이 작품은 NIH P30 오브라이언 센터 (DK 079337)의 핵심 자원의 지원을받는되었다.

1. Presurgical 준비 <ol><li> 수술 절차,주의 깊게 수행 방법에 상관없이, 중요한 스트레스의 결과. 이러한 스트레스의 영향을 최소화하고 매장량을 극대화하기 위해 동물을 사용 10,11 전에 최소 72 시간 동안 동식물 사육장에서 유지되어야한다. </li><li> 수술 도구, 거즈, 그리고 면봉은 살균해야합니다. 이 악기 터치 봉합이나 수술 분야의 만 팁을 제공하는 멸균 장갑을 사용할 필요가 없습니다. </li><li> 지혈를 들어, 클램핑 압력이 최소가 필요하다고 필수적입니다. 과도한 압력이나 거친 취급으로 인해 혈관에 손상은 24 시간 이내에 엉덩이 - 다리 마비, 장 국소 빈혈, 죽음의 결과로, 혈전증을 일으킬 것입니다. 우리는 더 이상 2보다 GM / cm 2의 압력으로 클램프를 사용하여 문제를 제거하는 것으로 확인되었습니다. 이 클램프는 표 1에 설명되어 있습니다. 클램프 압력은 높은 품질의 외과 instrumen에 의한 클램프의 사양에 표시되어 있습니다t 제조업체. 우리는 저렴한 클램프 또는 일회용 클램프가 보편적 너무 많은 압력을 발휘하는 것으로 확인되었습니다. </li><li> 담보 선박뿐만 아니라 복부 대동맥의 상대적 위치와 아래 대정맥 (IVC)의 위치는 변형에 따라 달라집니다. 당신은 또한 특히 부수적 인 선박의 위치에서 각각의 생쥐 사이의 작은 차이를 발견하실 수 있습니다. </li></ol> 2. 기부자 운영 <ol><li> 마우스는 isoflurane (1.5-2.5 %의 유도, 공기의 1.0 % 유지 보수) 또는 (55-65 밀리그램 / kg) pentobarbital과 anesthetized 수 있습니다. Pentobarbital는 시간 제한 (최대 1.5 시간) 부과하지만, 원하는 경우 더 나은 액세스를 위해 동물을 회전 할 수있는 옵션과 함께 외과 의사를 제공합니다. 마취 시간은 수술 중 소장이나 간에 필요로 할 때 마취로부터 2-3 방울을 넣어 2까지 시간까지 연장 할 수 있습니다. 케타민 / xylazine (케타민과 Xylazine, IP 7 MG / kg 100 밀리그램 / kg 체중)도 잘 훈련 외과 의사 인증 기관 (CA)에서 사용할 수 있습니다N 1-1.5 시간 내에 절차를 완료하지만, 좁은 금고 선량 범위를 갖는다. 미국에서는 pentobarbital의 사용 때문에 짧은 공급의 최근 몇 년 동안 더 많은 문제가되고 있습니다. 그것은 마취의 깊이가이 충분한 지 확신 할 수 모니터링하는 것이 필수적입니다. 발가락 - 핀치 반사는 적절한 깊이의 가장 지표 하나는 또한뿐만 아니라 호흡 속도와 다른 움직임을 유의해야합니다. </li><li> 마취 유도 후, 복부 복부에 머리를 제거하는 탈모 젤이나 면도기를 사용합니다. </li><li> 확산 eagled 위치에 고정 실험실 테이프를 사용하여 운영 보드에 동물을 탑재합니다. 금속 운영위원회는 수술 중에 온도 지원을 제공하기 위해 그 아래에는 난방 패드의 사용을 허용합니다. 우리는 수동으로 집에서 사용하기 위해 소비자 학년 단위 난로의 온도를 제어합니다. 온도는 35-38 ° 사이에 유지됩니다. 금속 운영위원회는 절차를 사이에 소독하기에 용이합니다. </li><li>chlorhexidine 같은 살균제를 사용하여 영역을 소독, 에탄올 세척이 나타납니다. 적절한 소독을 확보하기 위해이 절차를 세 번을 반복합니다. 만약 존재한다면이 또한 머리카락의 잔류 컷 조각을 제거합니다. </li><li> 사용 가위는 복부 내장을 노출하는 몸의 벽을 통해 절개를합니다. </li><li> 복부의 큰 혈관을 노출 옆에 내장 밀어, 면봉을 사용합니다. 내장은이 촉촉한 유지 따뜻한 식염수에 침수되어 거즈의 한 부분에 표시됩니다. </li><li> 무딘 절개를 사용하여 매우 신중하게 떨어져 주변 조직에서 복부 대동맥을 해부. 아래 대정맥에서 떨어져 혈관을 해부 매우주의해야합니다. 조심스럽게 올려 코를해야 같은 허리 동맥과 같은 하나 이상의 지점,있을 것입니다. 해부하는 대동맥의 섹션은 신장 혈관 아래에서 대퇴 동맥에 대동맥의 분기 이상이어야합니다. 이 섹션에서는 많은에 기증 소재로 제공 할 수혈관이 존재 분기 및 기증 동물의 크기 얼마나 많은에 따라 두사람 수신자. </li><li> 방금 분기 위의 신장 동맥과 다른 아래 봉합사를 묶어주세요. 