저자는 원고를 편집하기위한 재정적 지원을 위해 박사 Fanie 나베 - 하이더에 ADIR (소재지 보조 Insuffisants Respiratoires à 보좌관)와 매그 드 난 Avenir에서 감사드립니다.

1. 후각 점막과 후각 전구의 차 문화 <ol><li> 해부하기 전에 <ol><li> 44 ㎖를 첨가하여, 50 ㎖에 대한 매체 확인 칼슘없는 둘 베코 변형 이글 / 태아 혈청 (FBS) 5 ㎖ 및 페니실린 / 스트렙토 마이신 1 ㎖로 보충 한 햄스 F12 배지 (DMEM/F12). </li><li> 코트 75cm 폴리-L-라이신 (50 ㎍ / ㎖, 1.5 ㎍ / cm 2), 실온에서 1 시간 2 플라스크. </li><li> PBS 1X로 플라스크를 씻어. </li><li> 최대 1 주 동안 냉장고에 코팅 된 플라스크를 저장합니다. </li></ol></li><li> 해부 <ol><li> 안락사의 방법은 기관의 동물 관리 및 사용위원회의 사전 승인과 자격을 갖춘 기술자 만 수행해야합니다. </li><li> 이러한 피셔 쥐와 같은 근친 쥐를 선택합니다. </li><li> 래트는 나트륨 펜토 바르 비탈이나 케타민 / 자일 라진과 같은 마취 주사 가능한 다른 형태의 깊은 마취를 입력 한 것이 확인 된 후에, 그와 R을 참살피부를 emove. </li><li> 전방에서 후방 부분에 두개골을 엽니 다. </li><li> 수막을 방지하기 위해 OB 복용 치료를 제거합니다. </li><li> 같은 쥐에서 비강 sagittaly를 엽니 다. </li><li> OM은 호흡기 점막을 방지하기 위해주의하면서 제거합니다. OM 상피 쉽게 그 노란 색으로 식별 할 수 있습니다. </li><li> OM의 해부에 대한 더 자세한 프로토콜은 이전에 발견 할 수 있습니다 <a href="https://www.jove.com/video/2762/isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans">J. 비스. 특급</a> . 출판 13. </li></ol></li><li> 문화 <ol><li> 37 ℃에서 45 분 동안 0.1 % 트립신을 포함하는 행크의 버퍼 소금 솔루션 (HBSS)에서 OB를 배치 </li><li> 37 ℃에서 45 분 동안 0.05 % 콜라게나 제를 포함 HBSS에 OM 배치 </li><li> 따뜻한 매체의 2 ㎖를 첨가하여 소화 효소를 중지합니다. </li><li> 배지로 세포를 세척하고 3 분 300 XG에이를 원심 분리. </li><li> 2 씹다 샘플균질 한 세포 현탁액을 얻을 때까지 P1000 피펫을 사용하여 매체의 ML. </li><li> 따뜻한 매체의 25 ㎖로 프리 코트 플라스크 (5 ~ 10 × 10 6 세포 / 플라스크)에있는 세포를 접시. </li><li> 5 % CO 2와 37 ° C에서 세포를 품어 문화. </li><li> 2 일마다 배지의 절반을 변경합니다. </li><li> 체외 6-8 일 후, 작은 세포 샘플에 P75 양성 세포의 비율을 확인, 세포 계측법 또는 면역 세포 화학 흐름에 의해, 설치류에 OECs로 가정. 이러한 분석을 위해, 다른 마커는 GFAP 및 S100β으로 공부하실 수 있습니다. </li></ol></li><li> 유동 세포 계측법 분석 <ol><li> &quot;세포 이식&quot;(아래의 제 2 조 2 항)에 설명 된대로 세포를 수집합니다. </li><li> 4 ℃에서 15 분 동안 P75 차 항체 (1:100)로 품어 </li><li> PBS-EDTA 2 ㎖로 세포를 세척하고 3 분 300 XG에이를 원심 분리. </li><li> 15시 PE 복합 항 마우스 이차 항체와 세포를 품어(1:200) 어둠 속에서 4 ° C에서 분. </li><li> PBS-EDTA 2 ㎖로 세포를 세척하고 3 분 300 XG에이를 원심 분리. </li><li> PBS-EDTA의 500 μL의 세포를 Resuspend. </li><li> 유동 세포 계수기와 10 ~ 30 × 10 3 세포를 분석 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 면역 세포 화학 분석 <ol><li> &quot;문화&quot;(섹션 아래 1.1.2)에 설명 된대로 48 시간 동안 프리 코트 6 - 웰 플레이트에 세포를 접시. </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> 실온에서 15 분 동안 PFA 4 %로 세포를 고정합니다. </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> 실온에서 15 분 동안 PBS / 트리톤 (Triton) X100 (0.1 %)로 세포를 품어. </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> 차 항체 (1:200)와 세포를 품어 : 하룻밤 4 ℃에서 P75, S100β 및 GFAP </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> 어둠 속에서 실온에서 1 시간 동안 차 항체 (1:500)와 세포를 품어. </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> R에서 훽스트 10 분에 세포를 품어어둠 속에서 T. </li><li> PBS로 세포를 씻으십시오. </li><li> 형광 현미경을 사용하여 세포를 분석 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> GFP 라벨 세포 <ol><li> 닷새 이식하기 전에, 강화 GFP (:​​ 20 감염의 다중성을) 숨겨 렌티 바이러스 벡터로 하룻밤 OB와 OM 문화를 감염. </li><li> 작은 샘플 &quot;문화&quot;(1.1 절)에서 전술 한 바와 같이 유동 세포 계측법에 의해 GFP 양성 세포의 비율에 이식 확인하기 전에. </li></ol></li></ol> 2. 수술과 이식 <ol><li> 재발 성 신경 문합 <ol><li> 동물의 모든 실험은 기관의 동물 관리 및 사용위원회의 사전 승인과 자격을 갖춘 기술자 만 수행해야합니다. </li><li> 수술 전에 오토 클레이브에 모든 악기와는 외과 적 치료를 통해 불임을 유지한다. </li><li> 케타민을 하이드로 클로라이드의 복강 내 주사 (12.5 ㎎ / ㎏)과 클로르 프로 마진 염산염 (가 쥐를 마취0.625 ㎎ / kg). 수술 전에 발가락 핀치에 의해 마취의 적합성을 평가합니다. </li><li> 지느러미 욕창에 쥐를 놓습니다. </li><li> 메스 2cm 세로 매체 자궁 경부 피부 절개를 수행합니다. </li><li> 중간 흰색 선 다음 infrahyoid 근육의 수직 절개를 수행합니다. </li><li> infrahyoid 근육 사이에 자동 고정 견인기를 사용하여 후두를 노출합니다. </li><li> RLN 노출. </li><li> 미세한 컨트롤에서 일곱 번째 기관 고리의 수준에서 microscissors으로 완전히 신경을 잘라. </li><li> 미세한 제어 11.0 봉합의 한 지점을 사용하여 문합을 수행합니다. 이 수술은 후두의 특정 모터 탈 신경에 이르게한다. </li></ol></li><li> 세포 이식 <ol><li> 그냥 이식하기 전에, 37 ℃에서 5 분 동안 0.05 % 트립신 EDTA를 사용하여 요리에서 세포를 제거 </li><li> 따뜻한 매체의 2 ㎖를 첨가하여 소화 효소를 중지합니다. </li><li> 3 분 300 XG에 원심 분리기. </li><lI&gt; 현미경 하에서 혈구를 사용하여 세포를 세고 특정 프로토콜에 따라 세포의 농도를 조정. 이 모델에서, 원하는 농도는 DMEM/F12 30 μL 6 10 × 1.2-6 사이의 세포했다. </li><li> 이식 전에 1.5 ML 튜브에 DMEM/F12-Matrige 리터의 1시 2분 혼합 (이 실험에서 30 ~ 60 μL)와 휴대 준비를하고 얼음에 놓습니다. , 비특이적 효과를 피하기 마트 리겔을 감소 성장 인자를 사용한다. </li><li> 그냥 이식하기 전에 마트 리겔 매체 믹스를 따뜻하게하는 몇 초 동안 당신의 손에 튜브를 개최합니다. </li><li> 피펫을 사용하여 문 합부에 믹스를 면직하고 부상당한 신경의 혼합물의 자기 조립 될 때까지 기다립니다. </li><li> 4.0 봉합사로 근육과 피부를 닫습니다. </li><li> 집 쥐 개별적으로 24 시간 동안 가열 램프 아래에 유지. </li></ol></li></ol> 3. 평가 <ol><li> 후두경 <ol><li> intraperit로 쥐를 마취케타민을 하이드로 클로라이드 (12.5 ㎎ / ㎏)과 클로르 프로 마진 염산염 (0.625 ㎎ / ㎏)의 ONEAL 주입. 확인 쥐 전에 프로토콜을 진행하기에 발가락 핀치 마취 있습니다. </li><li> 지느러미 욕창에 쥐를 놓습니다. </li><li> 후두의 최고의 전망을 제공하기 위해 조정 된 30 ° videolaryngoscope를 삽입합니다. 각각의 기록에 대한 동일한 뷰를 재현하는 해부학 적 랜드 마크를 확인합니다. </li><li> videolaryngoscope (5-10 시퀀스 / 동물)를 사용하여 성대의 움직임을 기록합니다. 각 동물에 대해 연속 최대 내전 및 외전 최대 세 시퀀스를 선택합니다. </li><li> 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 후두 함수를 분석한다. 최대 납치 성대의 최대 내전의 움직임의 차이를 측정하여 절대 각도의 움직임을 확인합니다. 움직임의 진폭을 측정함으로써 동적 점수를 결정합니다. synkinesis 및 paradoxal 움직임을 측정하여 기능 점수를 결정합니다. </li></ol></li><li> 근전도 (EMG) <ol><lI&gt; 전기 절연을 위해 쥐의 다리 힘줄 근육에 전극을 배치합니다. </li><li> &quot;재발 성 신경 문합&quot;(2.1)에서 전술 한 바와 같이 피부와 근육을 열어 후두 및 기관을 노출합니다. </li><li> cricothyroid 연골을 노출합니다. </li><li> microscissors를 사용하여 후방 cricoarytenoid (PCA) 근육을 노출하는 cricothyroid 연골을 엽니 다. </li><li> PCA 근육의 단극 바늘 전극 (38 × 0.45 mm)를 소개합니다. </li><li> 자연 환​​기 중에 획득 시스템을 사용하여 PCA 근육의 근육의 전기 활성을 기록한다. </li><li> 호흡과 풍요 로움과 동기화 측면에서 근육 활동을 분석합니다. 풍부한 활동과 추적 운을 맞춘 : 증가 흡기와 추적 운을 맞춘,하지만별로 추적 (neurogen), 2 : 영감, 1시 unrhymed 추적, 증가없이 0 : EMGS을 분석하기 위해, 다음과 같은 척도를 사용하여 0-3 질적 점수를 할당 3 : I를 구성, 매우 풍부한 추적 운을 맞춘최대 의도적 인 활동과 유사한 nterference 패턴. </li><li> 대기 시간 및 잠재적 인 시간을 측정하는 미주 신경을 노출합니다. RLN 인해 작은 크기에 자극 도중 손상을 입힐 수 있기 때문에 미주 신경은 자극의 사이트로 선택된다. </li><li> 전극과 미주 신경을 자극한다. </li><li> PCA 근육에 전기 신호를 기록한다. 대기 시간 및 잠재적 인 지속 시간을 측정한다. 가능하면 같은 PowerLab의 시스템으로 근육 활동, 대기 시간 및 잠재적 인 시간을 기록 수집 모듈을 사용합니다. </li></ol></li><li> 조직학 <ol><li> 펜토 바르 비탈 과다 복용을 사용하여 동물을 안락사. </li><li> 미세한 제어 RLN의 말초 그루터기를 제거합니다. RLN의 말단 부분은 문 합부와 후두 사이의 부분으로 정의된다. 는 11.0 봉합은 비 흡수성 봉합사 때문에 몇 주 동안 수술 후 문 합부를 찾을하는 것이 가능하다. </li><li> 0.1 M 인산과 2 % 글 루타 알데하이드 (glutaraldehyde)에 RLN의 말단 부분을 놓고4 ℃에서 2 시간 동안 (= 7.3의 pH) </li><li> 조심스럽게 코로나 섹션을 실현하기 위해 샘플의 방향. </li><li> 인산 버퍼에 샘플을 씻으십시오. </li><li> 1 % cacodylate에 실온에서 60 분 동안 작은 세그먼트 (3-4 mm 길이)와 후위를 절단 OSO 4 에탄올 탈수 버퍼링. </li><li> 오리엔트 실리콘 금형 샘플 및, POLYBED 812 DDSA 및 MNA으로 이루어지는 수지에 매립 촉진제 BDMA 2 %를 첨가하도록한다. </li><li> Pyramitome Ultramicrotomy 시스템을 사용하여 반 얇은 가로 섹션 (1 ㎛ 두께)을 확인합니다. </li><li> 70 ℃에서 75 초 동안 1 %의 나트륨 붕산 0.1 % 톨루이딘 블루로 얼룩 </li><li> 계수 분석 시스템 RLN 샘플을 분석합니다. 섬유의 수를 세어 수초의 외측 및 내측 경계를 결정함으로써 유수 신경 섬유 프로파일을 측정한다. </li></ol></li><li> 이식 <ol><li> 이식 세포를 준비하고 이전에 기술 된 세포를 이식&quot;세포 이식&quot;에 (2.2 절). </li><li> 분석 </li><li> 펜토 바르 비탈 과다 복용을 사용하여 동물을 안락사. 동물의 고정은 PFA의 심장 내 주입 4 %를 사용하여 수행 할 수 있습니다. </li><li> RLN의 약 2cm를 제거합니다. 근위 및 RLN의 말단 부분을 사용합니다. </li><li> 액체 질소에 RLN 샘플을 수정. </li><li> -80 ° C에서 저장 샘플 </li><li> 컷 샘플은 길이 방향으로 저온 유지 장치 (10 ~ 20 μm의 두께)를 사용하여. </li><li> GFP 양성 세포를 감지하는 형광 현미경으로 샘플을 분석합니다. 항-GFP 항체가 형광 발광을 증가시키고 costainings을 수행 할 수 없습니다. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

여기에 제시된 기술은 OECs 말초 신경 손상 모델에서 세포 이식을 연구하는 유용한 모델합니다. 세포 배양 프로토콜은 비교적 간단하고 쉽게 행할 수있다. 한편, 수술 절차는 RLN의 특정 섹션 / 문합에서, 경험을 필요로하고 자격을 갖춘 기술자 만 수행해야합니다. 이 프로토콜에 설명 된 절차는 최상의 결과를 얻기 위해 포커스를 중요한 요소를 강조. 첫째, OM의 해리 동안, 우?...

후각 점막 (OM) 중추 신경계 및 말초 신경계 후각 망울 (OB)에서, 일차 후각 시스템은 별개의 두 부분으로 구성된다. 주요 후각 시스템은 포유류 종의 삶을 통해 자기 갱신에 대한 기본 후각 뉴런 (PON)의 용량을 특징으로한다. 이러한 능력으로 인해 OM의 신경 줄기 세포의 존재를 가능하게한다. OM에서 OB에 PON의 성장과 재성장은 후각 ensheathing 세포라는 전문 glial 세포 (OECs)에 의해 촉진된다. OECs 1 OB하는 OM에서 PON의 신경에 유리한 미세 환경을 만드는 신경 능선 세포입니다. 이것에 의해, OECs 세포 2,3의 다른 모집단을 구성하는 OM와 OB에서 찾을 수 있습니다. OECs의 다른 특성은 여러 가지 신경계 병변 패러다임 4 세포 이식을 위해 그들을 사용하는 리드 과학자가있다. 사실, OECs 생산 성장 요인, 홍보, 아교 퇴치 용을 감소오모테 축삭 재성장, 자유롭게 성상 세포의 5,6로 뒤섞다 수 있습니다. 그러나, 이러한 연구의 대부분은 척수 손상 (SCI) 기준, 그들 중 몇몇은 말초 신경 손상 (PNI) 7,8 후 OECs를 사용했습니다. 말초 신경계는 신경 손상 후 재생하는 좋은 능력을 가지고 있지만, 완전한 절 탈선 축삭의 재성장을 유도한다. 사실, (RLN) 얼굴 또는 재발하는 후두 신경의 완전한 transections 후 잘못 전달 축삭 synkinesis라는 근육 cocontractions의 원인이됩니다. 그 때문에 축삭 재성장을 정량화 할뿐만 아니라 근육 수축의 효율성을 평가하는 PNI의 모델을 제안하는 가장 중요하다. 문헌에 기재된 대부분의 일반적인 모델은 안면 신경 병변 9,10에 기초한다. 이 모델에서 기능적 평가는 턱 (10)의 움직임에 기초하여 복구된다. 그러나 그것은 MOV의 효율성을 설명하기 복잡ements 및 근육 cocontractions 현상을 구별합니다. 우리는 여기에 RLN 병변을 기반으로 모델을 제안한다. 이 모델은 축삭 재성장과 성대의 움직임뿐만 아니라 세포 이식 (11, 12) 이후이 운동의 효율성과 기능뿐만 아니라의 평가를 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 RLN 섹션 / 문합 모델 OM와 OB에서 문화와 이식 OECs에 단계 절차에 의해 단계를 제공하고 수술 후 동물을 평가.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> 후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장과 재성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 사실, 기본 후각 시스템은 심지어 성인 동물에서 새로운 신경 세포에 상승을 제공 할 수있는 기능이 특징입니다. 이 특별한 기능은 신경의 유리한 미세 환경을 만들 OECs의 존재에 부분적으로 기인한다. OECs이 속성은 척수 손상 모델에서와 같이 세포의 이식에 사용되었습니다. 말초 신경계는 중추 신경계 이상의 신경 손상 후 재생하는 더 큰 용량을 가지고 있지만, 완전한 섹션은 후두 신경 절개의 얼굴 후 특히 축삭 재성장 동안 misrouting을 유도한다. 특히, 재발 후두 신경 (RLN)의 전체 단면은 성대의 synkinesis의 결과로 탈선 축삭 재성장을 유도한다. 이 특정 모델에서, 우리는 OECs 이식을 효율적으로 축삭의 재성장을 증가 시킨다는 것을 보여 주었다. ve_content &quot;&gt; OECs가 후각 점막 (OM-OECs) 및 후각 전구 (OB-OECs) 모두에 존재하는 여러 소집단으로 구성되어있다. 우리는 여기에서 OECs의 서로 다른 모집단의 사용을 기반으로 세포 이식의 모델을 제시 RLN 부상 모델.이 패러다임을 사용하여이, OB-OECs과 OM-OECs의 차 문화가 RLN의 부와 문합 후 리겔에 이식했다. 두 달 수술 후, 우리는 videolaryngoscopy에 따라 상호 보완적인 분석에 의해 이식 된 동물을 평가, 근전도 (EMG) , 조직 학적 연구. 첫째, videolaryngoscopy 특히 근육 cocontractions 현상이. 그런 다음, EMG 입증 풍요 로움과 근육 활동의 동기를 분석한다. 마지막으로, 톨루이딘 블루 염색에 따라 조직 학적 연구는 번호와 프로파일의 정량화를 허용, 우리는 후두의 기능을 평가할 수 유수의 섬유. 모두 함께, 우리는, 문화, IDE에게 분리하는 방법을 여기에 설명OM와 OB에서 ntify 이식 OECs RLN 섹션 - 문합 방법 축삭 재성장 및 후두 기능에 대한 이러한 이식 세포의 효율성을 평가하고 분석하는 후.

제어와 (과 / 문합) 동물 reinnervated와 그림은 결과 (OM, OB 또는 OM + OB) 수행 세포 이식에 따라 달라질 수 있습니다로 선정되었다. 세포 배양 세포는 플라스틱 표면에 빠르게 밀착 기다란 또는 테이퍼, 삼각형, 다극 또는 방추형되는 셀로 병렬 달해으로 분리되었다 (도 1a 및도 1b). 세포 계측법 분석 시험 관내 흐름의 8 일 후에 P75 양성 세포의 비율, 기...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다.

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

transplantation-olfactory-ensheathing-cells-to-evaluate-functional

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.7K 조회수.  University of Rouen.  후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다. 

비디오: Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible vision loss. Examples of such diseases in human include traumatic optic neuropathy and optic nerve degeneration in glaucoma. It is characterized by typical changes in the optic nerve head, progressive optic nerve degeneration, and loss of retinal ganglion cells, if uncontrolled, leading to vision loss and blindness.
The optic nerve crush (ONC) injury mouse model is an important experimental disease model for traumatic optic neuropathy, glaucoma, etc. In this model, the crush injury to the optic nerve leads to gradual retinal ganglion cells apoptosis. This disease model can be used to study the general processes and mechanisms of neuronal death and survival, which is essential for the development of therapeutic measures. In addition, pharmacological and molecular approaches can be used in this model to identify and test potential therapeutic reagents to treat different types of optic neuropathy.
Here, we provide a step by step demonstration of (I) Baseline retrograde labeling of retinal ganglion cells (RGCs) at day 1, (II) Optic nerve crush injury at day 4, (III) Harvest the retinae and analyze RGC survival at day 11, and (IV) Representative result.

This protocol shows how to retrogradely label retinal ganglion cells, and how to subsequently make an optic nerve crush injury in order to analyze retinal ganglion cell survival and apoptosis. It is an experimental disease model for different types of optic neuropathy, including glaucoma.

망막 신경절 세포의 생존을 공부 시신경의 호감 상해 Murine 모델

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

연구

신경과학

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

생활 Xenopus Tadpoles에 후 각 통로의 기능 평가

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

쥐에서 급성 뇌졸중 후 뇌 회복을 평가하는 전임상 모델

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

Sciatic 신경 호감 상해의 쥐 모형에 있는 기능 평가를 위한 3D 운동학 분석

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

체외에서 감각 및 모터 신경에서 섬유 아세포와 슈완 세포의 정화

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and a lot of comparative data has been published in the literature. This includes a multitude of assessment methods to study functional recovery following nerve injury and repair. Besides evaluation of nerve regeneration by means of histology, electrophysiology, and other in vivo and in vitro assessment techniques, functional recovery is the most important criterion to determine the degree of neural regeneration. Automated gait analysis allows recording of a vast quantity of gait-related parameters such as Paw Print Area and Paw Swing Speed as well as measures of inter-limb coordination. Additionally, the method provides digital data of the rats&#8217; paws after neuronal damage and during nerve regeneration, adding to our understanding of how peripheral and central nervous injuries affect their locomotor behavior. Besides the predominantly used sciatic nerve injury model, other models of peripheral nerve injury such as the femoral nerve can be studied by means of this method. In addition to injuries of the peripheral nervous systems, lesions of the central nervous system, e.g., spinal cord contusion can be evaluated. Valid and reproducible data assessment is strongly dependent on meticulous adjustment of the hard- and software settings prior to data acquisition. Additionally, proper training of the experimental animals is of crucial importance. This work aims to illustrate the use of computerized automated gait analysis to assess functional recovery in different animal models of peripheral nerve injury as well as spinal cord contusion injury. It also emphasizes the method&#8217;s limitations, e.g., evaluation of nerve regeneration in rats with sciatic nerve neurotmesis due to limited functional recovery. Therefore, this protocol is thought to help researchers interested in peripheral and central nervous injuries to assess functional recovery in rodent models.

Automated gait analysis is a feasible tool to evaluate functional recovery in rodent models of peripheral nerve injury and spinal cord contusion injury. While it requires only one setup to assess locomotor function in various experimental models, meticulous hard- and soft-ware adjustment and training of the animals is highly important.

주변 신경 또는 척수 타박상 부상으로 설치류의 기능적 회복을 평가하기 위한 자동 걸음걸이 분석

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

축 축 하 재생의 시험관 내 모델로, 후각 천시 글리아와 축 축 절 망막 신경의 공동 문화

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask gait analysis consisted of a single walking task (Task 0), a simple motor dual-task (water-holding, Task 1), and a complex motor dual-task (crossing obstacles, Task 2). The task of crossing obstacles was considered to be equivalent to the combination of a simple walking task and a complex motor task as it involved more nervous system, skeletal movement, and cognitive resources. To eliminate heterogeneity in the results of the gait analysis of the stroke patients, the dual-task gait cost values were calculated for various kinematic parameters. The major differences were observed in the proximal joint angles, especially in the angles of the trunk, pelvis, and hip joints, which were significantly larger in the dual motor tasks than in the single walking task. This research protocol aims to provide a basis for the clinical diagnosis of gait function and an in-depth study of motor control in stroke patients with motor control deficits through the analyses of dual-motor walking tasks.

This paper presents a protocol specifically for dual motor task gait analysis in stroke patients with motor control deficits.

뇌졸중 후 환자의 보행 분석 및 평가를 위한 운동 이중 작업

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Multifactorial Assessment of Motor Behavior in Rats after Unilateral Sciatic Nerve Crush Injury

The induction of a peripheral nerve injury is a widely used method in neuroscience for the assessment of repair and pain mechanisms among others. In addition, in the research field of movement disorders, sciatic crush injury has been employed to trigger a dystonia-like phenotype in genetically predisposed DYT-TOR1A rodent models of dystonia. To achieve consistent, reproducible and comparable results after a sciatic nerve crush injury, a standardized method for inducing the nerve crush is essential, in addition to a standardized phenotypical characterization. Attention must be paid not only to the specific assortment of behavioral tests, but also to the technical requirements, the correct execution and consecutive data analysis. This protocol describes in detail how to perform a sciatic nerve crush injury and provides a behavioral test battery for the assessment of motor deficits in rats that includes the open field test, the CatWalk XT gait analysis, the beam walking task, and the ladder rung walking task.

We provide a protocol for the assessment of motor behavior via a behavioral test battery in rats after sciatic nerve crush injury.

일방적인 상시 신경 호감 부상 후 쥐에서 모터 행동의 다인 평가

The induction of a peripheral nerve injury is a widely used method in neuroscience for the assessment of repair and pain mechanisms among others. In ...

A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and heterogenous secondary effects. While there is no mechanism to replace or regenerate the lost neurons following a TBI in humans, zebrafish possess the ability to regenerate neurons throughout their body, including the brain. To examine the breadth of pathologies exhibited in zebrafish following a blunt-force TBI and to study the mechanisms underlying the subsequent neuronal regenerative response, we modified the commonly used rodent Marmarou weight drop for the use in adult zebrafish. Our simple blunt-force TBI model is scalable, inducing a mild, moderate, or severe TBI, and recapitulates many of the phenotypes observed following human TBI, such as contact- and post-traumatic seizures, edema, subdural and intracerebral hematomas, and cognitive impairments, each displayed in an injury severity-dependent manner. TBI sequelae, which begin to appear within minutes of the injury, subside and return to near undamaged control levels within 7 days post-injury. The regenerative process begins as early as 48 hours post-injury (hpi), with the peak cell proliferation observed by 60 hpi. Thus, our zebrafish blunt-force TBI model produces characteristic primary and secondary injury TBI pathologies similar to human TBI, which allows for investigating disease onset and progression, along with the mechanisms of neuronal regeneration that is unique to zebrafish.

We modified the Marmarou weight drop model for adult zebrafish to examine a breadth of pathologies following blunt-force traumatic brain injury (TBI) and the mechanisms underlying subsequent neuronal regeneration. This blunt-force TBI model is scalable, induces a mild, moderate, or severe TBI, and recapitulates injury heterogeneity observed in human TBI.