저자는 도움이 토론과 문화원 퀴리의 동물 시설에 대한 피브로넥틴, 에릭 Theveneau에 이식편의 사진을 Adeline 돌리 감사합니다. CM은 지역 일 드 프랑스 (도멘 드 Interet 죄르 장대 줄기), 대학교 파리 수드 (아타 Temporaire 디부 Enseignement 엣 드 공들인), 그리고 직원은 국립 드 라 공들인의 박사 후 동료입니다. 이 작품은 대학교 파리 수드 (Attractivite 2011), 센터 내셔널 드 라 공들인 Scientifique (액션 Thematique 등 Incitative 쉬르 프로그램), 협회 부어 라 공들인 contre 르 암 그랜트 SFI20101201882, 리그 contre 르 암과 직원은 국립 드 라에 의해 투자되었다 공들인 (직원은 국립 드 라 공들인 프로그램 블랑).

실험은 과학적 목적 및 교체, 감소 및 정제 국제적으로 확립 된 원칙에 사용되는 동물의 보호에 관한 국가와 유럽 규정을 준수합니다. 1. 피브로넥틴 코팅 요리 (14)의 준비 <ol><li> 표준 플라스틱 페트리 접시 (Ø 40 X 11mm)로 1X 인산염 완충 생리 식염수 (PBS)에 희석하여 10 ㎎ / ㎖ 문화 등급 피브로넥틴의 피펫 500 ㎖. 1 시간 동안 37 ℃에서 배양한다. 참고 : 다음 영상에 유리 그릇 또는 유리 커버 슬립을 사용하는 경우, 100 ㎎ / ㎖의 fibronectin 솔루션을 사용합니다. </li><li> 1X PBS로 3 회 씻어. </li><li> 1X PBS/0.1 %의 소 혈청 알부민 (BSA)의 500 ㎖의 PBS를 교체합니다. 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다. </li><li> 1X PBS로 3 회 씻어. </li><li> 1X PBS와 함께 입력하고 (보통 24-48 시간 동안) 사용할 때까지 4 ° C에 보관하십시오. </li></ol> 2. NC 외식 해부 &lt;올&gt; <li> 준비 3 / 4 일반 양서류 중간 (NAM) (110 mM의 NaCl을 2 ㎜의 KCl, 1 ㎜ 중 Ca (NO 3) 2, 1 ㎜ 망초, 0.1 mM의 EDTA, 1 mM의 탄산 수소 나트륨, 0.2 배 PBS, 50 ㎎ / ㎖ ) 10,15을 겐타 마이신. 4 ℃에서 해부, 저장소에 대해 1 주일 이상 보관하지 마십시오 이전 NAM은 아가 로스 코팅 해부 접시 (아래)의 제조에 사용 할 수 있습니다. </li><li> 3 / 4 NAM 2 % 아가로 오스 10 ㎖로 코팅 해부 용 60mm 페트리 접시를 준비합니다. </li><li> 해부 도구를 수집 플라스틱 파스퇴르 피펫, 최고의 곤충 핀은 핀 홀더 (참고 자료 표 참조), (유리 파스퇴르 피펫 (16)의 끝 부분에 파라핀 눈썹 머리로 만든) &quot;눈썹 칼&quot;, 두 개의 미세에 장착 해부 집게, P1000 피펫 팁, 50 배율 8-40X와 양안 입체경, 광학 섬유 가이드 밝은 조명. 모든 해부 도구를 청결하게 유지해야한다, 각 실험 후, 증류수로 2 회 위스콘신 헹구어100 % 에탄올을 토륨 건조 할 수 있습니다. 멀리 먼지 저장합니다. </li><li> 거의 정상에 신선한 NAM과 해부 접시에 기입하십시오. </li><li> X를 얻 표준 절차 (10) 그들이 (Nieuwkoop와 페이버 발달 테이블 (17)에 따라) neurula 스테이지 (16)에 도달 할 때까지를 나이에 따라 배아를 laevis의. </li><li> 16 배아 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 해부 접시에 무대를 놓습니다. </li><li> 양안 범위에서 이후의 모든 단계를 수행합니다. 포셉 두 쌍의 난황 막 제거합니다. 배아의 등 부분이 손상되지 않도록주의하십시오. </li><li> 태아가 해부를 시작하는 단계 17에 도달 할 때까지 기다립니다. 신경 문장이 명확하게 초기 단계는 대조적으로, 신경관 따로 설정되어 있기 때문에 스테이지 (17)가 적절하다. 단 17 일 후, 노스 캐롤라이나 마이그레이션 및 주변 중간 엽과 섞여서 시작합니다. </li><li> 유지하기 위해 배아에 대한 틈새 시장을 집게와 아가로 오스의 작은 구멍을 파해부 동안 그들. 하나의 배아 등의면을 위로 놓습니다. 참고 : 모델링 점토 대신 아가로 구멍을 파고 배아를 유지하는데 사용될 수있다. </li><li> 눈썹 칼과 곤충 핀 앞쪽에 신경 배의 측면 부분에 절개를합니다. 