베테랑 담당 부서에서 메리트 그랜트와 건강의 국립 연구소의 NHLBI에서 T32-HL098062 그랜트는이 작업을 지원했다. 우리는 기꺼이 랜돌프 H. Hasting, MD, 박사의 조언을 인정하고자하는 그리고 조언과 VA 샌디에고 헬스 케어 시스템의 수의학 단위의 지원.

1. 동물 준비 <ol><li> (작은 마우스는 전문가에 의해 삽관 할 수있다) 8 주 이내에 세 이상 20g 생쥐를 얻습니다. </li><li> 마취 <ol><li> 복강 preanesthetic으로 케타민과 자일 라진 20 ㎎ / ㎏, 각, 생쥐를 주입한다. (이 용량은 완전히 마우스를 마취하기에 충분하지만, 기계 환기에 삽관 후 안전한 전송을 용이하게한다.) 그러나, 투여 량의 조정 기관의 수의사와 협의하여 마취 반응에 따라 필요할 수 있습니다.) </li><li> 90 ~ 120 초 동안 유도 챔버에서 3.5 % 이소 플루 란 / 산소와 마우스에서 마취를 유도한다. </li><li> 주의 깊게 호흡을 관찰합니다. 그것은 이하 45 이상 BPM에 점진적으로 둔화 될 전망. </li></ol></li></ol> 2. 삽관을위한 준비 <ol><li> 유도 챔버에서 마우스를 제거하고 단단하게 목덜미. </li><li> 신사에 쿠션 미세 집게를 사용하여LY 입에서 혀를 확장합니다. </li><li> 두 손가락 사이에 혀를 잡고 부드러운 힘을 주면 혀의 확장을 유지한다. </li><li> 상하 운동과 이경의 검경에 마우스를 위로 당기십시오. </li><li> 단단히 scruffing 동안 이경의 눈을 통해보고 혀와 목덜미에 부드럽게 마우스를 올려. </li><li> 성대 살펴보십시오. 그들은이 시간에 쉽게 볼 수 있어야합니다. laryngis의 aditus (후두 구멍의 구조)는 상대적으로 흰색을 찾아야한다. 각각의 호흡과 코드의 움직임이 있어야합니다. 코드가 이동하지 않거나 불완전하게 시각화하는 경우, 약간 동물을 회전하고 부드럽게 목을 hyperextend. </li><li> 지배적 인 손으로 연필처럼, 카테터의 끝을 관통 PE10 튜브의 1cm 길이로, 카테터에 20 G, 1을 누른 상태에서 검경의 측면에 삽입합니다. PE 튜브는 탐침이나 소식 자 역할을합니다. </li><li> PE10의 TUBI 직접NG 성대를 통해 (탐침)와 허브까지 PE 튜브에 20 G 카테터 (기관 내 튜브를) 진행은 아래 앞니의 수준에 있습니다. 빨리이 탐침을 제거합니다. </li><li> 조심스럽게 검경 떨어져 동물을 가지고 실험을하는 동안 전신 마취를 유지하기 위해 연속 2 % 이소 플루 란 (isoflurane)와 인공 호흡기에 동물을 배치하여 튜브의 위치를​​ 확인합니다. 삽관을 확인하는 PEEP 트랩을 통과 만료 된 공기 (기포)를 시각화. 식도 삽관 몇 거품이 발생할 수 있지만, 그와 같은 발음 또는 기관 내 삽관과 같은 일치하지 않을 수 있습니다. 또한, 음의 굴절을위한기도 압력 추적 (그림 1)을 관찰한다. 이 튜브의 적절한 배치를 확인합니다. 대안 적으로, IV 튜빙에 소량의 물을 배치하고는 ET 튜브에 연결한다. 호흡 2 마우스와의 움직임을 확인. 식도 삽관, P의 경우ressure 추적은 상당히 높은 압력과 부정적인 편향을 발표 할 예정이다. 기말 CO 2가 도움이 될 것입니다 있지만, 기술적으로이 작은 갯벌 볼륨 (~ 200 μL)이 매우 비쌀 할 수있는 장비 주어 매우 어려울 것입니다. 설명하는 간단한 기술은 완전히 충분하고 훨씬 저렴합니다. 이소 플루 란 마취를 사용할 수없는 경우, 모든 절차가 일반적인 마취 자일 라진 20 ㎎ / kg과 함께 케타민 80-120 ㎎ / kg을 사용하여 수행 될 수있다. </li></ol> 3. 대체 기술 : 직접 후두경 이경 기술로는 주로 폐에 연구 물질의 직접 떨어 뜨림에, 다른 목적을 위해 쉬움 사용됩니다. <ol><li> 유도 챔버에서 90 ~ 120 초 동안 3.5 %에서이 절차에 혼자 이소 플루 란과 동물의 마취를 유도한다. </li><li> 단단히 두개골의 기지에서 동물의 목덜미에 부드럽게 혀를 연장미세 집게로. </li><li> 동물이 더 뽑아 할 수 없을 때까지 부드럽게 혀를 잡고 똑바로 검경에 수정되지 않은 동물을 잡아 당깁니다. </li><li> 성대는 단독으로이 기술에 의해 가장 자주 시각화하지만, 동물 및 전체보기로 그들을 가져 하이퍼 확장 목을 회전 할 수 있습니다. </li><li> 성문에 instillate를 포함하는 겔로드 피펫을 사전 유체를 주입. 검경은 하인두와 씰을 만들고 있기 때문에 마우스가 코드를 통해 이동하지 않는 잔여 액체를 대기음됩니다. 이것은 쉽게 rhonchorous 의해 확인이 호흡 할 때 유체가 폐에 완전히 분산 될 때까지 마우스를 지금 만드는 소리. </li><li> 대안 적으로, 액체 뒤에서 공기 러스와 유체의 50 μl를 함유하는 0.5 ㎖ 주사기에 PE10 튜브를 연결한다. 0.5 cm의 성대를 통해주의 깊게 PE 튜브를 사전 천천히기도에 내용을 방출. 그러나, 하부기도에 가끔 외상은 U 발생샘플을 더 잘 전달하지 않고이 기술을 노래. </li></ol>

