The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore's lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

참고 :이 프로토콜은 준비 (섹션 1-3) 설명, 실행 (4 절), 및 분석 2-D의 물림 분석 (제 4). 그런 다음, 예를 들어 도파민 자극을 사용하여, 5 장에서는 성욕 과다증을 유발하는 2-D의 물림 분석과 thermogenetic 자극을 결합하는 방법을 보여줍니다. 제 6 절은 2-D의 물림 분석의 결과를 확인하는 3 가지 방법을 설명합니다. 마지막으로, 제 7 남성 파리 짝짓기 드라이브의 복구를 측정하는 방법을 보여줍니다. 1. 8 비트 및 32 실 행동 아레나스의 제조 참고 : 각 행동 경기장은 네 모서리 (그림 1A)의 각각 육각 나사와 엄지 손가락 너트에 의해 함께 개최 레이저 절단 플라스틱 시트의 여러 레이어로 구성되어 있습니다. <ol><li> 경기장의 층을 제조. 적절한 형상 아크릴 플라스틱 시트를 절단하는 레이저 커터를 사용하여, 각 층의 제작 (도 1B, 1C 제품 참조). 참고 : 많은 연구 institutioNS는 기계 상점 또는 메이커 공간에서 레이저 절단기가 있습니다. 기관은 레이저 커터에 액세스 할 수있는 경우 다음 단계를 계속합니다. 그렇지 않다면, 대신 단계 1.2의 지침을 따르십시오. <ol><li> 각각의 층에, 레이저 절단기의 소프트웨어의 설계 패턴을 연다. 주 : 설계 적절히 명명 된 PDF 파일을 찾을 수있다 (예를 들면, 8 챔버 아레나 - 계층 2 - Doors.pdf) 보충 자료 1이 파일은 또한 플라스틱의 종류에 대한 주석을 포함에서 사용되는 (예를 들면, 1 / 8 인치 (즉, 3.175 mm) 명확한 아크릴). 각 층의 정확한 두께는 중요하지 않다. 주요 요구 사항은 챔버에서 0.12 인치 (3mm) 또는 무료 수직 공간을 더 허용하는 것입니다. </li><li> 종류 및 플라스틱 두께 레이저 설정 (전력, 포커스 등)를 조정하는 데 사용된다. 레이저 커터 침대에서 플라스틱을 놓고 레이저 커터를 실행합니다. 참고 :이 설정은 널리 레이저 절단기에에 따라 달라집니다R 모델 및 레이저의 강도. 과거의 경험 또는 스크랩 플라스틱에 테스트 인하함으로써 기반 적절한 설정을 찾을 수 있습니다. 깊은 육각형 조각은 육각 나사 머리를 휴회 할 수있는 디자인에 포함되어 있습니다. 이 기능은 엄지 손가락 너트의 한 손으로 긴축을 허용하고 경기장이 (나사 머리를 돌출하지 않고) 벤치에 평평하게 휴식 할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 깊은 조각을 종종 달성하기 어려운, 시간 소모적 레이저 커터를 사용하는 것이다. 이 단계는 선택적이며, 행동의 결과에 영향을 미치지 않고 생략 될 수있다. </li><li> 도어 프레임 (층 (2)도 1a)를 절단하면도 (도 1b,도 1c에서와 같이) 디자인에 포함 된 챔버 번호를 새기는 적절한 레이저 설정을 사용한다. </li></ol></li><li> 온라인 레이저 커팅 제작자와 주문을. 재료 유형을 8 비트 및 / 또는 32 실 경기장에 대한 모든 PDF 디자인 파일을 업로드하고 지정 (예를 들어, 1/8 인치 (즉, 3.175 mm) 클레아파일에 주석을 기반으로 R 아크릴). 결과는도 1B (8 실 경기장) 및 1C (32 실 경기장)에서와 같이 표시됩니다. </li><li> 정렬과 함께 플라스틱 층 (그림 1A)를 보유하는 네 개의 육각 나사와 네 손가락 너트를 사용하여 경기장을 조립합니다. 경기장은 그림 1D, 1E (8 실) 그림 1 층, 1G (32 실)과 같이 표시됩니다. 주 : (도 1a의 계층 4) 식품 벽은 단지 2-D 포만 분석에 사용되며 구애 분석에 사용되는 32- 챔버 경기장에서 생략된다. </li></ol> 2-D 포만 분석 2. 음식 준비 주 : 2-D의 물림 분석은 4.5 시간에 걸쳐 있기 때문에, 식품 영양과 물을 제공하기 위해 경기장에 사용되는 비행. 이 프로토콜을 이용하지만, 종래의 옥수수 가루 한천 음식 플라이에 한정되지 않는다. <ol><li> 부분적으로 레이어와 2-D의 물림 분야 (8 실)를 조립 3-6(계층 할당에 대한 그림 1A 참조) 엄지 손가락 너트와 육각 나사를 조입니다. </li><li> 깨끗하고 전자 레인지 용 병에 신선한 플라이 음식을 놓습니다. 병 (그림 2A)의 바닥면을 충당하기 위해 충분한 물을 추가합니다. </li><li> 45 초 - 30 고에 전자 레인지 음식. 진행 상황을 확인하고 (그림 2B) 용해 될 때까지 매 15 초 교반한다. 주의! 플라이 음식은 쉽게 이상 종기. </li><li> 천천히 mL의 각 챔버 (그림 2D)에 음식을 용융 1 ~ 전송할 둔화 1,000 μL 피펫 팁 (그림 2C)를 사용합니다. </li><li> 음식이 완전히 경기장 (그림 2 층)을 조립하기 전에 10 분 (그림 2E) ~ 4 ° C에서 재고 화 할 수 있습니다. </li><li> 4 ° C에서 완성 된 실험 무대 (제 4 장 참조) 또는 저장소를 사용합니다. </li><li> 4 ° C와 재사용에 남은 음식을 저장합니다. </li></ol> 3. 행동 분석 실험에 대해 버진 여성을 준비 참고 : - 표준 방법을 사용하여 수집하기 어려운 (전체 행동 경기장 160 ~ 120) 2-D 물림의 분석은 처녀 여성 파리의 큰 숫자를 사용합니다. 이 섹션에서는 구애 분석 (25), (29)에 성공적으로 사용 된 Y 염색체 28에 HS-HID 형질 전환 유전자를 사용하여 다른 방법을 설명합니다. 