사용 가위는 대동맥을 나눈 완전히 200 U / ML의 헤파린을 포함 식염수에 이식을 씻어. 매우 조심스럽게 용기의 한쪽 끝을 잡고 중력에 의해 혈관을 실행하도록 생리 식염수를 똑. 기포가 혈관을 실행하게하지 마십시오. 그렇지 않으면 intima 나중에 혈전증의 결과로 손상 될 수 있습니다 가능한 한 작은으로 혈관의 끝을 처리합니다. 현장에서 제거하고 즉시 얼음처럼 차가운 생리의 컨테이너에 배치합니다. 기증 동물이 ...에게서 피를 뽑다 할 수 있습니다. </li></ol> 3. 받는 운영 <ol><li> 위의 동물을 마취하고 탈모 젤을 적용하거나 복부에 머리를 제거하는 면도기를 사용합니다. 우리가 0.1 밀리그램 / 진통제를 구축 할 kg에 피하 buprenorphine의 복용량을 관리 절개하기 전에. </li><li> 엠실험실 테이프를 사용하여 운영 분야에 ount는 동물. 동물은 수술하는 동안 체온을 유지 도움이 될 것입니다 따뜻한 운영 단계에 장착해야합니다. </li><li> 그는 말리는 것을 방지하기 위해 눈에 gentamycin의 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 에탄올 세척 한 다음 복부를 소독. 적절한 소독을 확보하기 위해이 절차를 세 번을 반복합니다. </li><li> 다음 단계로 이동하기 전에 다시 한 번 마취의 적절성을 확인합니다. </li><li> 아래에있는 조직에 가해진하지 않도록주의하는 것 두 개의 스테이지에서 피부와 바디 벽을 통해 중간 선 절개를합니다. </li><li> 복부 절개가 열려 개최 확장기를 삽입합니다. 방식의 클램프의 대부분을 유지하는 뒷다리 끝 부분 나사 어셈블리를 가리 킵니다. </li><li> 식염수 멸균 거즈의 광장을 습식 및 장내 이상을 배치합니다. 거즈에 부드럽게 손가락으로 장내에서 면봉을 삽입하고 부드럽게 s (으)로 창자를 통해 반영IDE는 그래서 그들은 거즈의 꼭대기에 앉아있다. 거즈의 또 다른 조각을 가지고, 장내에 넣고 식염수 었죠. </li><li> 대동맥과 아래 대정맥 (IVC)를 다루는 모든 지방 조직을 제거합니다. 부드러운합니다. IVC는 매우 약한 것입니다. </li><li> 부드럽게 IVC에서 infrarenal 대동맥을 해부하기 위해 집게를 사용합니다. 그들 사이의 충분한 용기있는 두 개의 클램프을위한 공간을 제공 할 수있을만큼 넓은 지역에 이러한 구분하면, 이식은 봉합 할 수있는 충분한 용기가있을 것입니다, 그런.의 선택을 해제합니다 해부 할 때, 선박 지점을 찾습니다. 필요한 경우는 낮은 온도 cauterizer로를 부식. </li><li> 방금 분기 위의 신장 동맥과 또 하나 아래 혈관 클램프를 삽입합니다. </li><li> 대동맥을 잘라 요. 대동맥의 끝은 보통 5 mm의 공간을 남겨두고 취소됩니다. 지혈를 확인합니다. 클램프가 올바르게 작동하는 경우, 혈액 만 작은 금액은 절단 후 탈출해야합니다. 출혈이 계속되면, 물론 아무 것도 할 수 없습니다하도록 클램프를 확인하는 것은 interfer입니다그들과 들죠. 대동맥의 아무도가 제거되지 않습니다. 그것은 단지 나눈 값입니다. </li><li> heparinized 생리와 컷이 종료 (200 U / ML)를 헹굼 후 면봉으로 추가 솔루션을 제거합니다. </li><li> 각 끝에서 세 불연속 봉합을 사용하여 장소에 압정으로 고정 그라프 트합니다. 그냥 각 끝에서 문합의 한쪽면을 봉합 한 후 연속 실행 봉합 이상의 불연속 봉합과 나머지 입력하십시오. 7 ~ 8 불연속 봉합은 충분합니다. 당신은 실행 봉합를 사용하는 경우, 혈관 벽이 편안한 상태로 유지하고 문합에 협착증의 원인이하지 않는 것이 있는지 확인하십시오. </li><li> 조심스럽게 두개골 끝에서 클램프를 제거하고 봉합 라인에 누출이 있는지 확인하십시오. 삼투의 작은 금액은 OK는 약 1 분 이내에 정차 제공하고 있습니다. 그것보다 더이 있다면, 그것은 출혈을 멈추게하기 위해 하나의 바늘을 사용할 수 있습니다. </li><li> 부드럽게 침수면 작은 주걱으로 문합 사이트 위의 대동맥에 키를 누른 다음 두 번째 클램프를 제거합니다. 부드럽게 눌러몇 번을 해제하고 대동맥이 특허가 나타납니다 있는지 확인합니다. 