깊은 배아로도 이동하지 않도록주의 : 2 ~ 3 세포층 (! archenteron만큼 깊이에 도달하지 않음)을 극복하는 것을 목표로하고 있습니다. 전체적인 박리 과정에서 해부 조직이 X.시기 공기 - 액체 계면에 접촉 입력 할 수 없다 laevis의 배아 조직은 표면 장력에 의해 용해된다. </li><li> 신경의 추가 지느러미 부분의 제 2 평행 절개 동일한 장비를 사용하여 접어 만든다. </li><li> 필요한 경우, 90 °의 주위에 요리를 켭니다. 처음 두 절개의 후방 측에, 눈썹 칼과 곤충 핀 세 번째 수직 절개를합니다. NC는 측면, 외배엽의 색소 외부 층 아래 세포의 두꺼운 질량신경 튜브에. </li><li> 세 번째 절개의 가장자리에서 시작하여 기본 NC에서 색소 외배엽 층을 분리 눈썹 칼의 끝 부분을 사용합니다. </li><li> 세 번째 절개로 시작하는 NC 조직을 분리 눈썹 칼의면을 사용합니다. 기본 두부 중배엽 흰 동안 NC 조직이 아니라 회색이다. 조심스럽게 중배엽에서 NC를 구분합니다. </li><li> 광학 소포에서 전방으로 NC 조직을 분리하고, 이식편을 무료로이 수준에서 잘라. 현장 하이브리드 화에 의해 일부 외식에 snail2 식 (정식 NC 마커)를 검사하는 첫 번째 실험에 대한 제어로 추천합니다. </li></ol> 3. 피브로넥틴에 도금의 Explants <ol><li> 강제로 피브로넥틴 코팅 접시 수정 Danilchick 중간 (MDM, 염화나트륨 53 밀리미터, Na2CO 5 mm의 K 글루 콘 산염 4.5 mm의 나 글루 콘 산염 32 밀리미터, 망초 1 ㎜, 염화칼슘 1 ㎜, BSA 0.1 %로, 산도를 조정 1 M Bicine 8.3에 <sup&gt; 18). </li><li> P1000 피펫을 사용하여 피브로넥틴 - 코팅 접시에 외식을 전송합니다. 외식 공기 - 액체 인터페이스를 터치 할 수 있도록하지 마십시오. 먼저, 다음 몇 가지 액체를 다시 외식 후, 끝으로 몇 가지 액체를 피펫. 피브로넥틴 - 코팅 접시에 외식을 전송하는 동안 끝으로 모든 공기를 허용하지 않습니다. 끝이 피브로넥틴 코팅 접시의 액체 내부되면, 외식 천천히 중력에 의해 아래로 가자, 또는 매우 조심스럽게 밀어 넣습니다. 너무 빨리 외식를 배출하지 마십시오. </li><li> 눈썹 칼을 사용하여 접시에 10-30 외식을 놓습니다. 다음 영상에 적합하지 않은 접시의 측면을, 피. </li><li> 외식이 (대략 15 ~ 30 분 소요) 피브로넥틴에 부착 할 때까지 요리를 움직이지 않도록하십시오. 필요한 경우, 아주 조심스럽게 접시를 이동합니다. </li><li> (온도 차트는 17 참조 15 ~ 20 ° C의 사이) 냉장 인큐베이터에서 접시를 놓습니다. 15 ° C에 배치하면, 세포가 아칸소전자 일반적으로 효율적으로 마이그레이션 및 배양 6 시간 후에 산란 (이 타이밍 실험 사이에 차이가있을 수 있습니다). </li></ol> 4. 호스트 태아로의 Explants를 접목 <ol><li> 거친 집게를 사용하여 매우 작은 조각으로 미세 유리 커버 슬립을 잘라. 조각의 크기는 약 1.5 mm 2 있어야합니다. 집게를 사용하여 3 / 4 NAM 또는 PBS를 함유하는 페트리 접시로 매 담금. </li><li> 호스트 배아의 제조 : 난황 막 제거하고 NC 해부 동안 호스트 배아를 손상시키지 않도록 특별히주의) 3의 설명에 따라 3 / 4 NAM에 호스트 NC를 해부. 도너 배아 해부 동안 호스트 배아 부분적으로 치유하자 : 티슈 장력 절제의 크기를 증가시키는 경향이있다. </li><li> 프로토콜 3에 설명 된대로 다른 아가 로스 코팅 접시 또는 동일한 접시의 다른 부분에서 도너 배아로부터 NC 이식편을 해부. 의 설명에 따라주의하여 호스트를 포함하는 접시에 NC 이식을 전송프로토콜 3. </li><li> 즉시 집게를 사용하여 호스트 절제 영역에 NC 이식편을 배치합니다. 이식편 부분적으로 연결해야합니다. 장소에 이식을 유지하기 위해 이식 배아에 유리 커버 슬립의 조각을 넣어. 그것은 손상을 방지하기 위해 배아보다 큰 유리 조각을 선택합니다. 배아는 평평 조금있을 것입니다. </li><li> 적어도 15 ~ 20 분 동안 기다린 후 부드럽게 커버 슬립을 제거합니다. 배아가 다른 10 분 동안 복구 할 수 조심스럽게 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여, 3 / 4 NAM 가득 깨끗한 접시에 피펫. </li></ol>