흰 눈 처녀 암컷을 생성하는 데 사용되는 주식은 유전자형 w1118 (X) / HS-HID (Y)가 + / +, + / + (블루밍턴 재고 번호 24638). <ol><li> 플립 번 20 새로운 병에 파리 - 번데기의 50 %가 eclosed있다 (예를 들어,도 3a 참조) 충분히 남성 (5-10)가 주식을 전파은. </li><li> 열은 충분히 (그림 3B)을 남성을 죽일 HS-HID를 활성화 1 시간을위한 37 ° C 뜨거운 물을 욕조에 원래의 병을 충격. 열 쇼크 후 여성 만이 병에서 eclose하고 있으므로까지 버진 남아분석. 참고 : (물 라인도 3a 참조) 병의 모든면이 균일하게 가열되어 있는지 확인합니다. 1 시간 모든 남성을 안락사하기에 충분하지 않은 경우 최대 2 시간 동안이 시간을 연장합니다. </li><li> 그들은 25, 29 성적으로 받아 들일 수있는 나이 있는지 확인하기 위해 실험을하기 전에 적어도 3 일 동안 수집 된 여성을 격리 할 것. 참고 : Y 염색체가없는 남성은 때때로이 주식에서 발생한다. 이 수컷 흰 눈이 그들이 HS-HID 유전자를 포함하지 않기 때문에 열충격에 의해 영향을받지 않는다. 그들은 (31) 여성 (30)에 감수성을 감소 할 수 있으므로 정자를 생산 할 수 없습니다. </li></ol> 4. 공연 및 2-D 포만 분석 실험을 득점 참고 :이 남성의 나이가 나이와 결합 드라이브 변경으로 운항하는 항공사 제어하는 ​​것이 중요하다. 이 프로토콜은 3입니다 남성 사용 - 4 D 이전 25 </suP&gt;. <ol><li> 원하는 온도 (예를 들어, 23 °의 표준 C, RT 실험)와 습도 (&gt; 30 %)에 인큐베이터를 설정합니다. 인큐베이터에서 물 한 잔을 떠나 습도 조절없이 창업을 위해 충분하다. </li><li> 온도 평형 및 실험 과정에서 챔버의 결로 방지 ~ 동안 인큐베이터에 30 분을 2-D 포만 분석 분야를 놓는다. 회전 문 열림 위치에 있어야합니다. </li><li> 경기장 (그림 4)의 각 실에 20 처녀 여성 - 15 대기음하는 플라이 흡인기 (32)를 사용합니다. 참고 :이 여성과 남성이 분석 같은 날에 마취하지 않는 것이 중요합니다. 우리의 경험에 의하면, 이렇게하면 여성의 감수성과 남성 짝짓기 행동에 영향을 미칠 수 있습니다. </li><li> 각 챔버 내로 흡인 한 남성. </li><li> 4.5 시간에 대한 표준 소비자 캠코더 (그림 5)와 영화에서 인큐베이터에서로드 경기장을 놓습니다. </li><li> 각각의 남성이 시작 비행 각각의 짝짓기 (즉, 교미를) 종료 될 때 지적으로 동영상을 점수. 이 단계는 시간 소모적 우선 할 수있다. 연습으로, 하나는 5 배 속도 이상에서 동영상을 득점 할 수 있습니다. 주 : 파리 ~ 23 ° C (높은 온도에서 짧은 시간) 29시 ~ 20 분 동안 짝짓기를하기 때문에, 하나는 각 결합의 첫 15 분을 통해 탈지 수 있습니다. </li><li> 모든 결합 번 로그인 한 후, 각 플라이를위한 교배의 수를 합계 (대표 결과를 참조). </li><li> ethogram를 생성하기 위해 제공된 코드를 사용합니다. 코드, 지침 및 예제 데이터에 대한 보충 자료 2를 참조하십시오. </li><li> 그들을 제거하기 전에 파리를 마취하는 CO 2 또는 저온를 사용합니다. </li></ol> 5. 2-D 포만 분석 실험에 포만 역에 Thermogenetic 조작을 사용하여 참고 : 정의 된 신경 인구의 thermogenetic 자극 포만감을 극복 할 수 있는지 여부를이 프로토콜 테스트합니다. 실험 FLI에스 신경 세포 (UAS-TrpA1)의 정의 인구의 열에 민감한 양이온 채널 TrpA1을 표현한다. 아래 단계 짝짓기 드라이브 (25)을 촉진하는 것으로 나타났다 도파민 뉴런 (TH-GAL4)의 자극에 적용됩니다. 이 단계는 결합을 촉진 드라이브 다른 개체군을 발견하기 위해 다른 신경 드라이버와 함께 사용될 수있다. <ol><li> thermogenetically 인큐베이터의 온도를 증가, 만족을 했소 파리에서 짝짓기 행동을 유도하기 위해 (예를 들어, 23 ° C에서 28.5 ° C까지) 전체 4.5 시간 2-D의 물림 실험을 완료 한 후. </li><li> 인큐베이터가 원하는 온도에 도달 한 후, 열 자극을 계속하고 1 시간 (대표 결과를 참조)의 교배 (예. 교미) 남성의 점수. 참고 : 여전히 robu을 생산하면서 신경의 자극을 넘어선을 방지하기 최적의 조건을 해결하는 데 필요한, 그래서 자극의 온도와 길이는 유전자형에 따라 달라질 수 있습니다성 표현형. </li></ol> 6. 포만을 확인하기 위해 구애와 로코를 사용하여 주 :이 섹션은 2-D의 물림 분석의 결과를 확인하는 데 사용할 수 있습니다 3 선택 방법을 설명합니다. 그들은 모든 분석 필요하지 않습니다. <ol><li> 포만감을 확인 구애 분석을 사용합니다. <ol><li> 기음 한 남자와 구애 분야에서 32 각 챔버에 한 처녀 여성. </li><li> 표준 소비자 캠코더를 사용하여 20 분 ~의 파리 영화. </li><li> 구애 (25)을 정량화 할 수있는 구애 지수 (CI)를 점수; 이 구애 행동을 수행하는 동안 (등, 다음, 노래.) 시간과 5 분 창을 통해 (즉, 교미를) 짝짓기의 비율이다. 이 창은 구애 행동의 첫 번째 인스턴스에서 시작됩니다. 남성 비행은 처음 15 분에 구애를 시작하지 않으면, 그 CI는 완전 만족을 했소 비행은 CI의 B가 있어야하는 반면 0 나이브 WT 파리가 0.9보다 CI 더 보여 주어야입니다0.2 elow. 기타 구애 수단은, 33 (23)로 간주 될 수있다. </li></ol></li><li> 2-D의 물림 분석에서 득점 구애 <ol><li> 2-D 포만 분석의 기간 (예를 들면, 제 H)를 통해 남성 비행 구애 소비하는 시간을, 점수. 구애는 의식의 단계 (등, 다음, 노래)을 수행하는 남성으로 정의된다. 