<ol>
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Lung Res. 36, 25-30 (2010).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 보고서에서 우리는 비 외상성과 같은 동물에서 반복적으로 사용할 수있는 마우스를 삽관하는 간단하고 신뢰할 수있는 기술을 설명합니다. 이 기술은 겸손한 합계 구입하실 수 있습니다 간단한 실험실이나 의료 장비를 수행 할 수 있습니다. 원래 스팅 및 동료 (4)에 의해보고 된 직접적인 후두경의 기술은, 다양한 용도로도 이용 될 수 있지만 주로 정확하게 하부 호흡기에 시험 물질을 전달하는. 때문에 우리는 반복 측정에 대한 편의성, 속도, 단순성, 신뢰성, 낮은 비용, 잠재적 인 날짜에 다른 연구자에 의해보고 된 우수한이 기술을 발견했다. 마우스를 삽관하는 기술은 새로운 것이 아니다. 초기 보고서 중 하나는, 기관의 사용 transillumination 24 G 카테터 5 경구 삽관 하였다. 그러나,이 연구 및 기타 6,7 TEC를 복제 할 수있는 충분한 정보를 제공하지 않았다우리의 실험실에서 hnique. 최근에 다른 수사관은 큰 성공 8,9와이 transillumination 기술을 사용했다. 브라운과 동료에 의해 ​​최초의 상세한 연구는 생쥐, 45 ° 뒤 일시 중단, 자신의 tracheas이 transilluminated했고, 자신의 기관이 제작 후두경 블레이드 (10)를 사용하여 직접 시각화에서 PE90 튜브 경구 삽관하는 연구 결과를보고했다. 이 기술은 복제가 어렵고, 따라서 광범위하게 이용되지 않은 입증되었다. 추가 보고서는 기술의 신뢰성을 향상시키기 위해 강성 광학 스코프 또는 광통신의 사용을 설명한다. Vergari 및 동료 (11, 12)은 성대를 시각화하는 외부 직경 단단한 관절 경 1.7 mm를 사용하고 성문을 통해 가이드 와이어를 배치했다. 저자는 전문적이고 고가의 장비로 수행이 기술 100 % 성공을보고합니다. 이 수술 장비의 비용은 생쥐에서 널리 사용 금지 보인다. 추가 기술은 운영 현미경과 2 층의 가이드 와이어 (13)를 사용하여 개발되었다. 이 기술은 우리 유사하지만 운영 현미경의 사용을 필요로하고, 따라서 우리는 실질적으로 저렴 이경의 사용을 선호. 광섬유 삽관 기술은 상대적으로 저렴한 배터리 전원을 사용하는 광섬유 소스 (14)를 사용하여보고 된 바있다. 우리는이 광섬유 기술을 사용하려했으나, 이에 해당하는 광섬유 시각화 채널이 없기 때문에 유용보다 광을 덜 발견했다. 맥도날드와 동료는 더 강력한 할로겐 광원을 사용하고 작은 샘플에서의 성공을보고했다. 그들은 반복적으로 또한기도 저항 (15)을 측정 할 수 있었다. 상이한 시점에서기도 저항의 반복 측정이 다른 (16)에 의해보고되었다. 자오 등은. 기관을 천공하고, 우울을 통해 가이드 와이어를 공급하여 역행 기술을 사용O-및 구강 인두 17. 최근에 가수, 등.는 카테터 (18)의 위치를 문서화하기 위해 운영 현미경과 형광 투시법을 사용하여 마우스를 왼쪽 mainstem 기관지의 선택적 삽관을 수행했습니다. 그런 다음 폐에 선택적으로 시험 물질을 주입하기 위해이 방법을 사용했다. 그러나, 이것은 다시 상당한 비용과 고도의 기술 교육을하지 않고 사용할 수있는 방법이 될하지 않을 것입니다. 또한, 투시는 연구에 방사선 위험을 추가합니다. 요약하면, 소아 이경을 사용하여 마우스를 직접 후두경은 기관 내 삽관을위한 가치있는 기술, 반복 삽관 및 삽관없이 시험 물질의 전달입니다. 우리는 기관 절개술이 기술은 우수한 찾아 이전에 간접적으로 마우스에서 기관 내 삽관 법을 수행하는 방법을보고했다.

실험실 마우스 생물학 한테 진찰 Pathobiology의 주요 포유류의 모델로 거의 모든 종을 대신하게했다. 실험실 마우스는 명확하고 광범위하게 인간의 질병의 모델로서 가치가있을 것으로 나타났다 인간 생물학 및 질병에 대한 우리의 이해의 발전에 귀중한 입증 된 가장 작은 포유류의 종입니다. 짧은 임신 기간의 시간과 실질적으로 낮은 비용으로는 생물 의학 연구에서 일반적인 도구로 널 (null)과 형질 전환 마우스의 개발과 연구를 허용했다. 그러나, 평균 실험실 마우스 (20 ~ 25 g)을의 크기는 결과적으로 연구자에 큰 포유 동물 종을 연구, 생리 학적 또는 외과 적 기반 연구에 자신의 연구를 제한하고있다. 이 연구에 마우스를 사용하는 장애는 깊은 마취 생리적 측정 또는 광범위한 수술을 허용하는 삽관 기술로 발생하는 어려움이다. 기관 절개 1 TE 표준으로 사용되었다필요하기 때문에이 기술과 겸손 기술을 수행하는보다 쉽게​​ 대신 삽관의 chnique. 그러나, 기관 절개술은 만성 또는 복구 수술 연구에 도움이되지 않습니다; 따라서, 급성 실험에 한한다. 기관 절개술은 또한 염증이나 민감한 생리적 반사 신경이 중요 한 연구에서 교란 변수가 될 수 있습니다. 우리 연구실은 다른 연구자에 의해 설명 된 기술의 대부분을 시도하고 여러 가지 이유로 그 불충분 함을 발견했습니다. 기관 절개도이다 외상성 출혈 및기도 염증을 유도한다. 훨씬 더 문제가 그것에서 실질적으로 반복 될 수 있다는 것이다. 장비 겸손한 투자를 필요로하는 많은 상대적으로 비 침습적 기술은 충분히 신뢰할 수 없습니다. 다른 기술은 장비가 특정 응용 프로그램에서 작동하는지 몰라도 정당화하기 어려운 고가의 장비를 필요로합니다. 따라서, 우리는 더 이상 t을 요구하지 않는 비 외상성 기술을 개발하기 위해 노력한 특수 장비의 소극적인 투자는 빠르게 달성 될 수 있고, 안정적으로, 만성 모델에서 반복 될 수 있고, 많은 수의 동물에서 사용될 수있다. 여기에서 우리는 이러한 기술을보고합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="706">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:411px;">Operating Otoscope Head</td>
			<td style="width:144px;">Welch Allyn</td>
			<td align="right" style="width:83px;">21700</td>
			<td style="width:69px;">&#160;$188.98</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Otoscope Handle</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td align="right">71000</td>
			<td>&#160;$112.20</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Reuseable Speculum</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td align="right">22002</td>
			<td>&#160;$ 3.98</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fine Forceps</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>18-779</td>
			<td>&#160;$107.18</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Small clamp stand to hold otoscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Optional Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane Vaporizer (multiple circuit with vacuum waste gas handling)</td>
			<td>Summit Medical</td>
			<td></td>
			<td align="right">$3,000</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Flexivent (Animal Ventilator)</td>
			<td>SCIREQ</td>
			<td></td>
			<td align="right">$35,000</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Intravenous catheter (20 ga x 1 inch)</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">381233</td>
			<td>&#160;$&#160; 9.62</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Polyethylene tubing (PE10) (0.011 inch I.D., 0.024 inch O.D.) 100 ft</td>
			<td>Intramedic, Clay-Adams</td>
			<td align="right">427401</td>
			<td>&#160;$115.70</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ketamine 100 mg/ml (10 ml bottle)</td>
			<td>Butler</td>
			<td align="right">23061</td>
			<td>&#160;$10.00</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylazine (100 ml bottle)</td>
			<td>Vedco</td>
			<td align="right">24105</td>
			<td>&#160;$20.00</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane (250 ml bottle)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;$15.00</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">vecuronium bromide 10 mg/10 ml</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>NDC 0069-0094-01</td>
			<td align="right">$15.00</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope

마우스는 야생형 및 유전자 변형 모두는 현재 생물 의학 연구의 주요 포유류의 모델입니다. 삽관 및 기계적 환기 깊은 마취 또는 폐 기능의 측정에 따라 수술을 필요로 전체 동물 실험을 위해 필요합니다. 기관 절개술은 기계 환기를 허용하는이 마우스에서기도 삽관을위한 표준이다. Orotracheal 삽관 때문에 상당한 기술적 어려움이나 고도의 전문과 고가의 장비에 대한 요구 사항의보고되었지만 성공적으로 많은 연구에 사용되지 않았습니다. 여기서 우리는 2.0 mm 검경 장착 이경을 사용하여 기관 내 튜브로 20 G 정맥 카테터를 사용하여 직접 후두경의 기술을보고합니다. 우리는 삽관과 생쥐의 폐 기능의 정확한 평가를 수행하기 위해 광범위하고 안정적​​으로이 기술을 사용하고 있습니다. 이 기술은 경험이 풍부한 손에 본질적으로 동물 손실, 안전 입증했다. 또한,이 기술만성 모델 마우스의 반복 된 연구에 사용할 수 있습니다.

위의 기술을 가진 삽관 법은 안정적이고 빠르다. 기관 내 튜브의 적절한 배치는 쉽게의 침수 호기 사지에서 배출 가스 버블 링을 관찰에 의해 확인 된 인공 호흡기 회로 (일반적으로 PEEP 트랩에서) (그림 1)를 추적기도 압력에 부정적인 편향의. 기도 압력 추적에 부정적인 편향은 가장 신뢰할 수 있습니다. 기타 호기 인공 호흡기 회로 (2)에 연결 정맥 튜브의 작은 액체 방울의 움직임을 사용했습니다. 우리는이 기술을 광범위 사용하지 않지만, 그것은 튜브의 위치를​​ 확인하기에 충분해야한다. 경험이 연산자는 첫 번째 패스에이 방법에게 시간의 약 90 %를 사용하여 마우스를 삽관 할 수 있습니다. 관은 즉시 제거하고, 실패하는 사람들을 위해, 동물은 이소 플루 란 마취 reinduced 및 배치가 다시 시도됩니다. 동물은 ESO의 경우 인공 호흡기 회로에 접속두면어떠한 간섭도없는 경우 phageal 삽관, 위장 서서히 insufflate 높은 피크기도 압력, 저산소 혈증, 및 궁극적으로 죽음을 생성하는 것이다. 높은 피크기도 압력이 음의 흡기 노력을하지 않고 관찰하는 경우, 동물은 즉시 인공 호흡기 제거 및 extubated해야합니다. 그러나 인공 호흡기에서 동물을 제거하고 기관 내 튜브를 제거하면 쉽게 반전. 삽관을 필요로 지난 300 동물 연구 기간 동안 숙련 된 운영자는 두 번째 시도에 의해 초기 시도 및 95 % 이상으로 80 %를 삽관. 모든 동물은 경험을 가진 사람의 세 번째 시도에서 삽관 하였다. 마우스를 삽관하는 데 걸리는 시간은 이소 플루 란으로 마우스를 유도하는 preanesthetic, 90 ~ 120 초 동안 5 분, 30 초 확인하고 실제로기도 삽관에에 달려있다. 우리는 새로운 연수생 먼저 성대를 시각화하는 법을 배워야한다는 것을 발견했다. 성공적 성대 10 회 전체보기를 입증 할 수 있다면, 그들은 준비가 t이다O 삽관 훈련을 시작합니다. 연수생이 성공적으로 10 회를 삽관 한 후, 자발적으로 호흡 동물 추적을기도 압력에 부정적인 편향에 의해 입증, 그들은 실험 동물의 연구를 수행 할 수 있습니다. 그러나, 트레이닝 영상은 크게 학습 곡선을 가속화 할 것이다. 단지 경험이 연산자는이 기술에 의해기도의 외상을 유도하고 기술을 배우면서 동물의 죽음은이 설정에 발생할 수 있습니다. 그러나, 경험이 풍부한 연산자와 동물의 손실이 거의 없습니다. 이것은 지난 40 년 동안 1,000 명 이상의 동물에서 우리의 경험이다. 이 때문에기도 압력의 정확한 측정을 가능하게기도하면 확실한 밀봉을하게하고기도 저항의 측정을위한 충분한 직경 때문에 20 G 카테터는 쥐의 기관 내 튜브로 사용됩니다. 그러나, 탐침이나 소식 자로서 PE 튜브를 사용하여 20 G는 성대를 통해보다 쉽고 안정적​​으로 전달할 수 있습니다. 1카테터 (2.5 cm)의 길이는 튜브 안정성 하부 앞니에서 허브로 배치 할 수 있지만, 하부기도에 외상을 유발하거나 mainstem 기관지를 삽관없이. 우리는기도 저항의 측정을 수행한다 (그림 2) 메타 콜린 용량 - 반응 곡선을 수행하고, 폐의 압력 - 볼륨 관계 (그림 3)을 측정하기 위해이 방법을 사용합니다. 이러한 측정의 모든 동물은 완전히 쓸모있는, 정확한 데이터를 얻기 위해 마비해야합니다. 이 목적을 위해 우리는 nonrecovery 실험에서 저렴 nondepolarizing 마비로 pancuronium 브로마이드를 사용했습니다. 그러나, pancuronium은 더 이상 사용할 수 없습니다 때문에 긴 반감기의 복구하려는 동물에 사용할 수 없습니다. 따라서, 우리는 시간이 지남에 따라 반복 측정 할 수있는 옵션을 제공하기 때문에 자신의 짧은 반감기의 vecuronium (30 분) 또는 마비에 대한 rocuronium로 전환했다. 다른 연구자들은 사용했다탈분극 마비로 석시 닐 콜린, 그러나 그것의 반감기는 실험의 대부분 너무 짧은되었습니다. 또한 석시 닐 콜린 히스타민 3을 일으킬 수 있으므로 잠재적 교란 변수가 될 것입니다. 우리는 또한 원래 헤이스팅스에 의해 쥐에보고 된 기술을 기반으로 폐에 시험 물질의 전달을 위해 광범위하게 직접 후두경 기술을 사용했다. 마우스가 의무를 코 브리더하고 코 점안이 쉽기 때문에 대부분의 연구는 낮은 호흡기에 시험 물질의 전달을위한 코 점안을 사용했습니다. 그러나, 우리는 코 점안 방법은 정량 배달을 위해 신뢰할 수없는 것으로 나타났습니다. 우리는 양적 배송이 폐에 더 신뢰성 및 유통 것으로 나타났습니다 직접 후두경 기술을 사용하여 균일입니다. 직접 점안 기술의 우리의 주요 사용하기도 전에 항원을 제공 할 수있다알레르기 염증의 NA 모델 (그림 4)과기도 과민성 (그림 2). 우리는 또한이 방법을 통해 이러한 사이토 카인 및 의약품 등의 시험 물질을 전달했다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50269/50269fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50269/50269fig1.jpg" /> 그림 1.기도 압력 추적. 파란색 선은기도 압력을 반영하고 빨간색 선은 바로 삽관 후 마우스에서 추적 호흡량을 반영한다. 압력 곡선 (검은 색 화살표)의 음 (하향) 편향은 자연 호흡 노력에 의해 마우스에 부정적인 흉부 압력 (C57BL / 6, 24g)의 생성을 표시하고 기관 내 튜브의 적절한 배치를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50269/50269fig1highres.jpg" target="_blank">V하려면 여기를 클릭하십시오</a><html> 이 그림의 더 큰 버전을 국제 교육 주간. <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50269/50269fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50269/50269fig2.jpg" /> 그림 2.기도 저항 및 메타 콜린 용량 - 반응 곡선. 마우스 (C57BL / 6) 기술에 의해 삽관 초음파 분무기를 통해 전달 메타의 두 배 용량을 사용하여기도 저항 및 기관지 반응성의 조치를받을 수 있습니다. 이 대표 예에서, 제어 동물 ㎖ 및 알부민 예방 접종 및 마우스가 메타 콜린에 과민 반응을 보여줍니다 도전 25 ㎎ / 최대 메타 할 최소한의 응답을 갖는다. 이러한 측정은 20 G 카테터와 삽관 마우스로 만든 tracheostomized 마우스를 만든 것과 구별된다. / files/ftp_upload/50269/50269fig3highres.jpg &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/50269/50269fig3.jpg &quot;/&gt; 그림 3. 압력 볼륨 곡선.이 pancuronium으로 마비 20 G 정맥 카테터와 삽관 된 20g 마우스의 대표적인 압력 볼륨 곡선, 기계적 환기. 이는 카테터 30 센티미터 H 2 O 압력까지 누출되지 않기 때문에, 마우스의 정확한 측정 압력 볼륨의 관계를 확인하기 위해 사용될 수 있음을 보여준다. <img alt="그림 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50269/50269fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50269/50269fig4.jpg" /> 그림 4. 알레르기 염증의 오발 부민 모델.이 대표 헤 마톡 실린 및 예방 접종 및 난백 알부민에 도전 한 마우스의 폐의 스테인드 섹션을 에오신입니다. 그것은 ovalbu 점적의 일반화 된 결과를 보여줍니다분은 직접 후두경 검사 방법 (배율 4 배)를 통해 관리.