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	<li>Sauka-Spengler, T., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+regulatory+network+orchestrates+neural+crest+formation.">A gene regulatory network orchestrates neural crest formation.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9 (7), 557-568 (2008).</li><li>Theveneau, E., Mayor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+delamination+and+migration:+from+epithelium-to-mesenchyme+transition+to+collective+cell+migration.">Neural crest delamination and migration: from epithelium-to-mesenchyme transition to collective cell migration.</a> Dev. Biol. 366 (1), 34-54 (2012).</li><li>Stuhlmiller, T. J., Garc&#237;a-Castro, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+perspectives+of+the+signaling+pathways+directing+neural+crest+induction.">Current perspectives of the signaling pathways directing neural crest induction.</a> Cell. Mol. Life Sci. 69 (22), 3715-3737 (2012).</li><li>Milet, C., Monsoro-Burq, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+induction+at+the+neural+plate+border+in+vertebrates.">Neural crest induction at the neural plate border in vertebrates.</a> Dev. Biol. 366 (1), 22-33 (2012).</li><li>Pegoraro, C., Monsoro-Burq, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+and+transcriptional+regulation+in+neural+crest+specification+and+migration:+lessons+from+Xenopus+embryos.">Signaling and transcriptional regulation in neural crest specification and migration: lessons from Xenopus embryos.</a> Dev. Biol. 2 (2), 247-259 (2013).</li><li>Etchevers, H. C., Amiel, J., Lyonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Bases+of+Human+Neurocristopathies.">Molecular Bases of Human Neurocristopathies.</a> Neural Crest Induct. Different. 589, 213-234 (2005).</li><li>Nieuwkoop, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+and+organization+of+the+central+nervous+system+in+amphibians.+Part+II.+Differentiation+and+organization.">Activation and organization of the central nervous system in amphibians. Part II. Differentiation and organization.</a> J. Exp. Zool. 120 (1), 33-81 (1952).</li><li>Nieuwkoop, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+and+organization+of+the+central+nervous+system+in+amphibians+Part+I.+Induction+and+activation.">Activation and organization of the central nervous system in amphibians Part I. Induction and activation.</a> J. Exp. Zool. 120 (1), 1-31 (1952).</li><li>Sharpe, C. R., Fritz, A., De Robertis, E. M., Gurdon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+homeobox-containing+marker+of+posterior+neural+differentiation+shows+the+importance+of+predetermination+in+neural+induction.">A homeobox-containing marker of posterior neural differentiation shows the importance of predetermination in neural induction.</a> Cell. 50 (5), 749-758 (1987).</li><li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Early development of Xenopus laevis: a laboratory manual. , (2000).</li><li>Monsoro-Burq, A. -. H., Fletcher, R. B., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+induction+by+paraxial+mesoderm+in+Xenopus+embryos+requires+FGF+signals.">Neural crest induction by paraxial mesoderm in Xenopus embryos requires FGF signals.</a> Development. 130 (14), 3111-3124 (2003).</li><li>Milet, C., Maczkowiak, F., Roche, D. D., Monsoro-Burq, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax3+and+Zic1+drive+induction+and+differentiation+of+multipotent,+migratory,+and+functional+neural+crest+in+Xenopus+embryos.">Pax3 and Zic1 drive induction and differentiation of multipotent, migratory, and functional neural crest in Xenopus embryos.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110 (14), 5528-5533 (2013).</li><li>Sadaghiani, B., Thi&#233;baud, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+development+in+the+Xenopus+laevis+embryo,+studied+by+interspecific+transplantation+and+scanning+electron+microscopy.">Neural crest development in the Xenopus laevis embryo, studied by interspecific transplantation and scanning electron microscopy.</a> Dev. Biol. 124 (1), 91-110 (1987).</li><li>Theveneau, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+chemotaxis+requires+contact-dependent+cell+polarity.">Collective chemotaxis requires contact-dependent cell polarity.</a> Dev. Cell. 19 (1), 39-53 (2010).</li><li>Slack, J. M., Forman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interaction+between+dorsal+and+ventral+regions+of+the+marginal+zone+in+early+amphibian+embryos.">An interaction between dorsal and ventral regions of the marginal zone in early amphibian embryos.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 56, 283-299 (1980).</li><li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+dissection+and+micromanipulation+tools.">Embryo dissection and micromanipulation tools.</a> CSH Protoc. , (2007).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+Xenopus+laevis+(Daudin):+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis.">Normal table of Xenopus laevis (Daudin): a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis.</a> , (1994).</li><li>Theveneau, E., Mayor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beads+on+the+run:+beads+as+alternative+tools+for+chemotaxis+assays.">Beads on the run: beads as alternative tools for chemotaxis assays.</a> Methods Mol. Biol. 769, 449-460 (2011).</li><li>Bronner, M. E., LeDouarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evolution+of+the+neural+crest:+An+overview.">Development and evolution of the neural crest: An overview.</a> Dev. Biol. 366 (1), 2-9 (2012).</li><li>Alfandari, D., Cousin, H., Gaultier, A., Hoffstrom, B. G., DeSimone, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin+&#945;5&#946;1+supports+the+migration+of+Xenopus+cranial+neural+crest+on+fibronectin.">Integrin &#945;5&#946;1 supports the migration of Xenopus cranial neural crest on fibronectin.