제 6.1.3 달리,이 단계는 남성이 짝짓기를 보내는 시간은 포함되지 않습니다. </li><li> 수형이 동일한 시간에 (즉, 교미되지 않음) 연결되지 않은 총 시간 이상 구애 시간을 나눈다. (- 20 분에서 60 분) = 0.375 수컷가 제 시간에 걸쳐 20 분 동안 15 분 동안 코트 메이트 플라이 경우, 예를 들어, 비율은 15 분 /이다. 비율은 대표 결과에서 &quot;구애의 시간을 nonmating의 분수&quot;로 표시됩니다. </li></ol></li><li> 피로를 평가하기 위해 운동 분석을 사용하여 <ol><li> 부분적으로 32을 조립모든 부분 만 대비 시트와 챔버 경기장. </li><li> 구애 분야에서 32 실의 각각에 흡인 한 남자 플라이 (NO 여성 파리). </li><li> 표준 소비자 캠코더를 사용하여 10 분 ~의 파리 영화. </li><li> ImageJ에 (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html)에서 MTrack2 플러그인과 함께 파리를 추적 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 2-D 포만 분석 한 후 결합 드라이브 복구 (7) <ol><li> 4 절에 설명 된 2-D 포만 분석을 수행하지만, 남성 분석의 끝에서 밖으로 날아 대기음. </li><li> 일 원하는 번호를 23 ° C에서 남성 파리를 분리합니다. </li><li> 복구 된 남성과 2-D의 물림 분석을 수행하고 단지 1 시간 (대표 결과를 참조) 자신의 교배 (즉, 교미를) 점수. </li></ol>

<ol>
	<li>Sturtevant, A. H., Bridges, C. B., Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+relations+of+genes.">The spatial relations of genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 5 (5), 168-173 (1919).</li><li>Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems+Approaches+to+Biological+Rhythms+in+Drosophila.">Systems Approaches to Biological Rhythms in Drosophila.</a> Methods in Enzymology. 393, 61-185 (2005).</li><li>Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+GTPases+in+neuronal+morphogenesis.">Rho GTPases in neuronal morphogenesis.</a> Nature reviews. Neuroscience. 1 (3), 173-180 (2000).</li><li>Schmucker, D., Clemens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Dscam+Is+an+Axon+Guidance+Receptor+Exhibiting+Extraordinary+Molecular+Diversity.">Drosophila Dscam Is an Axon Guidance Receptor Exhibiting Extraordinary Molecular Diversity.</a> Cell. 101 (6), 671-684 (2000).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLH+proteins,+fly+neurogenesis,+and+vertebrate+myogenesis.">HLH proteins, fly neurogenesis, and vertebrate myogenesis.</a> Cell. 75 (5), 827-830 (1993).</li><li>Stockinger, P., Kvitsiani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+circuitry+that+governs+Drosophila+male+courtship+behavior.">Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior.</a> Cell. 121 (5), 795-807 (2005).</li><li>Yu, J. Y., Kanai, M. I., Demir, E., Jefferis, G. S. X. E., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Organization+of+the+Neural+Circuit+that+Drives+Drosophila+Courtship+Behavior.">Cellular Organization of the Neural Circuit that Drives Drosophila Courtship Behavior.</a> Current biology. 20 (18), 1602-1614 (2010).</li><li>Zhou, C., Pan, Y., Robinett, C. C., Meissner, G. W., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+Brain+Neurons+Expressing+doublesex+Regulate+Female+Receptivity+in+Drosophila.">Central Brain Neurons Expressing doublesex Regulate Female Receptivity in Drosophila.</a> Neuron. 83 (1), 149-163 (2014).