저자는 그 직원과이 삽 관 법 기술을 학습 하는 동안 자신의 의견에 대 한 토끼 처리 및 마 취 교육 세션에 참여 하는 연구 요원 인정 하고자 합니다.

아래에 설명 된 삽 관 법 절차는 메이 요 클리닉 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다.
 1. 준비 ( 그림 1) <ol><li>5 프랑스 폴 리 프로필 렌 테 고 그래서 총 길이 8-10 인치 비 둥근 끝을 잘라. 어떤 최종 한다 명확 하 게 나타내기 위해 튜브의 컷된 끝을 표시 하지 기도 (화살표, 그림 1)를 삽입할 수.</li>
	<li>크기 0 또는 1 밀러 후 두 경 블레이드는 후 두 경에 놓고 빛 작동 하는지 확인 합니다.</li>
	<li>1 mL 주사기로 2 %lidocaine 0.25 mL 그릴.</li>
	<li>는 적절 한 크기의 uncuffed endotracheal 튜브 (일반적으로 2.5-4.0 m m ID) 끝에 살 균 윤활제를 적용.</li>
	<li>일단 장소에서 endotracheal 튜브를 고정 삽입 (예:, 탯 줄 테이프) 공급 준비.</li>
	<li>성공적인 삽 관 법 (#5, 그림 1)을 확인 하는 절차의 끝에 공기 흐름을 감지 하는 장치를 얻을. 이것은 선택 사항입니다.</li>
</ol> 2. 마 취 35 mg/kg 케 타 민 및 5 mg/kg xylazine 피하는 대략 4 달 오래 된, 3.0-3.5 k g, 뉴질랜드 화이트의 뒷 다리의 허벅지 근육 근육에 25 게이지 바늘 3 mL 주사기를 사용 하 여 같은 <ol><li>관리 주사 마 취 토끼. 
	참고:이 마 취 처방은 젊고, 건강 하 고, 특정 병원 체 자유로운 연구 토끼에 주사 조합이 일반적으로 사용된 하지만 임상 상태 및 실험 목적에 따라, 다른 프로토콜 보다 적절 한 수 있습니다.</li>
	<li>토끼 마 취 후 각 막 직물을 보존 하기 위해 눈에 불 임 안과 윤 활 유를 적용.</li>
</ol> 3. Endotracheal 삽 관 법 endotracheal 튜브의 삽입에 대 한 적절 한 길이 확인 하려면 <ol><li>측정은 흉부에 앞 니에서 endotracheal 튜브 입구. 흉부 입구의 수준에서 튜브의 끝의 배치 보장 튜브 오프닝은 하지만 tracheal 분기점에 두개골 후 두 과거.</li>
	<li>머리 약간 테이블 ( 그림 2)의 확장을 준비 테이블에 sternally 토끼 위치. 토끼를 위치 해야 머리와 척 추가 똑바로 정렬에 광장.</li>
	<li>거 즈 패드는 토끼를 사용 하 여, 머리를 드는 &#39; 토끼에 s 혀 측면 &#39; s 오른쪽 하단 앞 니 (diastema)에 앞 니에서 외상을 방지 하도록.</li>
	<li>후 두 경 블레이드를 오른손으로 파악 하 고 앞 니, 토끼에서 입력 뒤에 입 장소 &#39; 왼쪽 s.</li>
	<li>꼬리 방향으로 블레이드 팁과 입의 지붕 부드러운 입맛 표시 될 때까지 따릅니다.</li>
	<li>, 오른손으로는 후 두 경 앞으로 (아래쪽으로 후 두 경 들고 손목 벤드) 팁 토끼를 확장 하는 동안 &#39; 열려있는 기도 유지 하 고 ( 그림 3 후 두 볼을 앞으로 다시 s 머리와 목 A). 의무 코 breathers 있는 후두개는 종종 연구개, 위에 및이 메서드를 사용 하 여 압축 하는 후두개 전치 고는 glottis 혀의 기지. 산소 산소 포화도 방지 하기 위해, 그것은 목 삽 관 법 중 열려있는 기도 유지 하는 설명 된 대로 확장 유지 하는 것이 중요.</li>
	<li>혀 놓고 가이드 카 테 테 르의 배치를 위해 오른손을 왼손에 후 두 경 블레이드 스위치.</li>
	<li>는 후 두 경 누른 glottis ( 그림 3 B)의 보기를 유지 진행 후 두 ( 그림 4 과거 오프닝을 통해 가이드 카 테 터의 둥근된 팁 하는 동안 ). 테 tracheal 분기점에서 자연 정지에 올 것 이다.</li>
	<li>가이드 카 테 터의 유지 하면서 endotracheal 튜브를 파악 하 고 카 테 터, endotracheal 튜브 커넥터에 그것을 잡기로 테에 힘을 적용 하지 않도록 주의 복용 통해 스레드. 성 대 ( 그림 5)에서 저항 때까지 튜브를 사전.</li>
	<li>Endotracheal 관의 개통으로 2 %lidocaine 0.25 mL을 주는. lidocaine endotracheal 튜브 로컬로 laryngospasm 22 ( 그림 6)를 방지 하는 성 대 anesthetize를 여행 합니다.</li>
	<li>적용, 부드럽게 endotracheal 튜브, 성 대 ( 그림 7)을 통해 발전을 왜곡 하 여 진행 하는 국 소 마 취에 대 한 약 2 분 수 있습니다. 튜브가 통과 되 면 성 대, 후 두 경 잎 및 카 테 터, 튜브를 꺼내 려 하지 않도록 주의 복용 제거.</li>
	<li>확인 공기 흐름을 관찰 하 여 endotracheal 튜브의 배치. 조직이 나 공기, 튜브의 안개 또는 튜브의 끝에 유리/거울의 안개와 공기 흐름에 대 한 수신 대기를 찾고 감지 하 튜브의 끝에 모피의 배치를 포함 하 여,이 달성 하기 위해 여러 가지가 있습니다. 공기 23 또는 호흡을 감지 하도록 설계 된 장치 수도 있습니다 ( 그림 8)을 사용 하는 삽 관 법 성공 (참조 자료 테이블 옵션에 대 한)이 었. Endotracheal 튜브 튜브와 머리 주위에 묶인 탯 줄 테이프 등 선호 하는 방법을 사용 하 여 보호 합니다. 마 취 회로 및 auscult을 양쪽 폐의 환기를 보장 하기 위해서 호흡을 주는 동안 가슴의 양쪽 연결.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Quesenberry, K. E., Carpenter, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ferrets, rabbits, and rodents : clinical medicine and surgery. 3rd edn . , (2012).</li><li>Dugdale, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterinary Anaesthesia: Principles to Practice. , (2010).</li><li>Yamamoto, Y., Inoue, S., Abe, R., Kawaguchi, M., Furuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+management+with+the+laryngeal+tube+in+rabbits.">Airway management with the laryngeal tube in rabbits.</a> Lab animal. 36 (5), 33-35 (2007).</li><li>Belena, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+mask,+laryngeal+tube,+and+Frova+introducer+in+simulated+difficult+airway.">Laryngeal mask, laryngeal tube, and Frova introducer in simulated difficult airway.</a> J Emerg Med. 48 (2), 254-259 (2015).</li><li>Smith, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+tubes+versus+laryngeal+mask+airways+in+rabbit+inhalation+anesthesia:+ease+of+use+and+waste+gas+emissions.">Endotracheal tubes versus laryngeal mask airways in rabbit inhalation anesthesia: ease of use and waste gas emissions.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 43 (4), 22-25 (2004).</li><li>Kazakos, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+laryngeal+mask+airway+in+rabbits:+placement+and+efficacy.">Use of the laryngeal mask airway in rabbits: placement and efficacy.</a> Lab Anim (NY). 36 (4), 29-34 (2007).</li><li>Crotaz, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+feasibility+investigation+of+the+v-gel+airway:+an+anatomically+designed+supraglottic+airway+device+for+use+in+companion+animal+veterinary+anaesthesia.">Initial feasibility investigation of the v-gel airway: an anatomically designed supraglottic airway device for use in companion animal veterinary anaesthesia.</a> Vet Anaesth Analg. 37 (6), 579-580 (2010).</li><li>Bateman, L., Ludders, J. W., Gleed, R. D., Erb, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+facemask+and+laryngeal+mask+airway+in+rabbits+during+isoflurane+anesthesia.">Comparison between facemask and laryngeal mask airway in rabbits during isoflurane anesthesia.</a> Veterinary Anaesthesia and Analgesia. 32 (5), 280-288 (2005).</li><li>Johnson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+intubation+of+exotic+companion+mammals.">Endoscopic intubation of exotic companion mammals.</a> The veterinary clinics of North America. Exotic animal practice. 13 (2), 273-289 (2010).</li><li>Tranquilli, W. J., Thurmon, J. C., Grimm, K. A., Lumb, W. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lumb &amp; Jones' veterinary anesthesia and analgesia. 4th edn. , (2007).