</a> Dev. Biol. 260 (2), 449-464 (2003).</li><li>Fort, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+the+RhoU/Wrch1+GTPase+is+critical+for+cranial+neural+crest+cell+migration.">Activity of the RhoU/Wrch1 GTPase is critical for cranial neural crest cell migration.</a> Dev. Biol. 350 (2), 451-463 (2011).</li><li>Matthews, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+migration+of+neural+crest+cells+in+vivo+is+regulated+by+Syndecan-4/Rac1+and+non-canonical+Wnt+signaling/RhoA.">Directional migration of neural crest cells in vivo is regulated by Syndecan-4/Rac1 and non-canonical Wnt signaling/RhoA.</a> Development. 135 (10), 1771-1780 (2008).</li><li>Kashef, J., K&#246;hler, A., Kuriyama, S., Alfandari, D., Mayor, R., Wedlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-11+regulates+protrusive+activity+in+Xenopus+cranial+neural+crest+cells+upstream+of+Trio+and+the+small+GTPases.">Cadherin-11 regulates protrusive activity in Xenopus cranial neural crest cells upstream of Trio and the small GTPases.</a> Genes Dev. 23 (12), 1393-1398 (2009).</li><li>Hwang, Y. -. S., Luo, T., Xu, Y., Sargent, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin-X+is+required+for+cranial+neural+crest+cell+migration+in+Xenopus+laevis.">Myosin-X is required for cranial neural crest cell migration in Xenopus laevis.</a> Dev. Dyn. 238 (10), 2522-2529 (2009).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+pathogenesis+and+treatment+of+familial+dysautonomia+using+patient-specific+iPSCs.">Modelling pathogenesis and treatment of familial dysautonomia using patient-specific iPSCs.</a> Nature. 461 (7262), 402-406 (2009).</li><li>Mica, Y., Lee, G., Chambers, S. M., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Neural+Crest+Induction,+Melanocyte+Specification,+and+Disease-Related+Pigmentation+Defects+in+hESCs+and+Patient-Specific+iPSCs..">Modeling Neural Crest Induction, Melanocyte Specification, and Disease-Related Pigmentation Defects in hESCs and Patient-Specific iPSCs..</a> Cell Reports. 3 (4), 1140-1152 (2013).</li><li>Shnitsar, I., Borchers, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTK7+recruits+dsh+to+regulate+neural+crest+migration.">PTK7 recruits dsh to regulate neural crest migration.</a> Development. 135 (24), 4015-4024 (2008).</li><li>Matthews, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+migration+of+neural+crest+cells+in+vivo+is+regulated+by+Syndecan-4/Rac1+and+non-canonical+Wnt+signaling/RhoA.">Directional migration of neural crest cells in vivo is regulated by Syndecan-4/Rac1 and non-canonical Wnt signaling/RhoA.</a> Development. 135 (10), 1771-1780 (2008).</li><li>Matthews, H. K., Broders-Bondon, F., Thiery, J. P., Mayor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt11r+is+required+for+cranial+neural+crest+migration.">Wnt11r is required for cranial neural crest migration.</a> Dev. Dyn. 237 (11), 3404-3409 (2008).</li><li>Carmona-Fontaine, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contact+inhibition+of+locomotion+in+vivo+controls+neural+crest+directional+migration.">Contact inhibition of locomotion in vivo controls neural crest directional migration.</a> Nature. 456 (7224), 957-961 (2008).</li><li>Guiral, E. C., Faas, L., Pownall, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+migration+requires+the+activity+of+the+extracellular+sulphatases+XtSulf1+and+XtSulf2.">Neural crest migration requires the activity of the extracellular sulphatases XtSulf1 and XtSulf2.</a> Dev. Biol. 341 (2), 375-388 (2010).</li><li>Cousin, H., Abbruzzese, G., Kerdavid, E., Gaultier, A., Alfandari, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translocation+of+the+Cytoplasmic+Domain+of+ADAM13+to+the+Nucleus+Is+Essential+for+Calpain8-a+Expression+and+Cranial+Neural+Crest+Cell+Migration.">Translocation of the Cytoplasmic Domain of ADAM13 to the Nucleus Is Essential for Calpain8-a Expression and Cranial Neural Crest Cell Migration.</a> Dev. Cell. 20 (2), 256-263 (2011).</li><li>Borchers, A., David, R., Wedlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+cadherin-11+restrains+cranial+neural+crest+migration+and+influences+neural+crest+specification.">Xenopus cadherin-11 restrains cranial neural crest migration and influences neural crest specification.</a> Development. 128 (16), 3049-3060 (2001).</li><li>Borchers, A., Epperlein, H. -. H., Wedlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+system+to+study+migratory+behavior+of+cranial+neural+crest+cells+in+Xenopus.">An assay system to study migratory behavior of cranial neural crest cells in Xenopus.</a> Dev. Genes Evol. 210 (4), 217-222 (2000).</li><li>Kerney, R., Gross, J. B., Hanken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx2+is+essential+for+larval+hyobranchial+cartilage+formation+in+Xenopus+laevis.">Runx2 is essential for larval hyobranchial cartilage formation in Xenopus laevis.</a> Dev. Dyn. 236 (6), 1650-1662 (2007).</li><li>Yan, C. Y. I., Skourides, P., Chang, C., Samba Brivanlou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Xenopus+hnRNP+expressed+in+neural+and+neural+crest+tissues.">a Xenopus hnRNP expressed in neural and neural crest tissues.</a> Dev. Dyn. 238 (1), 204-209 (2009).</li><li>Acloque, H., Adams, M. S., Fishwick, K., Bronner-Fraser, M., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+transitions:+the+importance+of+changing+cell+state+in+development+and+disease.">Epithelial-mesenchymal transitions: the importance of changing cell state in development and disease.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1438-1449 (2009).</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