</li><li>Rideout, E. J., Dornan, A. J., Neville, M. C., Eadie, S., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+sexual+differentiation+and+behavior+by+the+doublesex+gene+in+Drosophila+melanogaster.">Control of sexual differentiation and behavior by the doublesex gene in Drosophila melanogaster.</a> Nature neuroscience. 13 (4), 458-466 (2010).</li><li>Manoli, D. S., Foss, M., Villella, A., Taylor, B. J., Hall, J. C., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific+fruitless+specifies+the+neural+substrates+of+Drosophila+courtship+behaviour.">Male-specific fruitless specifies the neural substrates of Drosophila courtship behaviour.</a> Nature. 436 (7049), 395-400 (2005).</li><li>Kimura, K. I., Ote, M., Tazawa, T., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruitless+specifies+sexually+dimorphic+neural+circuitry+in+the+Drosophila+brain.">Fruitless specifies sexually dimorphic neural circuitry in the Drosophila brain.</a> Nature. 438 (7065), 229-233 (2005).</li><li>Cachero, S., Ostrovsky, A. D., Yu, J. Y., Dickson, B. J., Jefferis, G. S. X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+the+fly+brain.">Sexual dimorphism in the fly brain.</a> Current biology. 20 (18), 1589-1601 (2010).</li><li>Clowney, E. J., Iguchi, S., Bussell, J. J., Scheer, E., Ruta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Chemosensory+Circuits+Controlling+Male+Courtship+in+Drosophila.">Multimodal Chemosensory Circuits Controlling Male Courtship in Drosophila.</a> Neuron. 87 (5), 1036-1049 (2015).</li><li>Kallman, B. R., Kim, H., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation+and+inhibition+onto+central+courtship+neurons+biases+Drosophila+mate+choice.">Excitation and inhibition onto central courtship neurons biases Drosophila mate choice.</a> eLife. 4, e11188 (2015).</li><li>von Philipsborn, A. C., Liu, T., Yu, J. Y., Masser, C., Bidaye, S. S., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+Drosophila+courtship+song.">Neuronal control of Drosophila courtship song.</a> Neuron. 69 (3), 509-522 (2011).</li><li>Zhou, C., Franconville, R., Vaughan, A. G., Robinett, C. C., Jayaraman, V., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neural+circuitry+mediating+courtship+song+perception+in+male+Drosophila.">Central neural circuitry mediating courtship song perception in male Drosophila.</a> eLife. 4, e08477 (2015).</li><li>Kohatsu, S., Koganezawa, M., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+contact+activates+male-specific+interneurons+that+trigger+stereotypic+courtship+behavior+in+Drosophila.">Female contact activates male-specific interneurons that trigger stereotypic courtship behavior in Drosophila.</a> Neuron. 69 (3), 498-508 (2011).</li><li>Kohatsu, S., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visually+induced+initiation+of+Drosophila+innate+courtship-like+following+pursuit+is+mediated+by+central+excitatory+state.">Visually induced initiation of Drosophila innate courtship-like following pursuit is mediated by central excitatory state.