</li><li>Worthley, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+oral+endotracheal+intubation+with+a+fibre-optic+scope+in+rabbits:+a+simple+and+reliable+technique.">Rapid oral endotracheal intubation with a fibre-optic scope in rabbits: a simple and reliable technique.</a> Laboratory Animals. 34 (2), 199-201 (2000).</li><li>Miranda, A., Pego, J. M., Correia-Pinto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+facility+videoendoscopic+intubation+station:+tips+and+tricks+from+mice+to+rabbits.">Animal facility videoendoscopic intubation station: tips and tricks from mice to rabbits.</a> Laboratory animals. , (2016).</li><li>Irazuzta, J., Hopkins, J., Gunnoe, P., Brittain, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+method+of+multipurpose+airway+access+through+percutaneous+tracheostomy+in+rabbits+(Oryctolagus+cuniculus).">Simple method of multipurpose airway access through percutaneous tracheostomy in rabbits (Oryctolagus cuniculus).</a> Lab Anim Sci. 47 (4), 411-413 (1997).</li><li>Bertolet, R. D., Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation:+an+easy+way+to+establish+a+patent+airway+in+rabbits.">Endotracheal intubation: an easy way to establish a patent airway in rabbits.</a> Lab Anim Sci. 30 (2), 227-230 (1980).</li><li>Gilroy, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+of+rabbits+and+rodents.">Endotracheal intubation of rabbits and rodents.</a> J Am Vet Med Assoc. 179 (11), 1295 (1981).</li><li>Morgan, T. J., Glowaski, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teaching+a+new+method+of+rabbit+intubation.">Teaching a new method of rabbit intubation.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (3), 32-36 (2007).</li><li>Inglis, S., Strunk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+anesthesia.">Rabbit anesthesia.</a> Lab Anim (NY). 38 (3), 84-85 (2009).</li><li>Falcao, S. C., Pereira Junior, J. R., Coelho, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+blind+tracheal+intubation+in+rabbits+(Oryctolagus+cuniculi)+supported+by+previous+maneuver+of+esophageal+cannulization.">Technique of blind tracheal intubation in rabbits (Oryctolagus cuniculi) supported by previous maneuver of esophageal cannulization.</a> Acta Cir Bras. 26 (5), 352-356 (2011).</li><li>Su, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+miniature+lighted+stylet+for+fast+oral+endotracheal+intubation+in+rabbits.">A miniature lighted stylet for fast oral endotracheal intubation in rabbits.</a> Vet J. 195 (2), 254-256 (2013).</li><li>Weinstein, C. H., Fujimoto, J. L., Wishner, R. E., Newton, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+of+six-week-old+New+Zealand+White+rabbits+for+thoracotomy.">Anesthesia of six-week-old New Zealand White rabbits for thoracotomy.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (3), 19-22 (2000).</li><li>Stephens DeValle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+Management+of+Rabbit+Anesthesia+Through+the+Use+of+Nasotracheal+Intubation.">Successful Management of Rabbit Anesthesia Through the Use of Nasotracheal Intubation.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48, 166-170 (2009).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Guidance on the Use of Topical Anesthetics for Naso/Oropharyngeal and Laryngotracheal Procedures. , (2006).</li><li>Cook, R. T., Stene, J. K., Marcolina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Beck+Airway+Airflow+Monitor+and+controllable-tip+endotracheal+tube+in+two+cases+of+nonlaryngoscopic+oral+intubation.">Use of a Beck Airway Airflow Monitor and controllable-tip endotracheal tube in two cases of nonlaryngoscopic oral intubation.</a> Am J Emerg Med. 13 (2), 180-183 (1995).</li><li>Fish, R. E., Brown, M. J., Danneman, P. J., Karas, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. , (2008).</li><li>Gografe, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+management+of+long-term+general+anesthesia+in+rabbits+used+as+an+animal+model+of+human+disease.">Successful management of long-term general anesthesia in rabbits used as an animal model of human disease.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 42 (2), 16-19 (2003).</li><li>Nordin, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trachea+and+cuff-induced+tracheal+injury.+An+experimental+study+on+causative+factors+and+prevention.">The trachea and cuff-induced tracheal injury. An experimental study on causative factors and prevention.</a> Acta Otolaryngol Suppl. 345, 1-71 (1977).</li><li>Phaneuf, L. R., Barker, S., Groleau, M. A., Turner, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+injury+after+endotracheal+intubation+and+anesthesia+in+rabbits.">Tracheal injury after endotracheal intubation and anesthesia in rabbits.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 45 (6), 67-72 (2006).</li><li>Grint, N. J., Sayers, I. R., Cecchi, R., Harley, R., Day, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postanaesthetic+tracheal+strictures+in+three+rabbits.">Postanaesthetic tracheal strictures in three rabbits.</a> Lab Anim. 40 (3), 301-308 (2006).</li><li>Squire, R., Siddiqui, S. Q., DiNunizio, G., Brodsky, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+study+of+the+tracheotomy+and+endotracheal+intubation+on+the+rabbit+tracheobronchial+tree.">Quantitative study of the tracheotomy and endotracheal intubation on the rabbit tracheobronchial tree.</a> Ann Otol Rhinol. , (1990).</li><li>Kumar, R. A., Boyer, M. I., Bowen, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+of+anesthesia+for+extensive+surgery+in+small+rabbits.">A reliable method of anesthesia for extensive surgery in small rabbits.</a> Lab Anim Sci. 43 (3), 265-266 (1993).</li></ol>

저자는 공개 없다.