이 프로토콜은 X를 laevis의 태아에 premigratory 두개골 NC를 이식편하는 쉬운 방법을 설명합니다. 이러한 실험에 사용 된 배아는 견고하고 잘 치료해야합니다. 건강에 해로운 배아의 배치를 폐기하십시오. 또한, 그리고 나중에 17에 신경 능선을 절제하기 위해, (12 18 ~ 20 ° C)에서 다양한 온도에서 배아를 성장. 단 17 일 후, 신경 문장은 두개의 중배엽과 혼합 될 수 있으며 완전히 제거 할 수 없습?...

신경 능선 (NC)는 척추 동물의 배아에서 neurulation의 끝 부분에 신경 튜브에서 나온다 과도 배아 세포 집단이다. NC 사양을 제어하는​​ 신호 유전 이벤트는 초기 낭 배기로 시작합니다. NC는 주변 등의 조직으로부터의 신호에 의해 신경과 비 신경 외배엽의 경계에 지정됩니다. neurulation의 끝에서, NC 세포는 상피 - 투 - 중간 엽 전이 (EMT)를 거쳐 안내 신호를 주변에 응답하여 틀에 박힌 경로 다음 배아에서 광범위하게 마이그레이션 할 수 있습니다. 그들의 최종 목적지에 도달하면, 그들은 파생 상품, 예를 들면 신경 세포, 아교, 뼈, 연골, 그리고 색소 세포 1-5의 광대 한 배열로 분화. 때문에 많은 종류의 세포와 배아 조직, NC 세포 개발의 모든 단계에서의 결함, 유도에서 최종 분화에 기여으로, neurocristopathies 6이라는 선천성 증후군의 원인이 될 수 있습니다. E사양, EMT, 이주 및 분화 - - 다른 단계에서 개발하고 NC의 xperimental 조작 neurocristopathies에 대한 우리의 이해를 개선하고 잠재적 인 치료 전략의 디자인을 허용합니다. 는 Xenopus laevis의 배아는 NC의 개발을 연구하는 선택의 모델입니다. 배아의 큰 숫자는 쉽게 구할 수 있고, 외부 수정 개발의 첫 번째 단계에 액세스 할 수 있습니다. 많은 도구를 실험적으로 X를 조작 할 수 있습니다 배아 발달을 laevis의. 이득의 기능과 최저 유전자는 초기 blastulas의 개별 세포를 미세 주입에 의해 수행하기 쉽다. 배아 조직을 체외 재 연결 7-11 또는 백 접목 분석 (12, 13)에 절단 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 X에서 premigratory 두개골 NC를 해부하는 방법에 대해 설명합니다 이주 전에 후반 neurulas을 laevis의. 이러한 외식은 피브로넥틴 도금 파이프에 배양 할 수있다의 이동과 분화를 연구하는 D 판은 체외 실험 조건에서 제어. NC 외식은 생체 내에서 자신의 이동과 분화를 연구하는 정상 또는 조작 호스트 배아에 이식 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="601">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:244px;">Fibronectin from bovine plasma</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F4759-1MG</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:244px;">Bovine Serum Albumine. Fraction V</td>
			<td style="width:71px;">Euromedex</td>
			<td style="width:119px;">04-100-811-C</td>
			<td>Lower quality grade may&#160; be suitable for this application</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Stainless Steel Insect Pins. Size 000</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td align="right" style="width:119px;">26001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:244px;">Dumont #5 forceps 0.05 mm x 0.02 mm</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of xenopus laevis neural crest for in vitro explant culture or in vivo transplantation