</a> Nature Communications. 6, 6457 (2015).</li><li>Fan, P., Manoli, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+neural+mechanisms+that+inhibit+Drosophila+from+mating+with+other+species.">Genetic and neural mechanisms that inhibit Drosophila from mating with other species.</a> Cell. 154 (1), 89-102 (2013).</li><li>Kurtovic, A., Widmer, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+class+of+olfactory+neurons+mediates+behavioural+responses+to+a+Drosophila+sex+pheromone.">A single class of olfactory neurons mediates behavioural responses to a Drosophila sex pheromone.</a> Nature. 446 (7135), 542-546 (2007).</li><li>Ejima, A., Smith, B. P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalization+of+Courtship+Learning+in+Drosophila+Is+Mediated+by+cis-Vaccenyl+Acetate.">Generalization of Courtship Learning in Drosophila Is Mediated by cis-Vaccenyl Acetate.</a> Current Biology. 17, 599-605 (2007).</li><li>Keleman, K., Vrontou, E., Kr&#252;ttner, S., Yu, J. Y., Kurtovic-Kozaric, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+modulate+pheromone+responses+in+Drosophila+courtship+learning.">Dopamine neurons modulate pheromone responses in Drosophila courtship learning.</a> Nature. 489 (7414), 145-149 (2012).</li><li>Pan, Y., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Identification+and+Separation+of+Innate+and+Experience-Dependent+Courtship+Behaviors+in+Drosophila.">Genetic Identification and Separation of Innate and Experience-Dependent Courtship Behaviors in Drosophila.</a> Cell. 156 (1-2), 236-248 (2014).</li><li>Zhang, S. X., Rogulja, D., Crickmore, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Circuitry+Underlying+Mating+Drive.">Dopaminergic Circuitry Underlying Mating Drive.</a> Neuron. 91 (1), 168-181 (2016).</li><li>Bowers, M. B., Van Woert, M., Davis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+behavior+during+L-dopa+treatment+for+Parkinsonism.">Sexual behavior during L-dopa treatment for Parkinsonism.</a> The American journal of psychiatry. 127 (12), 1691-1693 (1971).</li><li>Sacks, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Awakenings. , (1999).</li><li>Dietzl, G., Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li><li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+dopaminergic+and+GABAergic+neurons+control+the+duration+and+persistence+of+copulation+in+Drosophila.">Opposing dopaminergic and GABAergic neurons control the duration and persistence of copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li><li>Peng, J., Chen, S., Busser, S., Liu, H., Honegger, T., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradual+Release+of+Sperm+Bound+Sex-Peptide+Controls+Female+Postmating+Behavior+in+Drosophila.">Gradual Release of Sperm Bound Sex-Peptide Controls Female Postmating Behavior in Drosophila.</a> Current biology. 