009).</li><li>Fontes, A. N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+diversity+of+Mycobacterium+leprae+isolates+from+Brazilian+leprosy+patients.">Genetic diversity of Mycobacterium leprae isolates from Brazilian leprosy patients.</a> Leprosy Review. 80, 302-315 (2009).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

나병 환자의 피부 샘플 컬렉션 피부 진료소에서 일하는 숙련된 임상 또는 기술자가 필요합니다. 이 샘플을 처리 실험실 종사자 실험실 외투, 장갑 및 보호 눈 착용을 착용하고 인간이나 아르마 딜로 조직의 감염 샘플을 처리하는 바이오 안전 캐비넷에서 작업에 큰주의를해야합니다. 표면 및 도구의 소독도 중요합니다. 깨끗하고 살균 바이오 안전 캐비넷에서 작업하는 것은 DNA 샘플의 오염을 피하는 것이 중요합니다. DNA 추출은 Qiagen 같은 회사에서 추출 키트의 발전에 상대적으로 쉽게 덕분되고 있습니다. 약도는 신중하게 따라야합니다. 사용하지 않을 때는 모든 샘플은 추운 보관해야합니다. 샘플에 대한 반복, 극단적인 온도 변화를 피하십시오. 이 작품에 사용되는 DNA의 primers는이 문서의 끝부분에 문학 참조 목록에서 인용되었습니다 여러 업체에서 주문하실 수 있습니다. 케어는 오염을 방지하기 위해 DNA 무료 환경에서 primers 작업로 이동해야합니다. Primers가 건조 분말로 와서 TE와 혼합 및 100μM 농도로 희석해야 다음 작은 양이 (그림 2A)로 구분됩니다. primers의 작업 솔루션은 더욱 10μM 농도로 희석하고 있습니다. 다시 말하지만, 영역 / primers를 사용하고 준비 후즈에서 DNA 샘플을 사용하지 마십시오. PCR 제품도 사용하지 않을 때 감기에 보관해야합니다. 3 % 아가로 오스 겔 준비 더 DNA 밴드 분리를 제공하지만, 실행하는 데 오래 걸립니다. 순수하게 정성을 위해, 2 %는 일반적으로 충분합니다. 아가로 오스 젤에서 DNA를 얼룩에 사용 Ethidium의 브로마이드 솔루션은 피부를 통해 흡수되어 매우 활성화 genotoxin입니다. 이 솔루션과 아주 잘 사용하고 항상 장갑을 착용해야되는 스테인드 젤을 처리합니다. 모든 DNA 샘플이나 ethidium 브로마이드 자료를 처리 후에는 깨끗이 손을 씻으십시오. ethidium의 브로마이드 얼룩 솔루션의 폐기, 기관 지침에 따라 세척 및 젤류. 젤이 정기적으로 필요하지 않습니다, FLA 방법이 설립되면이 단계는 제거하실 수 있습니다. 그것은 시간과 시약이 소요됩니다. FLA에 대한 샘플을 준비에 사용되는 포름 아미드 솔루션은 또한 매우 유독 신경을 써서 처리한다. 의 사용 후 손을 씻으십시오. 기관 지침에 따라 그것의 처분. 피크 스캐너 소프트웨어를 사용하여 FLA의 결과를 읽는 것은 도전하실 수 있습니다. allele 전화 (탠덤 반복의 수)의 기본적인 세트 CSU (표 4-7)에서 개발되었습니다. (M. 다른 변종이 leprae 연구 있으므로 그것은 4-7 테이블 모두 포함되지 않을 수 있다고 지적한다. 나열된 범위 밖 복사 번호 대립 유전자를 찾을 수 있습니다.) 하나 특정 과제는 &#39;말을 더듬&#39;봉우리를 포함합니다. 이들은 특히 그러한 10 (TA)로 2-3 기본 쌍 반복을 포함 STRs의 봉우리의 가족입니다. 때때로 읽고 올바른 최고를 선택하는 것은 어렵습니다 (그림 7). 이 그림에서, 190 BP의 긍정적인 통제 정상가 주봉이다. 2아르 높이 낮은 봉우리, 4, 또는 6 기본 쌍 큰 또는 주봉보다 작은 &#39;못들었의 봉우리.라고합니다 A - 미행도 혼란을 일으킬 수 있습니다. A - 미행은 텍스트와 그림 8의 앞부분에서 설명한 것입니다. 마지막으로, PCR 제품 샘플에 매우 풍부하는 경우, 봉우리는 이중 스파이크와 함께 나타날 수 있습니다. 이 경우, 정상 형태의 센터를 참조하십시오. (그림 6, 환자 6 참조). 데이터 관리 작업이 유형에 대한 강력한 작업이 될 수 있습니다. 작업 또는 절차의 날짜, 운영자, 스트립 / 플레이트지도, FLA 주문, PCR 조건과 요리법, 젤류 및 사진의 날짜, 저장 온도, DNA 템플릿 dilutions, FLA 모든 관련 등의 모든 실험에 대한 정보를 기록하는 것이 중요하다 전자 파일의 저장 위치 등 좋은 조직 및 데이터 관리는 미래의 정보의 특정 부분을 찾는 동안 시간의 시간을 절약할 수 있습니다. 여기에 설명된 실험실 작업은 콜로라도 주립 대학에서 그리고 전세계 다른 지역에서 몇 년 동안 계속되어왔다. 수집된 데이터의 모든 수단과 방법은 나중에 사용할 수있을 어떤의 대형 사진이 등장하기 시작합니다. 수치 10A와 10B는 이러한 DNA 지문이 다른 M.을 구분하는 데 사용할 수있는 방법을 보여줍니다 국가 (10A) 또는도 간의 가족 (10B) 사이 leprae 변종. 가족 및 지역 사회 연계 케이스 M. 휴대 표시되었습니다 leprae 유사하거나 동일한 VNTR 스트레인 종류의. 희망은 전송 네트워크의 조기 발견 시스템이 사람 MOS 위해 개발된 수 있도록 나병 전송 모드 (S)에 대한 통찰력을 얻을 수있을 수있다영구적인 신경 손상과 피부과이 완료되기 전에 위험하고 치료 약물 치료에 t가 시작할 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> DNeasy 혈액 및 조직 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 69,504 </td><td></td></tr><tr><td> 멀티 플렉스 PCR 키트 </td><td> Qiagen </td><td> 206143 </td><td></td></tr><tr><td> DNA Primers </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 아가로 오스 겔 </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 배 또는 배의 젤 로딩 버퍼 </td><td> 뉴 잉글랜드 Biolabs </td><td> B7021S </td><td> 자신의 *를 사용할 수 요리법 </td></tr><tr><td> Ethidium의 브로마이드 솔루션 </td><td> 여러 </td><td></td><td> 죄수의 희석. </td></tr><tr><td> 안녕하세요 - 디 포름 아미드 솔루션 </td><td> 응용 BioSystems </td><td> 4,311,320 </td><td></td></tr><tr><td> 진 스캔 -500 리즈 </td><td> 응용 BioSystems </td><td> 4,322,682 </td><td></td></tr></tbody></table> <a href="http://biowww.net/buffer-reagent/6X-Gel-loading-buffer-bromophenol-blue-sucrose.html">* http://biowww.net/buffer-reagent/6X-Gel-loading-buffer-bromophenol-blue-sucrose.html</a> <table border="1"><tbody><tr><th> 장비 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> 2 냉장고 </td><td> 4 ° C : DNA 샘플 1, 1 primers 및 멀티 플렉스 시약에 대한 </td></tr><tr><td> 1 전자 레인지 </td><td> 아가로 오스와 물이 젤를 만들기 위해 가열 또는 적절한 방법 </td></tr><tr><td> 1 압력솥 </td><td> 자료를 살균 또는 압력 밥솥 </td></tr><tr><td> PCR 기계 </td><td> Thermocycler </td></tr><tr><td> pipettes 2 세트 </td><td> 0.5-10 μl, 10-100 μl, 20-200 μl, primers 1000 μl 1 세트, DNA 1 세트 </td></tr><tr><td> 잠수함 겔 전기 영동 상자 </td><td> 준비 젤류에 대한 양식과 빗과 함께. </td></tr><tr><td> 전기 전원 공급 장치 </td><td> 겔 상자에 연결하기위한 케이블 </td></tr><tr><td> 열 블록 </td><td> Eppendorf 튜브에 대한 </td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> Eppendorf 튜브 / 스트립의 경우 </td></tr><tr><td> 모세관 전기 영동 시스템 (유전자 분석기) </td><td> 또는 분석을 수행할 수 있습니다 기관에 대한 액세스 권한 </td></tr><tr><td> 플라스틱 </td><td> 일회용 에어로졸 피펫 팁, Eppendorf 튜브, 8 - 잘 스트립, 96 - 웰 플레이트, 광학 품질의 일부 </td></tr><tr><td> 인터넷 연결과 컴퓨터 </td><td></td></tr></tbody></table>