이식은 즉시 perfused되고 맥박이 표시됩니다. </li><li> 장내를 덮고있는 거즈를 제거 장소로 다시 이동합니다. 소장의 트위스트를 방지하고 정상적인 해부학 적 방향을 유지하고 있습니다. </li><li> 5-0 Vicryl을 사용하여 근육 층을 닫습니다. </li><li> 5-0 또는 6-0 prolene을 사용하여 피부를 닫습니다. </li><li> 5 MG / 마취를 종료하기 전에 진통제를 증가시키기 위해 kg에 carprophen로 피하에 마우스를 취급합니다. </li><li> 마우스 0.5-0.8 ML의 생리에게 피하을 제공합니다. </li><li> 복구 할 수있는 온수 새장에 마우스를 놓습니다. 가 정상적으로 회복되고 있는지 확인하기 위해 복구하는 동안주의 깊게 모니터링 할 수 있습니다. 수술 후 2-3 시간은 마우스가 비교적 정상적으로 작동해야합니다. 12 시간 후 조합에서 진통제를위한 2 밀리그램 / kg에서 피하 buprenorphine과 동물을 취급합니다. 언제든지 동물이 hunched되어있는 경우, 소음을 만들거나 운동의 제한된 범위를 전시, 문제를 조사합니다. 면최종 원인이 설립 고정 할 수없는, 동물 기관 프로토콜에 따라 euthanized해야합니다. 24 시간에있는 동물은 5 밀리그램 / kg에서 피하 carprophen의 다른 복용량을 받으실 수 있습니다. 뒷다리 마비는 실패 문합이나 혈전을 나타냅니다. 이런 상황에서, 동물은 euthanized해야합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice:+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li><li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique:+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease.">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li><li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection.">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li><li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+graft+transplantation+in+mice.">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li><li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation.">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li><li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice.">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li><li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+in+mice:+current+status+and+future+prospects.">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes.">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li><li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice.">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation.">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl.">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li><li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels.">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