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Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

우리는 2.0 mm 검경과 이경을 사용하여 직접 후두경을 통해 마우스에서 기관 내 삽관을위한 간단하고 신뢰할 수있는, 그리고 상대적으로 저렴한 방법을 개발했습니다. 이 기술은 atraumatic이고 만성 실험에서 반복 측정에 사용될 수있다. 우리는 우수한 기관 절개 또는 이전에 비수술 적 방법을보고 찾을 수 있습니다.

마우스의 기관 내 삽관<em&gt;를 통해</em이경 사용&gt; 직접 후두경

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

31.0K 조회수.  VA San Diego Healthcare System.  우리는 2.0 mm 검경과 이경을 사용하여 직접 후두경을 통해 마우스에서 기관 내 삽관을위한 간단하고 신뢰할 수있는, 그리고 상대적으로 저렴한 방법을 개발했습니다. 이 기술은 atraumatic이고 만성 실험에서 반복 측정에 사용될 수있다. 우리는 우수한 기관 절개 또는 이전에 비수술 적 방법을보고 찾을 수 있습니다. 

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Guidelines for Elective Pediatric Fiberoptic Intubation

Fiberoptic intubation in pediatric patients is often required especially in difficult airways of syndromic patients i.e. Pierre Robin Syndrome. Small babies will desaturate very quickly if ventilation is interrupted mainly to high metabolic rate. We describe guidelines to perform a safe fiberoptic intubation while maintaining spontaneous breathing throughout the procedure. Steps requiring the use of propofol pump, fentanyl, glycopyrrolate, red rubber catheter, metal insuflation hook, afrin, lubricant and lidocaine spray are shown.

We describe guidelines to perform a safe and efficient elective fiberoptic intubation in pediatric patients while maintaining spontaneous ventilation.

선택 소아 Fiberoptic 삽관법에 대한 지침

Fiberoptic intubation in pediatric patients is often required especially in difficult airways of syndromic patients i.e. Pierre Robin Syndrome. Small ...

연구

의학

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

경쟁 손쥐 골수 이식 모델에서 기증자 세포 Engraftment를 확인하려면 수량 실시간 PCR을 사용하여

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

마우스 폐 삽관 법의 간단한 방법

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high molecular weight compounds from the bloodstream and into brain tissue. Some direct delivery success in humans has been achieved via implantation of transcranial catheters; however this method is highly invasive and associated with numerous complications. A less invasive alternative would be to dose the brain through a surgically implanted, semipermeable membrane such as the nasal mucosa that is used to repair skull base defects following endoscopic transnasal tumor removal surgery in humans. Drug transfer though this membrane would effectively bypass the BBB and diffuse directly into the brain and cerebrospinal fluid. Inspired by this approach, a surgical approach in mice was developed that uses a donor septal mucosal membrane engrafted over an extracranial surgical BBB defect. This model has been shown to effectively allow the passage of high molecular weight compounds into the brain. Since numerous drug candidates are incapable of crossing the BBB, this model is valuable for performing preclinical testing of novel therapies for neurological and psychiatric diseases.

A mouse model of human endoscopic skull base reconstruction has been developed that creates a semipermeable interface between the brain and nose using nasal mucosal grafts. This method allows researchers to study delivery to the central nervous system of high molecular weight therapeutics which are otherwise excluded by the blood-brain barrier when administered systemically.

쥐의 뇌에 직접 약물 전달 이소성 점막 Engrafting 절차

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

쥐에 있는 일반적인 경 동맥 수리 통해 Reperfusion를 허용 하는 중간 대뇌 동맥 폐색

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

직접 경포당증 주입에 의해 마우스에 있는 심각한 폐 상해를 유도하는

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Sleeve Gastrectomy in Mice using Surgical Clips

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the increased universal phenomenon of type 2 diabetes (T2D) and other metabolic problems. Bariatric surgery, such as SG, is currently one of the most effective and commonly used long-term treatment for obesity and T2D, but the association between them is not completely explored yet. The mechanisms underlying the outcomes seen after bariatric surgery in humans can be investigated based on preclinical animal studies. The SG reduces body weight, glucose levels and many metabolic parameters, and is easy to perform with a low incidence of complications. The goal of this work is to provide a simple method and an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery in animals for researchers.

The prevalence of diabetes and obesity is continuously increasing worldwide. The mechanisms between diabetes, obesity and their associated mortality and co-morbidities need to be further investigated. Here, we present a protocol for sleeve gastrectomy (SG) in animals as an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery.

외과 클립을 사용하여 마우스에 소매 위절제술

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the ...

Repeated Orotracheal Intubation in Mice

The literature describes several methods for mouse intubation that either require visualization of the glottis through the oral cavity or incision in the ventral neck for direct confirmation of cannula placement in the trachea. The relative difficulty or the tissue trauma induced to the subject by such procedures can be an impediment to an investigator&#8217;s ability to perform longitudinal studies. This article illustrates a technique in which physical manipulation of the mouse following the use of a depilatory to remove hair from the ventral neck permits transcutaneous visualization of the trachea for orotracheal intubation regardless of degree of skin pigmentation. This method is innocuous to the subject and easily achieved with a limited understanding of murine anatomy. This refined approach facilitates repeated intubation, which may be necessary for monitoring progression of disease or instillation of treatments. Using this method may result in a reduction of the number of animals and technical skill required to measure lung function in mouse models of respiratory disease.

The goal of this article is to describe a refined method of intubation of the laboratory mouse. The method is noninvasive and, therefore, ideal for studies that require serial monitoring of respiratory function and/or instillation of treatments into the lung.

마우스에서 반복된 Orotracheal 삽관

The literature describes several methods for mouse intubation that either require visualization of the glottis through the oral cavity or incision in the ...

Blind Endotracheal Intubation in Neonatal Rabbits

The newborn rabbit is a useful animal model for various pathologies and procedures. Airway management of the rabbit is complex due to its anatomical characteristics, which is further complicated in the case of the newborn. Of the different methods of advanced airway management, endotracheal intubation is less aggressive than tracheostomy, and is more feasible than supraglottic management given the lack of supraglottic devices of such a small size. As direct glottis visualization is very difficult in animals this size, this blind intubation model is presented as an effective alternative, especially for experiments requiring prolonged anesthesia. Using this method, we performed blind intubations with a 90% success rate.

We describe a technique of endotracheal intubation in newborn rabbits after esophageal catheterization with a gastric tube.

신생아 토끼의 맹인 내트라큐어 삽관

The newborn rabbit is a useful animal model for various pathologies and procedures. Airway management of the rabbit is complex due to its anatomical ...