dna fingerprinting of mycobacterium leprae strains using variable number tandem repeat (vntr) - fragment length analysis (fla)

나병의 전송의 연구는 원인이되는 대리인 이후, Mycobacterium leprae은, 실험실에서 배양해 수 없습니다 특히 어렵습니다. 박테리아의 유일한 소스는 나병 환자, 그리고 실험적으로 감염된 딜 및 누드 마우스입니다. 따라서 현대적인 역학에서 사용되는 방법 많은 나병 연구에 대해 사용할 수 없습니다. WHO 1 구현된 나병에 대한 광범위한 글로벌 약물 치료 프로그램에도 불구하고, 나병 약 250,000 새로운 가지 경우 매년 많은 국가에서 발병 남아 있습니다. 2 전체 M.가 leprae (마이크로 및 minisatellites라고도 함) 게놈은 3,4를 매핑되어 많은 loci는 2 개 이상의 기본 쌍 세그먼트를 반복 것으로 확인되었습니다. M. 5 임상 계통 leprae 이러한 loci의 많은에 탠덤 반복 세그먼트의 개수 (짧은 탠덤 반복, STR)에 따라 다를 수 있습니다. 5,6,7 가변 번호 탠덤 반복 (VNTR) 5 분석 나병 bacilli의 다른 변종을 구별하기 위해 사용되었습니다. loci 중 일부는 다른 사람이 같은 환자에서 때로는 더 빠르게 변경하는 것 동안 반복 숫자가 적은 변화를 보여주는, 다른 사람보다 더 안정적인 것 같습니다. 특정 VNTRs의 다양성은 스트레인 입력 7, 8, 9에 대한 그들의 적합성에 관한 질문을 가져왔습니다 반면, 신흥 데이터들의 안정성에 다양한 여러 loci을 분석, 가치 역학 도구로 사용할 수있는 것이 좋습니다. 여러 로커스 VNTR 분석 (MLVA) 10 중국 11,12, 말라위 8, 필리핀 10,13, 브라질 14 등 여러 국가에서 나병의 진화 및 전송을 연구하는 데 사용되었습니다. MLVA 여러 단계를 포함한다. 첫째, 박테리아 DNA는 임상 biopsies 또는 슬릿 피부 얼룩 (SSS)에서 호스트 조직 DNA와 함께 추출됩니다. 10 원하는 loci는 다음 중합 효소의 연쇄 반응 (PCR)를 통해 추출 DNA에서 증폭됩니다. 4-5 다른 loci에 대한 찬란 - 표시 primers 그 다음 10 PCR 제품을 원하는 DNA 세그먼트의 존재를 확인하기 위해 아가로 오스 겔 전기를 받게 될 수도 있습니다. 18 loci 네개가 반응의 총 증폭되는, 반응 당 사용, 그리고 모세관 전기 영동을 사용하여 형광 조각 길이 분석 (FLA)에 제출. 아르마 딜로의 DNA는 긍정적인 컨트롤로 사용되는 각 로커스에 대한 반복 복사 알려진 번호 박테리아를 passaged. FLA의 chromatograms 그러면 피크 스캐너 소프트웨어와 조각의 길이가 VNTR 사본 (allele)의 숫자로 변환을 사용하여 검사하고 있습니다. 마지막으로, VNTR의 haplotypes는 패턴 분석하고 있으며, 환자 임상 데이터와 결합하면이 변형 유형의 분포를 추적하는 데 사용할 수 있습니다.

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DNA Fingerprinting of Mycobacterium leprae Strains Using Variable Number Tandem Repeat VNTR - Fragment Length Analysis FLA

에 의한 나병,<emleprae&gt; Mycobacterium</em&gt; 많은 장소에서 아직도 발병합니다. 나병의 전염의 확산과 모드에 대한 자세한 내용을 보려면 위해서는, 결정하는 것이 중요합니다 어떤 변형의<em&gt; M. leprae</em&gt;은 환자를 감염하고 있습니다. 탠덤 반복의 변수 숫자 (VNTR) 입력은 하나의 방법입니다.

의 DNA 지문<emleprae> Mycobacterium</em단편 길이 분석 (FLA) - 가변 번호 탄뎀 반복 (VNTR)를 사용하기> 레인스

The study of the transmission of leprosy is particularly difficult since the causative agent, Mycobacterium leprae, cannot be cultured in the laboratory.  ...

dna-fingerprinting-mycobacterium-leprae-strains-using-variable-number

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

DNA Fingerprinting of Mycobacterium leprae Strains Using Variable Number Tandem Repeat (VNTR) - Fragment Length Analysis (FLA)

26.9K 조회수.  Colorado State University. 에 의한 나병, Mycobacterium 많은 장소에서 아직도 발병합니다. 나병의 전염의 확산과 모드에 대한 자세한 내용을 보려면 위해서는, 결정하는 것이 중요합니다 어떤 변형의 M. leprae은 환자를 감염하고 있습니다. 탠덤 반복의 변수 숫자 (VNTR) 입력은 하나의 방법입니다.

의 DNA 지문 Mycobacterium 레인스