마우스가 잘 immunogenetically 9,12,13 정의되어 있으며, 원하는 경우들이 쉽게 특정 유전자의 표현을 변경하기 위해 조작 할 수 있기 때문에 대동맥 이식의 마우스 모델은 많은 장점을 제공합니다. 도입에 명시된 바와 같이 마우스에 혈관 수술 때문에 선박의 크기 대부분의 모델보다 더 어렵습니다. 같은 대동맥 등의 큰 동맥, 보통 내부 직경 100-200 μm보다 더하지 않습니다, 때문에 이러한 혈관?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 혈관 클램프 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 00396-01 (크기 B-1) </td></tr><tr><td> 뒤몽 집게 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 11293-00 </td></tr><tr><td> 10-0은 microsuture을 Needled </td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td> 스트레이트 가위 </td><td> Roboz 외과 악기 (주) </td><td> RS-5620 </td></tr><tr><td> 낮은 온도 cauterizer </td><td> 비버 - Visitec 국제 </td><td> 8441000 </td></tr><tr><td> 자체 유지 트렉터 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 14,240 </td></tr></tbody></table>

orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease

마우스의 문합을 포함하는 혈관 절차는 일반적으로 어렵고 개별 외과 의사의 기술에 크게 의존 할 것으로 생각됩니다. 이 대부분 사실이지만, 이러한 절차의 어려움을 줄이고 재현성을 향상시킬 수 있습니다 중요한 원칙에는 여러가지가 있습니다. Orthotopic 대동맥 이식은 두 엔드 - 투 - 엔드 문합을 포함하기 때문에 이러한 원칙을 배울 수있는 훌륭한 절차이지만, 일관된 성공을위한 좋은 suturing 기술과 선박의 취급이 필요합니다. 이 절차는받는 사람의 기본 대동맥의 분단 다음 기증자 동물의 복부 대동맥의 길이의 조달과 함께 시작합니다. 조달 대동맥은 다음받는 사람 대동맥의 구분 끝 사이에 위치하여 엔드 - 투 - 엔드 문합을 사용하는 곳으로 봉합되어 있습니다. 이 목표를 성공적으로 농도의 높은 수준, 좋은 도구, 침착, 그리고 감사를 필요로 수행하는 방법을 쉽게마우스 vasculature는 혈전증의 결과로 손상 될 수 있습니다. 이러한 중요한 원칙을 배우는 것은 작은 설치류에 미세을 배우고 대부분의 초보자의 시간을 차지하고이야. 이 프로토콜 전반에 걸쳐, 우리는 다음과 같은 중요한 사항을 참조하십시오. 이 모델은 다른 실험 시스템 1-8의 다양한 혈관 질환을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 여기에 표시된 맥락에서,이 가장 많이 후 이식 혈관 질환, 내막 증식증이 allograft 내에서 발생하는 고체 장기 이식의 일반적인 장기 합병증의 연구에 사용됩니다. 모델의 주요 장점은 양적 morphometric 분석을 용이하게하고 이식 혈관은 추가 제어 구 역할을 할 수있는 내생 선박에 인접 자리 잡고 있다는 것입니다. 여기에 표시된 기술은 가장 자주 18~25g 무게 마우스에 사용됩니다. 우리는 C57BL/6J, BALB / CJ, 그리고 C3H/HeJ의 변종을 사용하여 우리의 경험의 대부분을 축적하고 있습니다.

그림 1은 대동맥 이식을 보여줍니다. 흰색 화살표는 봉합 라인을 나타냅니다. 특허 수술이 볼 수 펄스를 표시합니다. 그림 2는받는 사람의 생존은 56일 기간 동안 다음에 한에서 전형적인 실험을 나타냅니다. 한 그룹은 BALB / C 대동맥으로 이식 (C57BL / 6 X FVB) 야생 - 타입받는 마우스로 구성. &quot;KO&quot;지정 다른 그룹은, 24 시간 이내에 이식의 혈전증에 결과 헴 oxygenase-1, 표?...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease at JoVE.com

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

orthotopic-aortic-transplantation-mice-for-study-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K 조회수.  The University of Alabama at Birmingham. 우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

비디오: Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

연구

의학

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

쥐 Orthotopic 작은 창자 이식

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

쥐에게 Orthotopic 간 이식

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart failure. Here, we describe a detailed surgical procedure for creating pressure overload and cardiac hypertrophy in rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. After anesthesia, the trachea is intubated by inserting a cannula through a half way incision made between two cartilage rings of trachea. Then a skin incision is made at the level of the second intercostal space on the left chest wall and muscle layers are cleared to locate the ascending portion of aorta. The ascending aorta is constricted to 50&#8211;60% of its original diameter by application of a small sized titanium clip. Following aortic constriction, the second and third ribs are approximated with prolene sutures. The tracheal cannula is removed once spontaneous breathing was re-established. The animal is allowed to recover on the heating pad by gradually lowering anesthesia. The intensity of pressure overload created by constriction of the ascending aorta is determined by recording the pressure gradient using trans-thoracic two dimensional Doppler-echocardiography. Overall this protocol is useful to study the remodeling events and contractile properties of the heart during the gradual onset and progression from compensated cardiac hypertrophy to heart failure stage.