여기 우리는 토끼에 대 한 자세한 설명을 어떤 임상 설정에서 쉽게 마스터 수 삽 관 법 기술을 제공 합니다. 이 기술은 이전에 게시 직접 시각화 기법10,15,20,25 uncuffed 3.5 m m endotracheal 튜브의 사용을 포함 하 여 몇 가지 추가 수정 비슷합니다 그리고 5 우리의 선택 가이드는 삭감 되 고 잘라 끝에 영구 표시와 함께 표시로 오 줌 카 테 테 르 프랑스. 토끼 기관 쉽게 부상 하는 경향이 이며 따라서 uncuffed endotracheal 튜브를 사용 하 여 일반적으로 권장 때 토끼를 intubating 팔목의 압력에서 tracheal 점 막 손상을 방지 합니다. 26 5 프랑스 오 줌 카 테 테 르 우리 선택 가이드 보컬 폴드 후 두의 직접 시각화 하는 동안 보기를 방해 하지 않고 쉽게 통과 하기 위하여 충분히 작은으로. 작은 동안,이 카 테 테이 르 장소에에서 남아 있는 endotracheal 튜브에 대 한 가이드로 충분히 뻣 뻣 한입니다. 카 테 터의 원심 끝 분기점에 도달 하면 충격을 줄일 수 있도록 반올림 됩니다. 근 위 카 테 터 끝 테 (지나치게 긴) 실행할 수 있는 길이 고 주사기에 첨부 파일에 대 한 확대 끝을 제거 하 되도록 잘라입니다. 잘라 끝 영구 마커 tracheal 점 막에 손상을 줄 수 있는 기관에이 삽입 하지를 시각적 표시기로 표시 됩니다.
이 기술의 주요 한계, 후 두 경 블레이드를 사용 하 여, 필요 하지 않을 수 있습니다 매우 젊은 토끼 또는 작은 입 크기로 인해 매우 작은 품종에 대 한 가능한 이다. 또한, 일부 시설이이 크기의 후 두 경 블레이드 쉽게 사용할 수 없을 수도 있습니다. 작가 기관에서이 방법은 뉴질랜드 화이트 (≥6 주)와 성인 네덜란드 불어 토끼 사용 됩니다 하지만 우리 젊은 동물 또는 작은 품종이이 방법을 시도 하지. 상황에서 토끼 환자, 또는 작은 밀러 블레이드와 후 두 경, 사용할 수 없는 경우 대체 옵션 휴대용 otoscope 보다는 후 두 경 사용 하는. 15 , 20 를 사용 하 여 한 otoscope #5 귀 검으로 후 두를 시각화, 가이드 테 직접 시각화에 의해 배치 고는 검 경 위에서 설명한 대로 동일한 단계 진행 하기 전에 제거 됩니다.
그것은 가이드 카 테 터와 카 테 터의 끝 기도로 전달 tracheal 분기 접촉 외상 또는 bronchospasm 발생의 가능성을 피하기 위해 배치 하는 때 주의 사용 해야 합니다. 이러한 합병증의 위험을 감소 하거나 매우 부드러운 움직임과 함께 테 먹이, 마자 저항, 중지 하 고 일단 테 장소에 머리와 목의 움직임을 방지 하 여 피할 수 있습니다. 또한, endotracheal 튜브 카 테 터를 통해 진행, endotracheal 튜브 커넥터에 잡으려고 카 테 터에 대 한 가능성이 있다. 따라서, 테 없이; 커넥터를 통해 슬라이드 다는 것을 확인 하는 것이 중요 하다 커넥터를 제거 하 고 보안은 endotracheal 때 대체 수 또는 관 또는 마 취 회로에 연결.
삽 관 법의 방법, 합병증과 부작용에 대 한 가능성이 있다. 후 두 경으로 직접 시각화 방법을 사용 하 여, 후 두 경 블레이드 또는 공격적 배치 endotracheal 튜브의 부적 절 한 삽입 하거나 치아 부상 후 두, 혀, 귀 착될 수 있습니다. 동물의 올바른 위치는 후 두의 시각화 중 외상을 최소화에 첫 번째 중요 한 단계입니다. 척추는 척추; 직접 정렬에 머리 똑 발라야 한다 동물은 직선, 또는 목 왼쪽 이나 오른쪽으로 트위스트이 후 두의 시각화를 더 어렵게 만들 것입니다 고 후 두 경 블레이드와 과도 한 외상에 발생할 수 있습니다. 또 다른 중요 한 성공의 열쇠를이 기술을 사용 하 여 후 두를 향해 입의 지붕에 따라 부드러운 미각 시각 일단 이동 블레이드를 적절 한 위치에 손목에 여 하입니다. 이렇게 하면 머리, 장소에 있는 성 대의 최적의 볼 위치에 잎의 끝을 이동 하는 동안 토끼20,24에 꽤 복 부.
우리는 위의 개요 정확한 기술을 따르지 않으면 후 두의 직접적인 시각화는 까다로울 수 있다, 때문에 후 두의 시각화를 필요로 하지 않는 대체 삽 관 법 전략 사용 매력적 될 수 있습니다. 예를 들어 맹인 기술은 요구 하지 않는 가능한 옵션 사용 후 두 경16,17,,1819,20의 하나입니다. 그러나,이 기술의 사용 튜브의 배치를 직접 하려면 endotracheal 튜브를 통해 공기 흐름을 감지 하는 능력에 의존 하며 동물의 호흡은 매우 얕은 또는 체포를 하는 경우이 메서드를 사용 하 여 신뢰할 수 있다. 이 소자의 배치는 후 두의 시각화를 필요로 하지 않습니다 때문에 그들은 일반적으로 매우 쉽게 배치, Supraglottic 장치 또한 고려할 수 있습니다. 그러나이 소자 들은 직접 입력 하지 기도,, 그리고 따라서 직접 흐름 기도, 환기 laryngospasm 개발 하는 무 능력, 인감 꽉 충분히 오픈 가슴 절차 또는 비상 사태 동안 환기의 부족을 위한 잠재적인 소생, 그리고 위 tympany3,,48의 개발. 토끼를 위해 특별히 설계 된 새로운 장치는 유망한 대안을 제공할 수 있습니다 하지만 더 많은 연구가 이러한 장치를 평가 하는 데 필요한 그리고 기도 부족에 대 한 우려가 여전히 남아 있다. 위 tympany 수도 있습니다 intubated 동물에 잠재적인 합병증 endotracheal 튜브는 실수로 식도;에 배치 하는 경우 그러나, 직접 시각화 기술 사용 하 여 후 두에 가이드 카 테 테 르의 적절 한 배치를 확인 하 여이 합병증의 위험을 최소화 합니다.
튜브26,,2728수 갑을 차고 풍선 사용 하는 경우에 특히 endotracheal 튜브를 삽입할 때 arytenoid 및 tracheal 점 막에 외상은 또 다른 잠재적인 관심사입니다. 토끼에서 기관 수 수 쉽게 부상, 피하 기종, 매, 심지어 죽음10,27,,2829등 합병증으로 이어질 수 있는. 우리는 여기에 설명 하는 기법을 수행 하는 동안 한다 주의 tracheal 부상을 방지 하기 위해 uncuffed endotracheal 튜브, 가이드 카 테 터의 둥근된 끝 기도에 삽입 되 고는 glottis에 가이드 카 테 터를 강요 하지 사용 하 여. 또한, 적절 한 크기의 endotracheal 튜브의 선택은 중요 한 중요성의. Endotracheal 튜브 크기 해야 될 동물의 크기에 대 한 고려 뿐만 아니라 기도 보다 작은 직경 때문에 후 두 입구의 개통에 비해. Endotracheal 튜브 직경에 너무 큰 arytenoid 점 막 또는 연골 외상 될 수 있습니다. 다른 한편으로, 작은 endotracheal 튜브의 사용 증가 기도 저항 귀착되 고 점액 또는 한 꼬임 방해의 가능성을 증가 시킵니다. 이러한 이유로, 호흡 모니터링 intubated 토끼에서 매우 중요 하다. 펄스 프로브가 뿐만 아니라 공기의 측정 추적 해야capnography; d capnograph 사용할 수 없는 경우, 기도 모니터는 대안을 공기의 흐름을 감지 하는 데 사용할 수 있습니다 (하지만 exhaled 이산화탄소의 측정을 제공 하지 않습니다). 또한, 보조 환기의 경우 작은 직경 튜브 사용된24,30때에 특히 귀중 한 수 있습니다.
이 기술을 사용 하 여 이미 언급 한 혜택 뿐만 아니라이 방법의 또 다른 주요 장점은 바쁜 임상 설정에서 중요 한 될 수 있는 조 수에 대 한 필요 없이 단일 개인에 의해 수행 수입니다. 이 상황에서를 모든 필요한 공급 수집 그들에서 삽 관 법 과정 가이드 카 테 테 르 장소 이며 머리의 움직임은 피해 야 한다 하는 경우에 특히 중요 하다.
여기 설명 하는 기술은 모든 토끼 intubations, 년 당 약 200-400 intubations 금액에 대 한 우리의 기관에서 수의학 및 연구 직원에 의해 사용 됩니다. 그것은 일반적인 토끼 마 취 교육 세션, 약 30 분 소요에서 매우 쉽게 진행 된다. 우리는 상대적으로 쉽게 배울 수, 그것은 그들의 처음 3 시도 및 일반적으로 수 학습 학생 들 다음 추가 시도에서 성공적으로 과정을 반복 하는 것을 발견 했다. 미래 연구를 위해 그것은 귀중 한 시간 능력 및 다른 삽 관 법 기술에 비해이 방법에 대 한 시간이 지남에 능력을 유지 하는 능력을 비교 하는 것입니다. 이 장 님 기법16의 변형에 대 한 공부는, 하는 동안 다양 한 삽 관 법 기술에 대 한 학습 곡선의 포괄적인 평가 하지 아직 수행 되었습니다. 연구의 또 다른 잠재적인 미래 방향 비교 특히 긍정적인 압력 환기 하는 동안 함수에 관한 새로운 종의 supraglottic 기도 장치에 직접 endotracheal 삽 관 법을 포함할 수 있습니다.
결론적으로, 우리는 여기에 설명 하는 토끼의 삽 관 법에 대 한 기술 비-침략 적, 안정적, 특수 장비를 사용 하 여 필요 하지 않습니다, 쉽게 마스터, 이며 보조에 대 한 필요 없이 단일 개인에 의해 수행할 수 있습니다. 모든 기도 액세스 기술을 어느 정도의 위험을 제시 하지만 마 취 동안 적절 한 기도의 혜택 직접 시각화 기술을 사용 하 여 합병증을 최소화 하기 위해 위에 설명 하는 단계에 따라 위험 무거운까지 있다.

토끼는 좁은, 깊은 구두 강 endotracheal 삽 관 법에 대 한 후 두의 가시성 제한 하는. 그들은 또한 매우 큰 다 육 혀와 뺨이 있다, 좁은 구강과 결합 될 때는 후 두 경 삽입할 때 문제가 발생할 수 있습니다 및 삽입 endotracheal 튜브1glottis 시각화. 큰 해야 합니다 수 주의 삽 관 법을 시도할 때 구강 및 기도에 상해를 초래 하지 않도록 합니다. 후 두 조직 매우 어렵다면 고 넣어야 하 반복한 시도에서 과도 한 외상 중요 한 염증, 삽 관 법을 만들기 하면 더 어려운2.
이러한 이유로, 다양 한 대안 기술 설명, 특히 supraglottic 기도 등의 디바이스는 laryngeal 튜브3,4, 후 두 마스크 기도 (LMA)4,5, 6 그리고 종의 supraglottic 기도 장치7. 기도에 공기 흐름을 직접 두 풍선 튜브의 구성 되어 후 두 튜브: 튜브 중간 큰 풍선 위 인 두에 물개를 형성 하 고 원심 끝에 작은 풍선이 식도 입구3물개. Glottis4,,56에 완벽 한 물개를 형성 하는 비정상적으로 선단부에 타원형 마스크 튜브는 LMA에 의하여 이루어져 있다. 종의 장치는 첫 번째 동물 종의 supraglottic 기도 장치, 고양이 대 한 현재 사용할 수와 토끼, 압력을 만들 각 종족에 대 한 해 부 구조에 맞게 설계 된7인 두 인감. 그러나,이 소자 들은 기도 직접 입력 하지 않으면, 때문에 그들은 위 tympany 같은 합병증에 대 한 위험을 선물 수 있습니다. 기관 내에서 적절 한 인감의 부족 우려 호흡기 지원, 긴급, 또는 흉부 수술3,8에 대 한 긍정적인 압력 환기에 대 한 이러한 장치의 사용에 대 한 적합성에 관한 제공합니다. 또한, 기도의 직접 삽 관 법의 부족 인사 노출 마 취 가스5낭비 될 수 있습니다.
직접 endotracheal 삽 관 법을 위한 많은 방법이 있다9,10,11,12,13,,1415설명. 하나의 인기 있는 방법은 이후는 후 두 경의 삽입 필요16,17,,1819 oropharyngeal 캐비티에 부상의 위험을 줄일 수 있습니다 맹인 기술입니다. , 20. 시각 장 님 기법으로이 방법을 사용 하려면 endotracheal 튜브 및 가이드 배치에 주의 조작을 통해 공기 흐름에 대 한 모니터링. 이 메서드는 일반적으로 연구와 저자의 경험에서 임상 수의학의 연습에 사용이 시간이 소모 하 고 항상 성공 하지 수 및 따라서 가르치는 더 어렵습니다 기술과 마 취 에이전트의 추가 주입 해야 9 , 10. 또한 호흡 사용 하는 튜브의 적절 한 배치에 대 한 모니터링, 때문에이 방법은 것 더 어렵고 신뢰할 수 중 호흡기 체포. 또 다른 인기 있는 방법은 더 큰 종으로 이루어집니다로 넣어야 하는 전통적인 후 두 경 기술을 사용 하는. 그러나, 토끼에 전통적인 후 두 경 기술이입니다 어려운 endotracheal 튜브를 입에 넣으면 성 대의 방해 이다. 따라서,이 메서드를 사용 하 여 반복된 삽 관 법 시도, 증가 마 취 주입, 및 구두 구멍과 기도10상해에 발생할 수 있습니다.
삽 관 법에 대 한 더 비싼 하 고 기술적으로 도전적인 옵션 또한 존재 한다. Fiberoptic 후 두 경 쉽게 삽입을 endotracheal 튜브의 튜브에는 후 두 경 삽입 하 고 화면에 기관지로 삽입을 시각화 수 있습니다. 마찬가지로, 내 시경 후 두 영역을 시각화 하 고 튜브의 배치를 가이드를 사용할 수 있습니다. 그러나, 이러한 두 가지이 방법 쉽게 일반적인 임상 설정9,,1112에서 사용할 수 않을 수 있습니다 비싼 장비 사용을 해야 합니다. 코 구멍을 통해 삽 관 법이 특정 병원 체 자유로운21되지 않은 토끼, 특히 폐에 코 구멍에서 기회 주의 병원 체를 도입의 위험을 선물 하지만 설명 하고있다, 그는 다른 방법입니다. 마지막으로, 삽 관 법의 더 많은 침략 적 방법 또한 출판 되었습니다, 시경 바늘 cricothyroidotomy 가이드 와이어의 위치 다음의 사용 뿐만 아니라 기도에 배치 하는 바늘을 통해 가이드 카 테 터의 역행 삽입을 포함 하 여 혈관 팽창, 그리고 칼 집 중개자13,14. 침략 적 기법으로 이러한 방법을 절차 후 통증과 감염 같은 잠재적인 합병증을 있다. 우리가 여기, 후 두 경 및 가이드 카 테 테 르를 사용 하 여 설명 하는 기술 능력을 짧은 시간으로 최소한의 교육으로 배울 수 있다, 비-침략 적, 보조에 대 한 필요 없이 단일 개인에 의해 수행 수 이며의 사용을 요구 하지 않습니다. 특수 장비입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketalar 
			Ketamine HCl Inj.</td>
			<td>JHP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 42023-113-10</td>
			<td>35mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased 
			Xylazine (100mg/ml)</td>
			<td>Lloyd Labs</td>
			<td>NADA #139-236</td>
			<td>5mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Welch Allyn Laryngoscope Handle</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>60300</td>
			<td>Requires 2 size C alkaline batteries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 0 or 1 Miller Laryngoscope Blade</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>68040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 &#8211; 4.0 mm ID uncuffed endotracheal tube</td>
			<td>Jorgenson</td>
			<td>J0149V</td>
			<td>Suitable for 2.5-5 kg rabbits 
			3.5 mm most commonly used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Sovereign polypropylene catheter, 5 Fr x 22&#8221;</td>
			<td rowspan="2">Medtronic</td>
			<td rowspan="2">8890703310</td>
			<td rowspan="2">Cut to 8-10 inches 
			Mark the cut end with permanent marker to indicate which end not to insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 2% HCL Inj</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>L-2000-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Ply Nonsterile, Bulk Packed Versalon Sponges (Gauze pads)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>KC9024A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape, Twill, Bleached &#189;&#8221; x 72 yds</td>
			<td>Encompass Textiles</td>
			<td>48210-025</td>
			<td>Used for securing endotracheal tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Lubricating Jelly</td>
			<td>HR Pharmaceuticals</td>
			<td>201</td>
			<td>For lubricating endotracheal tube tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Great Plains Ballistics: BAAM (Beck Airway Airflow Monitor) 22</td>
			<td>BoundTree Medical</td>
			<td>21410</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambu Pediatric Co2 Detector</td>
			<td>AMBU INC</td>
			<td>172713</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotracheal intubation of rabbits using a polypropylene guide catheter

토끼에서 endotracheal 삽 관 법은 그들의 특별 한 해부학 때문 전하실 수 있습니다. 마 취 동안 기도 특허를 달성 하는 것은 기도 방해, 예방 위 tympany ventilatory 지원 하 고 회피에 대 한 중요 합니다. 삽 관 법의 어려움으로 인해 후 두 마스크 기도 또는 후 두 튜브의 사용과 같은 대체 방법은 탐험 되었습니다. 그러나, 이러한 방법 직접 기도를 초래 하지 않습니다 및 따라서 합병증의 개발에 대 한 위험을 제공할 수 있습니다. 또한, 기도의 직접 삽 관 법의 부족 인원 노출 마 취 가스를 낭비 될 수 있습니다. 블라인드 배치를 포함 하 여 수많은 방법 endotracheal 삽 관 법에 대 한 설명 되었습니다, 그리고 fiberoptic 후 두 경 또는 내 시경, 및 반지 배치 사용 합니다. 이러한 수많은 간행물에도 불구 하 고 많은 여전히 성공을 달성 하기 위해 투쟁. 여기 우리가 능력을 짧은 시간으로 최소한의 교육으로 가르칠 수 있는 삽 관 법 기술에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 간단히, 주 사용 마 취의 관리 후에 토끼의 적절 한 위치, 폴 리 프로필 렌 카 테 터는 직접 시각화 사용 하는 후 두 경으로 기도에 배치 됩니다. 테는 기도로 endotracheal 튜브를 직접 가이드로 사용 됩니다. 이 방법은 고가의 장비 없이도 삽 관 법 수 있으며 보조에 대 한 필요 없이 단일 개인에 의해 수행할 수 있습니다. 결론적으로,이 기술은 수 쉽게 고 아주 작은 비용에 수행 임상 설정 연구 또는.

저자의 기관에서이 기술은 일반적으로 토끼 처리와 마 취 기법 훈련 세션 동안 실험실 및 수의 직원에 게 배운. 교육 세션 전용된 훈련 동물 들과 함께 수행 됩니다. 트레이너는 기술을 한 번 및 고 연수생 트레이너의 지도 기법을 수행 하는 다음. 연수생은 일반적으로 1-3 시도 안에 성공 달성. 일단, 개인 두 번째 시간, 삽 관 법을 수행 하는 데 필요한 및 일반적으로 성공적으로 첫 번째 추가 시도에 다시 토끼를 넣어야 수 있습니다 그들은 성공적으로 토끼를 intubated 있다 후. 이러한 훈련 세션 동안, 특히 개인 이전에 다른 기술로 훈련에서 피드백 일관 되 게이 기술을 학습과 성공적으로 완료 하는 얼마나 쉬운에 대 한 의견을 포함 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig1.jpg"> 
그림 1. Endotracheal 삽 관 법에 대 한 공급: 1) 크기 0 또는 1 밀러 후 두 경 블레이드, 2) 탯 줄 테이프 (또는 endotracheal 튜브를 보호 하기 위한 기타 용품), 후 두 경 3) 0.25 mL 2 %lidocaine, 4) 5-프랑스의 폴 리 프로필 렌 테 잘라 8-10 인치 아닌 둥근 끝을 명확 하 게 나타내는 어떤 끝 기도 (화살표), 5에 삽입 되지 않도록 해야 영구 표시와 함께 표시) 공기 흐름 감지 장치, 6) 7 튜브의 선단부에 적용 살 균 윤활제) endotracheal 튜브를 uncuffed. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig1large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig2.jpg"> 
그림 2 : Endotracheal 삽 관 법에 대 한 sternal 위치. 토끼는 앞 발 테이블의 끝에 확장 된 sternally 위치 하 고 있다. 뒷 다리 팔 다리는 다시 확장 하 고 토끼의 머리는 척추 정렬 됩니다. 왼쪽 손 준비는 후 두 경의 삽입에 대 한 확장으로 머리를 높이 데 사용 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig3.jpg"> 
그림 3 : 후 두 경의 삽입. A)는 후 두 경 칼 날의 팁과 입의 지붕 부드러운 입맛 표시 될 때까지 다음 오른손을 사용 하 여 왼쪽된 diastema에 삽입 됩니다. 소프트 구개 표시 되는 후 두 경은 밀고 앞으로 토끼의 다시 머리와 목을 앞으로 확장 하는 동안 후 두를 시각화 하. B)는 후 두의 시각화. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig4.jpg"> 
그림 4 : 가이드 카 테 터의 발전. A) 왼손에 후 두 경 블레이드를 전환 후 오른쪽 후 두 과거 오프닝을 통해 가이드 카 테 터의 둥근된 끝을 이동 합니다. B) 가이드 테 직접 시각화와 성 대를 통해 전달 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig5.jpg"> 
그림 5 : Tracheal 튜브의 발전. Endotracheal 튜브 가이드 카 테 터를 통해 스레드 및 성 대에서 저항까지 고급 이다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig6.jpg"> 
그림 6 : lidocaine 점. Lidocaine (2%, 0.25 mL) endotracheal 관의 개통으로 얻은입니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig7.jpg"> 
그림 7 : Endotracheal 튜브 발전. Lidocaine, 주입 후 2 분 endotracheal 튜브 부드럽게 왜곡 성 대를 통과 하 여 고급입니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig8.jpg"> 
그림 8 : Endotracheal 튜브를 통해 공기 흐름의 확인. 공기 탐지 장치 endotracheal 튜브를 통해 공기 흐름을 확인 하는 데 사용할 수 있습니다 또는 치과 거울도 성공적인 삽 관 법을 나타내는 호흡에서 응축을 검출 하기 위하여 사용할 수 있습니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig8large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

토끼에서 endotracheal 삽 관 법은 그들의 특이 한 해부학 때문에 도전적 이다. 여기 선물이 가이드로 폴 리 프로필 렌 카 테 터를 사용 하 여 기도의 직접 삽 관 법에 대 한 기술. 이 방법은 상대적으로 저렴 한 공급을 활용 하 여, 최소한의 훈련이 필요 합니다 그리고 어떤 임상 설정에서 쉽게 수행 될 수 있습니다.

폴 리 프로필 렌 가이드 카 테 터를 사용 하 여 토끼의 endotracheal 삽 관 법

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

endotracheal-intubation-rabbits-using-polypropylene-guide

Research

JoVE Journal

Biology

33.3K 조회수.  Mayo Clinic. 토끼에서 endotracheal 삽 관 법은 그들의 특이 한 해부학 때문에 도전적 이다. 여기 선물이 가이드로 폴 리 프로필 렌 카 테 터를 사용 하 여 기도의 직접 삽 관 법에 대 한 기술. 이 방법은 상대적으로 저렴 한 공급을 활용 하 여, 최소한의 훈련이 필요 합니다 그리고 어떤 임상 설정에서 쉽게 수행 될 수 있습니다.

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Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1. The plasmid DNA rearranges to form extrachromosomal concatamers that are stably inherited, though not with the same efficiency as actual chromosomes 2. A gene of interest is co-injected with an obvious phenotypic marker, such as rol-6 or GFP, to allow selection of transgenic animals under a dissecting microscope. The exogenous gene may be expressed from its native promoter for cellular localization studies. Alternatively, the transgene can be driven by a different tissue-specific promoter to assess the role of the gene product in that particular cell or tissue. This technique efficiently drives gene expression in all tissues of C. elegans except for the germline or early embryo 3. Creation of transgenic animals is widely utilized for a range of experimental paradigms. This video demonstrates the microinjection procedure to generate transgenic worms. Furthermore, selection and maintenance of stable transgenic C. elegans lines is described.

This video demonstrates the technique of microinjection into the gonad of C. elegans to create transgenic animals.

Microinjection을 사용하여 안정적인 트렌스​​ 제닉 C. 엘레간스의 생성

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

연구

생물학

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing and adult tissue. An advance in this concept is Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM), linking gene expression, cell fate, and cell behaviors in vivo, to create fate maps based on genetic lineage.
GIFM exploits X-CreER lines where X is a gene or set of gene regulatory elements that confers spatial expression of a modified bacteriophage protein, Cre recombinase (CreERT). CreERT contains a modified estrogen receptor ligand binding domain which renders CreERT sequestered in the cytoplasm in the absence of the drug tamoxifen. The binding of tamoxifen releases CreERT, which translocates to the nucleus and mediates recombination between DNA sequences flanked by loxP sites. In GIFM, recombination typically occurs between a loxP flanked Stop cassette preceding a reporter gene such as GFP.
Mice are bred to contain either a region- or cell type-specific CreER and a conditional reporter allele. Untreated mice will not have marking because the Stop cassette in the reporter prevents further transcription of the reporter gene. We administer tamoxifen by oral gavage to timed-pregnant females, which provides temporal control of CreERT release and subsequent translocation to the nucleus removing the Stop cassette from the reporter. Following recombination, the reporter allele is constitutively and heritably expressed. This series of events marks cells such that their genetic history is indelibly recorded. The recombined reporter thus serves as a high fidelity genetic lineage tracer that, once on, is uncoupled from the gene expression initially used to drive CreERT.
We apply GIFM in mouse to study normal development and ascertain the contribution of genetic lineages to adult cell types and tissues. We also use GIFM to follow cells on mutant genetic backgrounds to better understand complex phenotypes that mimic salient features of human genetic disorders.
This video article guides researchers through experimental methods to successfully apply GIFM. We demonstrate the method using our well characterized Wnt1-CreERT;mGFP mice by administering tamoxifen at embryonic day (E)8.5 via oral gavage followed by dissection at E12.5 and analysis by epifluorescence stereomicroscopy. We also demonstrate how to micro-dissect fate mapped domains for explant preparation or FACS analysis and dissect adult fate-mapped brains for whole mount fluorescent imaging. Collectively, these procedures allow researchers to address critical questions in developmental biology and disease models.

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM) marks and tracks cells with fine spatial and temporal control in vivo and elucidates how cells from a specific genetic lineage contribute to developing and adult tissues. Demonstrated here are the techniques required to fate map E12.5 mouse embryos for epifluorescent and explant analysis.

유전자 Inducible의 운명 매핑에 대한 실용적인 접근법 : 셀을 선택하고 추적하는 비주얼 가이드 VIVO에서</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Rapid PCR Thermocycling using Microscale Thermal Convection

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable concentration level. But the design of conventional PCR thermocycling hardware, predominantly based on massive metal heating blocks whose temperature is regulated by thermoelectric heaters, severely limits the achievable reaction speed1. Considerable electrical power is also required to repeatedly heat and cool the reagent mixture, limiting the ability to deploy these instruments in a portable format.
Thermal convection has emerged as a promising alternative thermocycling approach that has the potential to overcome these limitations2-9. Convective flows are an everyday occurrence in a diverse array of settings ranging from the Earth's atmosphere, oceans, and interior, to decorative and colorful lava lamps. Fluid motion is initiated in the same way in each case: a buoyancy driven instability arises when a confined volume of fluid is subjected to a spatial temperature gradient. These same phenomena offer an attractive way to perform PCR thermocycling. By applying a static temperature gradient across an appropriately designed reactor geometry, a continuous circulatory flow can be established that will repeatedly transport PCR reagents through temperature zones associated with the denaturing, annealing, and extension stages of the reaction (Figure 1). Thermocycling can therefore be actuated in a pseudo-isothermal manner by simply holding two opposing surfaces at fixed temperatures, completely eliminating the need to repeatedly heat and cool the instrument.
One of the main challenges facing design of convective thermocyclers is the need to precisely control the spatial velocity and temperature distributions within the reactor to ensure that the reagents sequentially occupy the correct temperature zones for a sufficient period of time10,11. Here we describe results of our efforts to probe the full 3-D velocity and temperature distributions in microscale convective thermocyclers12. Unexpectedly, we have discovered a subset of complex flow trajectories that are highly favorable for PCR due to a synergistic combination of (1) continuous exchange among flow paths that provides an enhanced opportunity for reagents to sample the full range of optimal temperature profiles, and (2) increased time spent within the extension temperature zone the rate limiting step of PCR. Extremely rapid DNA amplification times (under 10 min) are achievable in reactors designed to generate these flows.

We describe a novel method to perform DNA replication via the polymerase chain reaction (PCR). Thermal convection is harnessed to continuously shuttle reagents between denaturing, annealing, and extension conditions by maintaining opposing surfaces of the reactor at constant temperature. This inherently simple design promises to make rapid PCR more accessible.

Microscale 열 대류를 사용하여 신속한 PCR의 Thermocycling

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this topic and so it presents inherent problems. Here we compile a practical introduction to phylogenetics for nonexperts.&#160;We outline in a step-by-step manner, a pipeline for generating reliable phylogenies from gene sequence datasets. We begin with a user-guide for similarity search tools via online interfaces as well as local executables. Next, we explore programs for generating multiple sequence alignments followed by protocols for using software to determine best-fit models of evolution. We then outline protocols for reconstructing phylogenetic relationships via maximum likelihood and Bayesian criteria&#160;and finally describe tools for visualizing phylogenetic trees. While this is not by any means an exhaustive description of phylogenetic approaches, it does provide the reader with practical starting information on key software applications commonly utilized by phylogeneticists. The vision for this article would be that it could serve as a practical training tool for researchers embarking on phylogenetic studies&#160;and also serve as an educational resource that could be incorporated into a classroom or teaching-lab.

Here we describe a step-by-step pipeline for generating reliable phylogenies from nucleotide or amino acid sequence datasets. This guide aims to serve researchers or students new to phylogenetic analysis.&#160;

비전문가를위한 계통 발생에 대한 실용 가이드

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most of these require access to specialist equipment, and often require a degree of expertise to effectively establish reliable experiments and analyze data. Differential scanning fluorimetry (DSF) is being increasingly used as a robust method for initial screening of proteins for interacting small molecules, either for identifying physiological partners or for hit discovery. This technique has the advantage that it requires only a PCR machine suitable for quantitative PCR, and so suitable instrumentation is available in most institutions; an excellent range of protocols are already available; and there are strong precedents in the literature for multiple uses of the method. Past work has proposed several means of calculating dissociation constants from DSF data, but these are mathematically demanding. Here, we demonstrate a method for estimating dissociation constants from a moderate amount of DSF experimental data. These data can typically be collected and analyzed within a single day. We demonstrate how different models can be used to fit data collected from simple binding events, and where cooperative binding or independent binding sites are present. Finally, we present an example of data analysis in a case where standard models do not apply. These methods are illustrated with data collected on commercially available control proteins, and two proteins from our research program. Overall, our method provides a straightforward way for researchers to rapidly gain further insight into protein-ligand interactions using DSF.

Differential scanning fluorimetry is a widely used method for screening libraries of small molecules for interactions with proteins. Here, we present a straightforward method to extend these analyses to provide an estimate of the dissociation constant between a small molecule and its protein partner.

시차 주사 Fluorimetry를 사용하여 단백질 - 리간드 상호 작용의 결정

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins within complex biological samples. Since then, western blotting methodology has become a common component of the molecular biologists experimental repertoire. A cursory search of PubMed using the term &#8220;western blot&#8221; suggests that in excess of two hundred and twenty thousand published manuscripts have made use of this technique by the year 2014. Importantly, the last ten years have seen technical imaging advances coupled with the development of sensitive fluorescent labels which have improved sensitivity and yielded even greater ranges of linear detection. The result is a now truly Quantifiable Fluorescence based Western Blot (QFWB) that allows biologists to carry out comparative expression analysis with greater sensitivity and accuracy than ever before. Many &#8220;optimized&#8221; western blotting methodologies exist and are utilized in different laboratories. These often prove difficult to implement due to the requirement of subtle but undocumented procedural amendments. This protocol provides a comprehensive description of an established and robust QFWB method, complete with troubleshooting strategies.

The advancement of western blotting using fluorescence has allowed detection of subtle changes in protein expression enabling quantitative analyses. Here we describe a robust methodology for detection of a range of proteins across a variety of species and tissue types. A strategy to overcome common technical problems is also provided.

문제 해결 전략 현대 양적 형광 웨스턴 블로 팅에 가이드

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Discrimination and Characterization of Heterocellular Populations Using Quantitative Imaging Techniques

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do not allow for accurate interpretation of this interplay. Using a quantitative imaging-based approach, we present a high-content protocol for characterizing the dynamic phenotypic responses (i.e. morphology changes, proliferation, apoptosis) of heterogeneous cell populations to changes in environmental stimuli. We highlight our ability to distinguish between cell types based upon either fluorescence intensity or inherent morphology features depending on the application. This platform allows for a more comprehensive characterization of subpopulation response to perturbation while utilizing shorter time, smaller amounts of reagents, and lower likelihood of error than traditional cell biology assays. However, in some cases, cell populations may be difficult to identify and quantitate based on complex cellular features and will require additional troubleshooting; we highlight some of these circumstances in the protocol. We demonstrate this application using response to drug in a cancer model; however, it can easily be applied more broadly to other physiological processes. This protocol allows one to identify subpopulations within a co-culture system and characterize the particular response of each to external stimuli.

We have developed a novel protocol for studying heterocellular population dynamics in response to perturbations. This manuscript describes an imaging-based platform that produces quantitative datasets for simultaneous characterization of multiple cellular phenotypes of heterocellular populations in a robust manner.

정량적 이미징 기법을 이용한 이종 세포 집단의 차별화 및 특성 규명

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the laboratory. In ticks, all developmental stages (except egg) are hematophagous, and acquiring a blood-meal when attached to their vertebrate hosts is essential for the successful completion of their life cycle. Here we demonstrate a simple method that uses easily openable capsules for feeding of hard ticks on rabbits. The advantages of the proposed method include its simplicity, short duration and most importantly versatile adjustment to the needs of specific experimental requirements. The method makes possible the use of multiple chambers (of various sizes) on the same animal, which permits feeding of multiple stages or different experimental groups while reducing the overall animal requirement. The non-irritating and easily accessible materials used minimizes discomfort to the animals, which can be easily recovered from an experiment and offered for adoption or reused if the ethical protocol allows it.

We have developed a simple and versatile system to feed hard ticks on laboratory rabbits. Our non-laborious protocol uses easily accessible materials and can be adjusted depending on the requirements of the various experimental settings. The method allows comfortable monitoring and/or sampling of ticks during the entire feeding period.

실험실 토끼에 하드 진드기 감염의 다양 한 모델

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been studied substantially using traditional two-dimensional techniques. Recent advancements in X-ray imaging technology via desktop micro-computed tomography (&#181;CT) and synchrotron radiation micro-computed tomography (SR&#181;CT) have allowed for the acquisition of high-resolution three-dimensional (3D) scans of a larger field of view (FOV) than other 3D imaging techniques (e.g., SEM) providing a more complete picture of microscopic structures within human cortical bone. The specimen should be accurately centered within the FOV, however, to limit the appearance of streak artifacts known to impact data analysis. Previous studies have reported procurement of irregularly shaped rectilinear bone blocks that result in imaging artifacts due to uneven edges or image truncation. We have applied a geological sampling protocol (coring) to procure consistently sized cortical bone core specimens for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This coring method is efficient and minimally destructive to tissue. It creates uniform cylindrical samples that decrease imaging artifacts by nature of being isometric during rotation and providing a uniform path length for X-ray beams throughout scanning. Image processing of X-ray tomographic data of cored and irregularly shaped samples confirms the potential of the technique to improve visualization and analysis of cortical bone microarchitecture. A goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable method for the extraction of cortical bone cores that is adaptable for various types of high-resolution bone imaging experiments. An overarching goal of the work is to create a standardized cortical bone procurement for SR&#181;CT that is affordable, consistent, and straightforward. This procedure may further be adapted by researchers in related fields who commonly evaluate hard composite materials such as in biological anthropology, geosciences, or material sciences.

We employed a geological (coring) sampling protocol to procure cortical bone specimens of uniform size for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This method is minimally destructive, efficient, results in cylindrical specimens that minimize imaging artifacts from irregular sample shapes and improves microarchitectural visualization and analysis.

싱크로트론 마이크로 CT를 위한 고처리량 피질 뼈 샘플 조달 및 분석을 위한 단면, 코링 및 이미지 처리 가이드

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when acquiring a blood-meal. To locate a host to feed on, mosquitoes rely on a wide range of sensory cues, including visual, mechanical, thermal, and olfactory. The study details a technique, electroantennography (EAG), that allows researchers to assess whether the mosquitoes can detect individual chemicals and blends of chemicals in a concentration-dependent manner. When coupled with gas-chromatography (GC-EAG), this technique allows to expose the antennae to a full headspace/complex mixture and determines which chemicals present in the sample of interest, the mosquito can detect. This is applicable to host body odors as well as plant floral bouquets or other ecologically relevant odors (e.g., oviposition sites odorants). Here, we described a protocol that permits long durations of preparation responsiveness time and is applicable to both female and male mosquitoes from multiple genera, including Aedes, Culex, Anopheles, and Toxorhynchites mosquitoes. As olfaction plays a major part in mosquito-host interactions and mosquito biology in general, EAGs and GC-EAG can reveal compounds of interest for the development of new disease vector control strategies (e.g., baits). Complemented with behavioral assays, the valence (e.g., attractant, repellent) of each chemical can be determined.

The present article details a step-by-step protocol for successful and low noise electroantennograms in several genera of mosquitoes, including both females and males.

모기 전기 조영술에 대한 단계별 가이드

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...