신경 능선 (NC)이 neurulation의 끝에서 상피 - 투 - 중간 엽 전이 (EMT)를 거쳐 임시 지느러미 신경 튜브의 세포 집단이다, 다양한 기관으로 광범위하게 마이그레이션 및 파생 상품의 많은 종류의 (신경 교세포로 분화 연골과 뼈, 색소 및 내분비 세포). 이 프로토콜에서는, 우리는 생체 내 및 시험 관내에서 NC의 개발을 연구하기 위하여는 Xenopus laevis의 태아에서 premigratory 두개골 NC를 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 개구리 모델은 초기 개발을 연구하는 많은 장점을 제공하고, 풍부한 일괄 배아 생체 이득과 기능 전략의 손실 전에 기증자 및 / 또는 호스트 배아에서 NC의 해부 유전자 발현의 조작을 허용, 신속하게 개발, 사용할 수 있습니다. NC 이식편은 피브로넥틴에 도금 및 시험 관내 연구를 위해 사용될 수있다. 이들은 무 혈청 한정 배지에서 몇 일 동안 배양 될 수있다. 우리는 또한 NC 외식을 다시 이식하는 방법에 대해 설명합니다생체 내에서 NC의 이동과 분화를 연구하는 호스트 배아에.

피브로넥틴에 도금 할 때, 신경 능선 외식 신속하게 (15 ~ 30 분)을 첨부하여 이식편은 2 시간 (그림 1A)에서 플랫 퍼집니다. 3-6 시간의 세포가 흩어 시작하면. 15 ° C에서 24 시간, 많은 세포가 떨어져 이식편 (그림 1B 및 1C)에서 이주하기 시작했다. 노른자는 위상차 (그림 1B)에서 세포가 매우 밝은 있습니다. 세포 돌기 (filopodes 및 lamellipodes)은 액틴 세포...

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Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

이 프로토콜은는 Xenopus laevis의의 neurulas에서 premigratory 두개골 신경 능선 (NC)를 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 이러한 외식은 피브로넥틴 및 체외 배양에 도금, 또는 다시 호스트 배아에 이식 할 수 있습니다. 이 기술은 NC 상피 - 투 - 중간 엽 이행, 이주 및 분화의 메커니즘을 연구 할 수 있습니다.

의 해부<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 신경 크레스트<em&gt; 시험관</em&gt; 이식편 문화 또는<em&gt; 생체</em&gt; 이식

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

dissection-xenopus-laevis-neural-crest-for-vitro-explant-culture-or

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

13.1K 조회수.  Centre Universitaire.  이 프로토콜은는 Xenopus laevis의의 neurulas에서 premigratory 두개골 신경 능선 (NC)를 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 이러한 외식은 피브로넥틴 및 체외 배양에 도금, 또는 다시 호스트 배아에 이식 할 수 있습니다. 이 기술은 NC 상피 - 투 - 중간 엽 이행, 이주 및 분화의 메커니즘을 연구 할 수 있습니다. 

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Dissection of Organizer and Animal Pole Explants from Xenopus laevis Embryos and Assembly of a Cell Adhesion Assay

This video demonstrates the technique used for preparation of organizer and animal pole explants from Xenopus laevis embryos, including the use of the eyebrow knife - a specialized dissection tool made of one's eyebrow. The protocol for assembling an adhesion assay is also given, which probes for the presence of key adhesion molecules present on the surface organizer or animal pole cells that are critical for proper development.

주최자 및 동물 폴 Explants Xenopus laevis의 태아로부터 세포 접착 분석의 총회의 해부

연구

생물학

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic sections maintain true tissue morphology in thin sections of tissue that can be immunostained with fluorescent secondary antibodies, making this method more useful than paraffin-embedded or frozen sections for many types of tissue. The method for staining, plastic embedding, and sectioning is demonstrated in this video.

플라스틱 삽입 및 Xenopus laevis의 태아의 Sectioning

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

Xenopus laevis 여성의 난자를 구하기

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic transport. Because of its large nucleus and high density of nuclear pore complexes (NPCs), nuclear transport can be easily visualized in the Xenopus oocyte. Much insight into the mechanisms of nuclear import and export has been gained through use of this system (reviewed by Pant&eacute;, 2006). In addition, we have used microinjection of Xenopus oocytes to dissect the nuclear import pathways of several viruses that replicate in the host nucleus. 
Here we demonstrate the cytoplasmic microinjection of Xenopus oocytes with a nuclear import substrate. We also show preparation of the injected oocytes for visualization by thin-sectioning EM, including dissection, dehydration, and embedding of the oocytes into an epoxy embedding resin. Finally, we provide representative results for oocytes that have been microinjected with the capsid of the baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) or the parvovirus Minute Virus of Mice (MVM), and discuss potential applications of the technique.

Here we demonstrate cytoplasmic microinjection of Xenopus laevis oocytes with a nuclear import substrate, as well as preparation of the injected oocytes for visualization by thin-sectioning electron microscopy.

Xenopus Laevis의 Oocytes의 Microinjection

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development of a larger region of the embryo. This makes defining its role in a particular tissue difficult to analyze. For example, noggin overexpression in Xenopus laevis embryos causes the expansion of the entire anterior region, including the eye1,2. From this result, it is not known if Noggin plays a direct role in eye determination or that by causing an expansion of neural tissue, Noggin indirectly affects eye formation. Having this complex phenotype makes studying its eye-specific role in cell fate determination difficult to analyze. We have developed an assay that overcomes this problem. Taking advantage of the pluripotent nature of the Xenopus laevis animal cap 3, we have developed an assay to test the ability of gene product(s), like noggin or the eye field transcription factors (EFTFs), to transform caps into particular tissue or cell types by transplanting this tissue onto the side of the embryo 4. While we have found either Noggin protein treatment or a collection of transcription factors can determine retinal cell fate in animal caps, this procedure could be used to identify gene product(s) involved in specifying other tissues as well.

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Animal caps overexpressing gene product(s) are transplanted to the flank of developing Xenopus laevis embryos in order to establish whether tissue is determined.

에있는 동물 캡 이식 (ACT) 어세를 사용하여 조직 결정 Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Production of Transgenic Xenopus laevis by Restriction Enzyme Mediated Integration and Nuclear Transplantation

Stable integration of cloned gene products into the Xenopus genome is necessary to control the time and place of expression, to express genes at later stages of embryonic development, and to define how enhancers and promoters regulate gene expression within the embryo. The protocol demonstrated here can be used to efficiently produce transgenic Xenopus laevis embryos. This transgenesis approach involves three parts: 1. Sperm nuclei are isolated from adult X. laevis testis by treatment with lysolecithin, which permeabilizes the sperm plasma membrane. 2. Egg extract is prepared by low speed centrifugation, addition of calcium to cause the extract to progress to interphase of the cell cycle, and a high-speed centrifugation to isolate interphase cytosol. 3. Nuclear transplantation: the nuclei and extract are combined with the linearized plasmid DNA to be introduced as the transgene and a small amount of restriction enzyme. During a short reaction, egg extract partially decondenses the sperm chromatin and the restriction enzyme generates chromosomal breaks that promote recombination of the transgene into the genome. The treated sperm nuclei are then transplanted into unfertilized eggs. Integration of the transgene usually occurs prior to the first embryonic cleavage such that the resulting embryos are not chimeric. These embryos can be analyzed without any need to breed to the next generation, allowing for efficient and rapid generation of transgenic embryos for analyses of promoter and gene function. Adult X. laevis resulting from this procedure also propagate the transgene through the germline and can be used to generate lines of transgenic animals for multiple purposes.

Production of Transgenic Xenopus laevis by Restriction Enzyme Mediated Integration and Nuclear Transplantation

This video protocol demonstrates a method for generating transgenic Xenopus laevis by introduction of transgenes into sperm nuclei followed by nuclear transplantation into unfertilized eggs.

트렌스 제닉 생산 Xenopus laevis 제한 효소 중재 통합 및 핵 이식에 의해

Stable integration of cloned gene products into the Xenopus genome is necessary to control the time and place of expression, to express genes at later ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may also be used to study the structure-function relationship for other ion channels and neurotransmitter receptors1. BK channels are widely expressed in different tissues and have been implicated in many physiological functions, including regulation of smooth muscle contraction, frequency tuning of inner hair cells and regulation of neurotransmitter release2-6. BK channels are activated by membrane depolarization and by intracellular Ca2+ and Mg2+ 6-9. Therefore, the protocol is designed to control both the membrane voltage and the intracellular solution. In this protocol, messenger RNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes (stage V-VI) followed by 2-5 days of incubation at 18&deg;C10-13. Membrane patches that contain single or multiple BK channels are excised with the inside-out configuration using patch clamp techniques10-13. The intracellular side of the patch is perfused with desired solutions during recording so that the channel activation under different conditions can be examined. To summarize, the mRNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes to express channel proteins on the oocyte membrane; patch clamp techniques are used to record currents flowing through the channels under controlled voltage and intracellular solutions.

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Ionic current of BK channels is recorded using patch clamp techniques. BK channels are expressed in Xenopus oocytes by injecting messenger RNA. The intracellular solution during patch clamp recordings is controlled by a perfusion system.

이온 채널 유학을위한 패치 클램프 및 재관류 기법으로 표현 Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. To identify where signaling pathways and tissues act during patterning of the developing face, a 'face transplant' technique has been developed in embryos of the frog Xenopus laevis. A region of presumptive facial tissue (the "Extreme Anterior Domain" (EAD)) is removed from a donor embryo at tailbud stage, and transplanted to a host embryo of the same stage, from which the equivalent region has been removed. This can be used to generate a chimeric face where the host or donor tissue has a loss or gain of function in a gene, and/or includes a lineage label. After healing, the outcome of development is monitored, and indicates roles of the signaling pathway within the donor or surrounding host tissues. Xenopus is a valuable model for face development, as the facial region is large and readily accessible for micromanipulation. Many embryos can be assayed, over a short time period since development occurs rapidly. Findings in the frog are relevant to human development, since craniofacial processes appear conserved between Xenopus and mammals.

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

A technique for transplanting "Extreme Anterior Domain" facial tissue between Xenopus laevis embryos has been developed. Tissue can be moved from one gene expression background into another, allowing the study of local requirements for craniofacial development and for signaling interactions between facial regions.

의 얼굴 이식<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 태아

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental biologist. For many organs it is difficult to access developing tissue to allow monitoring during ex vivo culture. The slice culture method allows access to tissue so that morphogenetic movements can be followed and specific cell populations can be targeted for manipulation or lineage tracing.
In this paper we describe a method of slice culture that has been very successful for culture of tooth germs in a range of species. The method provides excellent access to the tooth germs, which develop at a similar rate to that observed in vivo, surrounded by the other jaw tissues. This allows tissue interactions between the tooth and surrounding tissue to be monitored. Although this paper concentrates on tooth germs, the same protocol can be applied to follow development of a number of other organs, such as salivary glands, Meckel&#39;s cartilage, nasal glands, tongue, and ear.

Here we detail a method to culture tooth germs in mandible slices using a tissue chopper. This method allows unique access to the tooth during development, providing excellent opportunity for manipulation and lineage tracing, not available using more traditional culture methods.