We describe a stepwise procedure for creating pressure overload and left ventricular hypertrophy in Wistar rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. This model is extensively used for studying remodeling changes during cardiac hypertrophy and for identifying and evaluating strategies for regression of such changes.

압력 과부하 심장 비대 모델의 창조를위한 쥐의 대동맥 수축 오름차순

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

대동맥 석회화와 염증의 혈관 평활근 세포 및 이미지의 석회화

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

마우스의 최소 침습 가로 대동맥 수축

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due to sodium retention and hyperlipidemia. To study the pathophysiology of this syndrome, rodent models have been developed based on the injection of toxic substances such as doxorubicin causing podocyte damage. In mice, only few strains are susceptible to this model. In wildtype 129S1/SvImJ mice, the administration of doxorubicin by rapid intravenous injection to the retrobulbar sinus induces experimental nephrotic syndrome that features all the symptoms of human disease including sodium retention and edema. After the onset of proteinuria, mice exhibit increased urinary serine protease activity that leads to the activation of the epithelial sodium channel (ENaC) and sodium retention. Pharmacological inhibition of urinary serine proteases by the treatment with sustained release aprotinin abrogates ENaC activation and prevents sodium retention. This model is ideal to study the pathophysiology of proteasuria, i.e., the excretion of active serine proteases that cause ENaC activation by the proteolysis of its &#947;-subunit. This can be regarded as the primary mechanism of ENaC activation and sodium retention in proteinuric kidney disease.

Here, we describe the induction of experimental nephrotic syndrome in 129S1/SvImJ mice by rapid retrobulbar injection of doxorubicin. We also treat nephrotic mice with sustained release pellets containing aprotinin to inhibit urinary serine protease activity and prevent sodium retention.

독 소 루비의 Retrobulbar 주입 및 예방의 지속적인된 출시 Aprotinin 여 볼륨 유지에 의해 쥐에서 신 증후군의 유도

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...

A Model of Reverse Vascular Remodeling in Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease by Aortic Debanding in Rats

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary arterial hypertension (PAH). As a result, approved therapeutic interventions for the treatment or prevention of PH-LHD are missing. Medications used to treat PH in PAH patients are not recommended for treatment of PH-LHD, as reduced pulmonary vascular resistance (PVR) and increased pulmonary blood flow in the presence of increased left-sided filling pressures may cause left heart decompensation and pulmonary edema. New strategies need to be developed to reverse PH in LHD patients. In contrast to PAH, PH-LHD develops due to increased mechanical load caused by congestion of blood into the lung circulation during left heart failure. Clinically, mechanical unloading of the left ventricle (LV) by aortic valve replacement in aortic stenosis patients or by implantation of LV assist devices in end-stage heart failure patients normalizes not only pulmonary arterial and right ventricular (RV) pressures but also PVR, thus providing indirect evidence for reverse remodeling in the pulmonary vasculature. Using an established rat model of PH-LHD due to left heart failure triggered by pressure overload with subsequent development of PH, a model is developed to study the molecular and cellular mechanisms of this physiological reverse remodeling process. Specifically, an aortic debanding surgery was performed, which resulted in reverse remodeling of the LV myocardium and its unloading. In parallel, complete normalization of RV systolic pressure and significant but incomplete reversal of RV hypertrophy was detectable. This model may present a valuable tool to study the mechanisms of physiological reverse remodeling in the pulmonary circulation and the RV, aiming to develop therapeutic strategies for treating PH-LHD and other forms of PH.

The present protocol describes a surgical procedure to remove ascending-aortic banding in a rat model of pulmonary hypertension due to left heart disease. This technique studies endogenous mechanisms of reverse remodeling in the pulmonary circulation and the right heart, thus informing strategies to reverse pulmonary hypertension and/or right ventricular dysfunction.

쥐의 대동맥 해산에 의한 좌심 질환으로 인한 폐고혈압의 역혈관 리모델링 모델

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary ...