우리는 NIH (NHLBI 계약 번호 HHSN268201000044C이, SH 및 SYS를 RW하는)에서 자금을 인정합니다.

1. GST 및 나노 입자 (NP) 결합체의 제조 <ol><li> GST-TCO 준비 : <ol><li> GST (PBS에 1 ㎎ / ㎖)의 100 μL로 TCO-NHS 솔루션의 8 μL (DMSO에 50 mm)를 추가하고 1 시간 동안 실온에서 혼합물을 흔들어. </li><li> Zeba 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 과량의 시약을 제거합니다. GST-TCO 복합체를 포함하는 복구 여과 액을 사용하기 전에 4 ° C에 저장됩니다. </li></ol></li><li> GST-는 TZ 준비 : <ol><li> GST (PBS에 1 ㎎ / ㎖)의 75 μL에 TZ-NHS 용액을 6 μL (DMF 25 mm)를 추가하고 1 시간 동안 실온에서 혼합물을 흔들어. </li><li> PBS 25 μL로 반응 혼합물을 희석하고 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 정제. GST-는 TZ 접합체를 포함하는 여과 액을 사용하기 전에 4 ° C에 저장됩니다. </li></ol> 참고 : 질량 분석 (MALDI-TOF)이 평균 10 ~ Tz 일 또는 TCO 분자가 GST에 접합 된 것으로 나타났다. </li><li> NP-TCO 준비 : <ol><li> 에 TCO-NHS 용액 100 μL (DMSO에 50 mm)를 추가150 아미 노화 나노 입자 (NP-NH 2, PBS에 8.7 밀리그램 철 / ㎖, 3 nm의 철심 ~ 8,000 페 / NP)의 μL와 1 시간 동안 실온에서 혼합물을 흔들어. </li><li> PBS 버퍼로 용출 NAP-10 컬럼을 사용하여 겔 여과에 의해 과잉 시약을 제거합니다. NP-TCO 제품을 포함하는 컬러 밴드를 수집합니다. </li><li> 원심 분리 필터 장치 (100 K MWCO)를 이용하여 ~ 150 μL의 최종 부피로 여과 액을 농축. </li><li> NP-TCO 용액에 숙신산 무수물 50 μL, (DMSO 중 0.1 M)를 첨가하고 1 시간 동안 RT에서 동요 (무수물 단자 카르 복실 산을 형성하기 위해 남아있는 아민들과 반응한다.이 덱스 트란 표면에 비특이적 상호 작용을 방지한다). </li><li> PBS로 용출 NAP-10 컬럼을 사용하여 NP-TCO 생성물을 정제 하였다. 사용하기 전에 4 ° C에서 NP-TCO의 솔루션을 저장합니다. </li></ol></li></ol> 2. 표면 처리 모든 표면 플라즈몬 공명 분석법에 비아 코어 T100 악기 (GE 헬스 케어)에서 수행됩니다25 ° C는 실행 버퍼로 CM5 센서 칩과 PBS-P를 사용하여 별도의 언급이없는 한. 악기와 함께 제공되는 비아 코어 제어 및 평가 소프트웨어는 실험을 설정하고 데이터를 분석에 이용된다. 두 가지 동작 모드, 응용 프로그램 마법사 및 수동 실행은 표면 처리 및 모니터링 온칩 캡처 - 사이클로 사용됩니다. 방법 빌더 모드는 역방향 방향 결합 실험을 설치와 고리 화 반응 속도를 측정하는데 사용된다. 데이터를 두 번 참조 감산 및 운동 분석이 1:1 랭 뮤어 결합 모델을 사용하여 수행됩니다. <ol><li> 흐름 세포에 아민 고정화 마법사 템플릿을 선택 고정 1 (참조), 2 (검출)를 사용합니다. 0.4 M EDC의 1:1 용액을 주입하여 표면 카르 복실 그룹을 활성화하는 방법을 수정 아민 : 480 초 동안 0.1 M NHS를 10 μL / 분의 유속. 에서 420 초 접촉 시간에 남아있는 활성 에스테르를 해소하기 위해 에탄올의 주입을 설​​정10 μL / 분의 유속. </li><li> 입력 리간드 이름, 항-GST (아세테이트 완충액, pH 5.0으로 18 μg / ㎖) 및 10 μL / 분의 유속으로 420 초 접촉 시간 동안 주입 세트. </li><li> 콘텐츠 목록과 위치를 일치시켜야하는 시약 랙 2에 필요한 솔루션 튜브를 놓습니다. 저장 및 고정화를 시작합니다. 참고 : ~ 14,000 17,000 RU의 범위에서 안티 GST 고정화 수준에서이 방식으로 결과에 고정화 마법사를 실행합니다. </li><li> 참고 흐름 전지 (1)에 5 μL / 분에서 420 초 (20 ㎍ / ml) 용액을 GST 리간드를 주입​​하는 고정 마법사를 편집합니다. </li></ol> 3. 기능화 분자의 모니터링에 칩 캡처 - 사이클로 <ol><li> 온칩 실시간으로 캡처 - 사이클로 (그림 2) 모니터링. <ol><li> GST-TCO (20 ㎍ / ㎖), TZ-BnNH 2 (10 μM) 및 재생 (10 mM의 글리신, pH가 2.0) 시약 랙 2 솔루션 튜브를 놓습니다. 사람을 선택연간 실행 방법은 5 μL / 분으로 유량을 설정하고 셀 2 흐름 경로를 흐른다. </li><li> 420 초 동안 GST-TCO의 솔루션을 주입한다. </li><li> 600 초 동안 TZ-BnNH 2 용액을 주입한다. </li><li> 재생 용액의 두 개의 30 초 주사하여 표면을 재생. </li></ol></li><li> 리얼 타임 (그림 3)의 다 성분 구조의 온 - 칩 어셈블리를 모니터링 : <ol><li> GST-Tz 일 (20 ㎍ / ㎖), NP-TCO (100 μg 철 / ㎖), TZ-BnNH 2 (10 μM) 및 재생 (10 mM의 글리신, pH가 2.0) 시약 랙 2 솔루션 튜브를 놓습니다. 악기 수동 운전 방법을 선택, 셀 2 흐름에 5 μL / 분 유로에 유량을 설정합니다. </li><li> 60 초 동안 GST-Tz 일의 용액을 주입한다. </li><li> 60 초 동안 NP-TCO의 솔루션을 주입. </li><li> 60 초 동안 TZ-BnNH 2 용액을 주입한다. </li><li> 재생 용액의 두 개의 30 초 주사하여 표면을 재생. </li></ol></li></ol> 4. 엠사이클로 환율의 고정화 밀도 및 결정을 onitoring <ol><li> 작은 분자 고리 화 반응 속도 (그림 4)의 특성. <ol><li> 새로운 방법 및 입력 일반 매개 변수를 선택합니다. 분석 단계 패널에서 새로운 단계로 이름 샘플을 만들 수 있습니다. 목적을 설정하고 샘플에 기본 설정을 연결합니다. </li><li> 사이클 유형 패널에서 새로운 사이클 단계를 작성하고 다음 명령을 삽입, 캡처, 샘플, 재생 1과 재생 2. </li><li> 캡처 명령을 선택, 입력 리간드 이름 (GST-TCO, 20 ㎍ / ㎖) 5 μL / 분으로 설정 유로의 접촉 시간 120 초 : 초. 샘플 명령을 선택, 입력 180 초 접촉 시간, 60 초 해리 시간, 30 μL / 분의 유량으로 설정 유로 : 양쪽 모두. 재생 1 명령을 선택, 입력 재생 용액 이름 (10 mM의 글리신 - 염산의 pH 2.0), 30 μL / 분으로 설정 유로에서 30 초 접촉 시간 : 초. 재생이 명령에 대해 동일한 작업을 반복합니다. &lt;/ 리&gt; <li> 선택 설치 실행과로 설정 유로 : 2-1. 다음 선택 및 분석 솔루션 (TZ-BnNH 2) 농도 시리즈 (0.3 ~ 10 μM 1:2 희석)와 샘플 목록을 입력합니다. 위치 패널 랙 옆에 선택합니다. 96 - 웰 플레이트에있는 시약 랙 2 희석 시리즈 플레이스 솔루션 유리 병은 콘텐츠 목록과 위치를 일치시켜야하고. 방법 템플릿을 저장하고 결합 분석을 시작합니다. 데이터 바인딩 및 운동 분석은 그림 4에 나타내었다. </li></ol></li><li> NP 고리 화 반응 속도 (그림 4)의 특성. <ol><li> 위의 저장 방법 서식 파일을 열고 다음 매개 변수를 변경합니다. [캡처] 패널을 선택, GST-Tz 일, 20 ㎍ / ㎖의로 변경 리간드 이름입니다. 견본 패널을 선택, 변화의 접촉 시간 120 초 접촉 시간 및 분리 시간 120 초에. </li><li> 샘플 목록을 선택, NP-TCO 및 농도 시리즈 (7 nm의 224에 1:2 희석)에 분석을 변경할 수 있습니다. 시약 랙에 배치 솔루션 유리 병2와 콘텐츠 목록과 위치를 일치시켜야하는 96 - 웰 플레이트에 희석 시리즈. 방법 템플릿을 저장하고 결합 분석을 시작합니다. 데이터 바인딩 및 운동 분석은 그림 4에 나타내었다. </li></ol></li></ol> 5. 고정화 AP1497에 FKBP12의 결합을 측정 반전 지향 결합 연구는 고정 된 리간드와 분석 및 복합 AP1497 (그림 5)로 FKBP12를 사용합니다. 방법 작성 도구를 사용하여 다음과 같이 분석의 일반적인 방법은 설정되어 있습니다 : <ol><li> 새로운 방법 및 입력 일반 매개 변수를 선택합니다. 분석 단계 패널에서 생성하고 이름을 캡처, 샘플 및 재생 단계. 해당 목적을 선택하고 기본 설정을 연결합니다. </li><li> 사이클 종류의 패널을 선택하고 3주기 단계 생성 : 캡처, 샘플 및 재생을. </li><li> 캡처주기 단계에서 두 번 캡처 명령을 삽입합니다. variabl로 캡처 한 패널을 선택 캡처 솔루션을 선택둘째, 전자, 5 / 분 μL 및 설정 유로의 유량으로 접촉 시간을 300 초로 설정합니다. 둘째로 5 μL / 분으로 설정 유로의 유량으로 250 초에 접촉 시간을 설정 변수로 캡처 2 패널 선택 캡처 솔루션을 선택합니다. </li><li> 샘플주기 단계에서 샘플 명령을 삽입합니다. 견본 패널을 선택, 60 초에 설정 접촉 시간, 30 μL / 분의 유량으로 설정 유로에서 200 초에 분리 시간 : 양쪽 모두. </li><li> 재생주기 단계에서 두 번 재생 명령을 삽입합니다. 재생 1 패널을 선택, 입력 재생 용액 이름 (10 mM의 글리신 - 염산의 pH 2.0), 30 μL / 분으로 설정 유로에서 30 초 접촉 시간 : 초. 재생 2 패널에 대해 동일한 작업을 반복합니다. </li><li> 선택 설치 실행과로 설정 유로 : 2-1. 다음 입력 캡처 솔루션 이름 (GST-TCO와 AP1497-Tz 일), 샘플 이름 (FKBP12), 농도 시리즈 (0.020-5 ㎍ / ㎖의 1:2 희석)와 MW (13,000)을 선택합니다. R의 장소 솔루션 유리 병96 - 웰 플레이트에 eagent 랙 2 희석 시리즈는 콘텐츠 목록과 위치를 일치시켜야하고. 방법 템플릿을 저장하고 결합 분석을 시작합니다. 키네틱 분석 데이터는도 5에 나타낸다. </li></ol> 6. 고정화 된 국민 연금 첨부 AP1497에 FKBP12의 결합을 측정 나노 입자의 고정화, 작은 분자 유도체 및 FKBP12 결합 분석을위한 일반적인 방법은 셋업하는 방법 작성 도구를 사용하여 다음과 같이 <ol><li> 위의 저장 방법 서식 파일을 열고 수정합니다. 캡처주기의 단계에 따라 추가 캡처 명령을 삽입합니다. 캡처 한 패널을 선택, 변수 이름 캡처 솔루션 1 (GST-Tz 일)로 캡처 솔루션의 선택을 취소합니다. 5 μL / 분의 유량과 두 번째로 설정 유로에서 60 초에 설정 접촉 시간. 캡처 2 패널을 선택, 변수 이름을 캡처 솔루션 2 (NP-TCO)으로 캡처 솔루션의 선택을 취소합니다. 고정 접촉 시간 5 μL / 분의 유속으로 90 초 및설정 유로로 두 번째. 캡처 3 패널을 선택, 변수 이름을 캡처 솔루션 3 (AP1497-Tz 일)로 캡처 솔루션의 선택을 취소합니다. 5 μL / 분의 유량과 두 번째로 설정 유로에서 180 초까지 설정 접촉 시간. </li><li> 선택 설치 실행과로 설정 유로 : 2-1. 다음을 두 번 선택합니다. 96 - 웰 플레이트에있는 시약 랙 2 희석 시리즈 플레이스 솔루션 유리 병은 콘텐츠 목록과 위치를 일치시켜야하고. 방법 템플릿을 저장하고 결합 분석을 시작합니다. 키네틱 분석 데이터는도 5에 나타낸다. </li></ol>

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	<li>Devaraj, N. K., Upadhyay, R., Haun, J. B., Hilderbrand, S. A., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+and+sensitive+pretargeted+labeling+of+cancer+cells+through+a+tetrazine/trans-cyclooctene+cycloaddition.">Fast and sensitive pretargeted labeling of cancer cells through a tetrazine/trans-cyclooctene cycloaddition.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 48, 7013-7016 (2009).</li><li>Seitchik, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+encoded+tetrazine+amino+acid+directs+rapid+site-specific+in+vivo+bioorthogonal+ligation+with+trans-cyclooctenes.">Genetically encoded tetrazine amino acid directs rapid site-specific in vivo bioorthogonal ligation with trans-cyclooctenes.</a> J Am Chem Soc. 134, 2898-2901 (2012).</li><li>Haun, J. B., Devaraj, N. K., Marinelli, B. S., Lee, H., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+intracellular+biomarkers+and+mediators+of+cell+activation+using+nanosensors+and+bioorthogonal+chemistry.">Probing intracellular biomarkers and mediators of cell activation using nanosensors and bioorthogonal chemistry.</a> ACS Nano. 5, 3204-3213 (2011).</li><li>Budin, G., Yang, K. S., Reiner, T., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioorthogonal+probes+for+polo-like+kinase+1+imaging+and+quantification.">Bioorthogonal probes for polo-like kinase 1 imaging and quantification.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 50, 9378-9381 (2011).</li><li>Liu, D. S., Tangpeerachaikul, A., Selvaraj, R., Taylor, M. T., Fox, J. M., Ting, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diels-Alder+cycloaddition+for+fluorophore+targeting+to+specific+proteins+inside+living+cells.">Diels-Alder cycloaddition for fluorophore targeting to specific proteins inside living cells.</a> J Am Chem Soc. 134, 792-795 (2012).</li><li>Haun, J. B., Devaraj, N. K., Hilderbrand, S. A., Lee, H., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioorthogonal+chemistry+amplifies+nanoparticle+binding+and+enhances+the+sensitivity+of+cell+detection.">Bioorthogonal chemistry amplifies nanoparticle binding and enhances the sensitivity of cell detection.</a> Nat Nanotechnol. 5, 660-665 (2010).</li><li>Liong, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+pathogen+detection+using+bioorthogonal+chemistry+and+diagnostic+magnetic+resonance.">Specific pathogen detection using bioorthogonal chemistry and diagnostic magnetic resonance.</a> Bioconjug Chem. 22, 2390-2394 (2011).</li><li>Tassa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-chip+bioorthogonal+chemistry+enables+immobilization+of+in+situ+modified+nanoparticles+and+small+molecules+for+label-free+monitoring+of+protein+binding+and+reaction+kinetics.">On-chip bioorthogonal chemistry enables immobilization of in situ modified nanoparticles and small molecules for label-free monitoring of protein binding and reaction kinetics.</a> Lab Chip. 12, 3103-3110 (2012).</li><li>Pol, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+correct+protein+concentration+for+kinetics+and+affinity+determination+in+structure-function+analysis.">The importance of correct protein concentration for kinetics and affinity determination in structure-function analysis.</a> J Vis Exp. (37), e1746 (2010).</li><li>MacBeath, G., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Printing+proteins+as+microarrays+for+high-throughput+function+determination.">Printing proteins as microarrays for high-throughput function determination.</a> Science. 289, 1760-1763 (2000).</li><li>Ong, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+proteins+to+which+small-molecule+probes+and+drugs+bind+in+cells.">Identifying the proteins to which small-molecule probes and drugs bind in cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 4617-4622 (2009).</li><li>Tassa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+affinity+and+kinetic+analysis+of+targeted+small+molecule-modified+nanoparticles.">Binding affinity and kinetic analysis of targeted small molecule-modified nanoparticles.</a> Bioconjug Chem. 21, 14-19 (2010).</li><li>Weissleder, R., Kelly, K., Sun, E. Y., Shtatland, T., Josephson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+targeting+of+nanoparticles+by+multivalent+attachment+of+small+molecules.">Cell-specific targeting of nanoparticles by multivalent attachment of small molecules.</a> Nat Biotechnol. 23, 1418-1423 (2005).</li><li>Yuan, J., Oliver, R., Aguilar, M. I., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+plasmon+resonance+assay+for+chloramphenicol.">Surface plasmon resonance assay for chloramphenicol.</a> Anal Chem. 80, 8329-8333 (2008).</li><li>Myung, J. H., Gajjar, K. A., Saric, J., Eddington, D. T., Hong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrimer-mediated+multivalent+binding+for+the+enhanced+capture+of+tumor+cells.">Dendrimer-mediated multivalent binding for the enhanced capture of tumor cells.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 50, 11769-11772 (2011).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotoxicology:+nanoparticles+versus+the+placenta.">Nanotoxicology: nanoparticles versus the placenta.</a> Nat Nanotechnol. 6, 263-264 (2011).</li><li>Lundqvist, M., Stigler, J., Elia, G., Lynch, I., Cedervall, T., Dawson, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+size+and+surface+properties+determine+the+protein+corona+with+possible+implications+for+biological+impacts.">Nanoparticle size and surface properties determine the protein corona with possible implications for biological impacts.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 14265-14270 (2008).</li><li>Lundqvist, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+the+protein+corona+around+nanoparticles:+a+test+study.">The evolution of the protein corona around nanoparticles: a test study.</a> ACS Nano. 5, 7503-7509 (2011).</li><li>Mammen, M., Choi, S. -. K., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyvalent+interactions+in+biological+systems:+implications+for+design+and+use+of+multivalent+ligands+and+inhibitors.">Polyvalent interactions in biological systems: implications for design and use of multivalent ligands and inhibitors.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 37, 2754-2899 (1998).</li><li>Kausaite-Minkstimiene, A., Ramanaviciene, A., Kirlyte, J., Ramanavicius, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+random+and+oriented+antibody+immobilization+techniques+on+the+binding+capacity+of+immunosensor.">Comparative study of random and oriented antibody immobilization techniques on the binding capacity of immunosensor.</a> Anal Chem. 82, 6401-6408 (2010).</li><li>Arkin, M. R., Wells, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+protein-protein+interactions:+progressing+towards+the+dream.">Small-molecule inhibitors of protein-protein interactions: progressing towards the dream.</a> Nat Rev Drug Discov. 3, 301-317 (2004).</li><li>Giannetti, A. M., Koch, B. D., Browner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+plasmon+resonance+based+assay+for+the+detection+and+characterization+of+promiscuous+inhibitors.">Surface plasmon resonance based assay for the detection and characterization of promiscuous inhibitors.</a> J Med Chem. 51, 574-580 (2008).</li><li>Kimple, A. J., Willard, F. S., Giguere, P. M., Johnston, C. A., Mocanu, V., Siderovski, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RGS+protein+inhibitor+CCG-4986+is+a+covalent+modifier+of+the+RGS4+Galpha-interaction+face.">The RGS protein inhibitor CCG-4986 is a covalent modifier of the RGS4 Galpha-interaction face.</a> Biochim Biophys Acta. 1774, 1213-1220 (2007).</li><li>GE Healthcare. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biacore Sensor Surface Handbook BR-1005-71. , (2005).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

여기에 설명 된 캡처 - 사이클로 방법은 라벨이없는 칩 기반의 상호 작용과 운동 연구에 대한 수정 된 나노 입자와 작은 분자의 빠른 가역적 고정 할 수 있습니다. 고정화 프로토콜 &lt;저분자 리간드 10 μM 농도가 필요한 분에서 수행 될 수있다. 리간드 농도 및 접촉 시간 고정화 밀도를 변조함으로써 가깝게 제어 할 수있다. 우리의 데이타는 온칩 bioorthogonal 반응 그들의 표적과 상호 작용하는 동...

효율적인 결합 반응은 생명 공학 응용 프로그램의 다양한 표면에 생체 활성 분자를 연결하는 중요한 도구입니다. 최근 매우 빠른 bioorthogonal 트랜스 - 옥텐 (TCO) 사이 [4 +2] 고리 화 반응 및 1,2,4,5 - 테트라 (Tz 일)은 세포 표면, 세포 내 구조, 항체 및 나노 입자를 레이블로 사용 된 1. - 여기에 7, 우리는 표면 플라스 몬 공명 (SPR)의 상호 작용 분석을위한 다 성분 구조의 가역적 인 온 - 칩 합성 항원 / 항체 캡처 (GST / 안티 GST)와 함께 [4 +2] 고리 화 반응을 사용하여 모니터 실시간 프로세스 (그림 1). 새로운 분석의 다양한 리간드의 방향과 밀도를 제어 안정 센서 표면의 결과, 어셈블리로 8,9 특히, 캡처 - 사이클로 전략 수립 프로토콜을 사용하여 표면의 재생을 가능하게한다. 8 형식은 지금 가능합니다. 사용이 전략은 우리는 TCO / TZ-유도 된 작은 분자의 고정화를 설명하고 버퍼 다양한 조건에서 사이클로 속도를 특징. 우리는 직접 고정 된 GST 항원에 부착 할 때 캡처 - 사이클로 전략 목표와 상호 작용하는 작은 분자의 기능을 유지하는지 확인하기 위해 예를 들어 FKBP12 10-12 바인딩 FKBP12 및 분자 AP1497의 잘 알려진 상호 작용을 선택했다 또는 고정 된 나노 입자 공단에. 이 방법은 여러 가지 이점을 제공합니다. 첫째, 센서 칩에 작은 분자의 가역적 고정이 가능하게되었습니다. 둘째, 작은 분자의 TCO /는 TZ 고정화는 정식 SPR 연구의 방향을 반전 라벨없는 상호 작용의 연구를 가능하게하고, 결합 상호 작용의 상보적인 뷰를 제공 할 수있다. 셋째,이 방법은 대상 나노 입자의 미세 합성, 그들의 bindin의 즉각적인 평가를 가능하게G 속성. 이는 대상 입자를 평가하거나 선별 효율을 향상시키고, 또한 필요한 나노 입자의 양을 감소 약속한다. 넷째 13-15,이 방법은 연속 흐름 하에서 실시간 bioorthogonal 고리 화 반응의 반응 속도를 측정 할 수있다. 마지막으로, TCO /는 TZ 고정화 화학 혈청의 존재하에 강력하다. 이와 함께, 우리는이 다양한 접근 방식은 크게 생체 외 및 생체 내 세포의 응용 프로그램에서의 관련성과 미세 유체 연구의 다양한 안정 센서 표면의 구축을 용이하게 할 것으로 예상.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sensor Chip CM5</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR-1005-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amine coupling kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR-1000-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GST capture kit</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR-1002-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAP-10 Columns</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0854-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GST, lyophilized in 1X PBS</td>
			<td>Genscript</td>
			<td>Z02039</td>
			<td>1 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhFKBP12</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3777-FK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surfactant P-20</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR-1000-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine 2.0</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>BR-1003-55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeba spin desalting column</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>89882</td>
			<td>7 K MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>UFC810096</td>
			<td>100 K centrifugal filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCO-OH</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCO-NHS</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house, *Commercially available from Click Chemistry Tools # 1016-25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tz-BnNH2</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tz-NHS</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td>764701</td>
			<td>Synthesized in-house, *Commercially available from Sigma Aldrich # 764701</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-NH2 = CLIO-NH2</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AP1497, AP1497-Tz</td>
			<td>Ref. 8</td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPR Biosensor</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>Biacore T100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microfluidic on-chip capture-cycloaddition reaction to reversibly immobilize small molecules or multi-component structures for biosensor applications

방향과 고정 밀도 제어와 생체 활성 작은 ​​분자의 빠른 표면 고정화하는 방법은 바이오 센서 및 마이크로 어레이 응용 프로그램에 매우 바람직하다. 이 연구에서, 우리는 TCO / TZ-유도체 분자의 미세 고정을 가능하게하는 매우 효율적인 공유 bioorthogonal 트랜스 - 옥텐 (TCO) 사이 [4 +2] 고리 화 반응 및 1,2,4,5 - 테트라 (Tz 일)를 사용 . 우리는 표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 사용하여 연속적인 유동 조건에서 실시간으로 프로세스를 모니터링한다. 리버시블 고정화를 활성화 센서 표면의 실험 범위를 확장하기 위해, 우리는 고리 화 반응과 비공유 항원 항체 캡처 컴포넌트를 배합. 교대 센서 표면에 TCO 또는 Tz 일 잔기를 제시함으로써, 다 캡처-사이클로 공정은 다 성분 다양한 구조의 온 - 칩 어셈블리와 상호 작용 연구를 위해 하나의 센서면에 지금은 가능하다. 우리 나작은 분자, FK506 결합 단백질 12 (FKBP12)를 결합 AP1497, 2 개의 바이오 센서 칩에 다른 고정화 실험으로이 방법을 llustrate과 같은 작은 분자 고정화에 현장 기능화 나노 입자의 일환으로.

데이터 및 수치는 기준 8에서 적응되었습니다. 방향과 밀도 제어와 생체 활성 작은 ​​분자의 효율적인 가역 고정 새로운 바이오 센서의 응용 프로그램의 개발에 핵심적인 역할을 담당하고 있습니다. TCO와 Tz 일 사이 빠른 bioorthogonal 반응을 이용하여, 우리는 단계적 어셈블리 및 생물학적 활성의 유지와 리간드 표면의 재생을위한 방법을 설명한다. 2 TZ-BnNH이...

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Microfluidic On-chip Capture-cycloaddition Reaction to Reversibly Immobilize Small Molecules or Multi-component Structures for Biosensor Applications

우리는 순차적으로 온 - 칩 bioorthogonal 사이클로 화학 및 항체 - 항원 캡처를 사용하여 작은 분자의 빠른 가역적 고정화 및 표면 플라스 몬 공명 (SPR) 연구를위한 기능화 나노 입자 어셈블리에 대한 방법을 제시한다.

역으로 작은 분자 또는 바이오 센서 애플리케이션을위한 다중 구성 요소 구조를 무력화하는 미세 유체 온칩 캡처 - 고리 화 반응

Methods  for rapid surface immobilization of bioactive small molecules with control over  orientation and immobilization density are highly desirable for ...

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Research

JoVE Journal

Chemistry

10.7K 조회수.  Massachusetts General Hospital.  우리는 순차적으로 온 - 칩 bioorthogonal 사이클로 화학 및 항체 - 항원 캡처를 사용하여 작은 분자의 빠른 가역적 고정화 및 표면 플라스 몬 공명 (SPR) 연구를위한 기능화 나노 입자 어셈블리에 대한 방법을 제시한다. 

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