15 (3), 207-213 (2005).</li><li>Yapici, N., Kim, Y. J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour.">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li><li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Sensillum+Recordings+in+the+Insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae.">Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36 (36), 1-5 (2010).</li><li>Cook, R., Cook, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Attractiveness+to+males+of+female+Drosophila+melanogaster:+effects+of+mating,+age+and+diet.">The Attractiveness to males of female Drosophila melanogaster: effects of mating, age and diet.</a> Animal behaviour. 23, 521-526 (1975).</li><li>Toates, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Motivational Systems (Problems in the Behavioural Sciences). , (1986).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mating+of+a+fly.">The mating of a fly.</a> Science. 264 (5166), 1702-1714 (1994).</li><li>Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+and+manipulating+neural+circuits+in+the+fly+brain.">Mapping and manipulating neural circuits in the fly brain.</a> Advances in genetics. 65 (9), 79-143 (2009).</li><li>Venken, K. J. T., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Manipulation+of+Genes+and+Cells+in+the+Nervous+System+of+the+Fruit.">Genetic Manipulation of Genes and Cells in the Nervous System of the Fruit.</a> Neuron. 72 (2), 202-230 (2011).</li><li>Klapoetke, N. C., Murata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Bellen, H. J., Levis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BDGP+gene+disruption+project:+single+transposon+insertions+associated+with+40%+of+Drosophila+genes.">The BDGP gene disruption project: single transposon insertions associated with 40% of Drosophila genes.</a> Genetics. 167 (2), 761-781 (2004).</li><li>Spradling, A. C., Stern, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Berkeley+Drosophila+Genome+Project+gene+disruption+project:+Single+P-element+insertions+mutating+25%+of+vital+Drosophila+genes.">The Berkeley Drosophila Genome Project gene disruption project: Single P-element insertions mutating 25% of vital Drosophila genes.</a> Genetics. 153 (1), 135-177 (1999).</li><li>Parks, A. L., Cook, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36 (3), 288-292 (2004).</li><li>Matthews, K. A., Kaufman, T. C., Gelbart, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resources+for+Drosophila:+the+expanding+universe.">Research resources for Drosophila: the expanding universe.</a> Nature reviews. Genetics. 6 (3), 179-193 (2005).</li><li>Ni, J. Q., Liu, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

동기 부여 상태, 만족을 했소 유지, 34을 복구 할 수 있습니다. 우리는 신속하고 견고하게 즉석에서 드라이브 짝짓기의 이러한 측면을 모두 측정하는 2-D의 물림 분석을 제시한다. 이 분석은 동기 동작의 분자 및 회로 부품을 연구 고급 플라이 유전자 조작을 사용할 수있는 가능성을 연다. 포만 분석은 남성의 능력을 성공적으로 법원과 교접하고, 적절한시기?...

초파리 작품은 유전자 하나의 성질을 포함한 다수의 생명 현상에 깊은 선구 통찰력을 제공하고, 배아 발달 2 활동 일주기 3 및 신경계 4, 5, 6의 개발 및 배선의 원리. 동기 부여는 아마도 때문에 지금까지 연구 된 시스템의 한계, 훨씬 덜 이러한 현상보다 이해 남아있다. 비행의 동기는 주로 인해 지방 증착의 명백한 징후를 배제 공급 한판 승부와 외골격에 따라 자신의 하고서 음식 섭취에 많은 도전을 제시 기아의 맥락에서 연구되고있다. 따라서, 즉석에서 동기를 연구하기 위해 사용 된 시스템을 확장 할 필요가있다. 우리는 상대 드라이브의 연구를위한 행동 프레임 워크를 설명초파리. 이 시스템은 비행과 접근성 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 성적 동종 이형 회로 (8), (13)의 추정에 커 넥톰 neurogenetic 툴을 이용한다. 또한, 많은 선천성 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22, 23, 24 관능 모터 회로 제어 구애 드문 기회를 제공하고, 세부에서 작동되었다 습득동기가 충돌하는시 정확한 회로 노드를 찾습니다. 우리는 최근 파리에서 인간으로, 도파민 수준이 결합 드라이브 25, 26, 27의 중심에 있으며, 보도했다. 우리는 여기에 25을 설명하는 분석을 사용하여이 보존 된 현상 분석 관련 도파민 생산 및 비행에 신경을 수신 촉진 상세한 분자 - 회로 수준에 유전 적 접근을 얻고있다. 우리는 장 등의 등의 행동 분석에 추가 할 수 있습니다. 우리는 2 차원 (2-D) 포만 분석 이전 방법에 비해 중요한 개선 호출 영상 득점을 허용 25 새로운 평면 행동 경기장. 따라서, 새로운 분석은 확장 성 및 정량화, 동기에 관여하는 유전자와 신경 세포의 유전 스크린의 때문에 더 적합하다. 우리는 구애 분석 및 neuroge와 함께,이 새로운 분석을 사용네틱 조작은, 측정하고 즉석에서 짝짓기 드라이브를 변경하는 방법을 설명합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1195">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1/16 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8589K12</td>
			<td style="width:743px;">Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/8 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8589K42</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3/16 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8560K219</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/32 inch black delrin</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8575K132</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hex screws, 1 inch long (50x)</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92314A115&#160;</td>
			<td>Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thumb nuts (25x)</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92741A100</td>
			<td>Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Camcorder</td>
			<td style="width:119px;">Canon</td>
			<td>Vixia HF R700</td>
			<td>Can be replaced by any consumer comcorder.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster

조사의 수십 년에도 불구하고, 동기 부여 상태의 신경 세포 및 분자 기지 신비 남아있다. 우리는 최근에 여기에 세부 사항을 우리 방법에있는 남성 노랑 초파리 (Drosophila의)의 결합 드라이브를 사용하여 동기 부여에 대한 심층 조사를위한 소설, 환원 및 확장 가능한 시스템을 개발했다. 행동 패러다임은 남성 짝짓기 드라이브가 반복 교미의 과정을 통해 다산과 함께 감소하고 ~ 3 일에 걸쳐 복구 발견 중심으로. 이 시스템에서, 파리에서 사용할 수있는 강력한 neurogenetic 도구는 유전 적 접근성과 성적 행동에 사용할 추정 배선도 수렴. 이 수렴 신속한 격리 및 특정 동기 부여 기능을 가진 작은 신경 인구의 심문을 할 수 있습니다. 여기에 세부 사항을 측정하고 남성 비행에 구애 의욕을 변경하는 데 사용되는 물림 분석의 설계와 실행을 우리. 사용이분석, 또한 낮은 남성 상대 거리가 도파민 성 신경 자극에 의해 극복 될 수 있다는 것을 보여준다. 포만 분석은 유전 적 배경의 영향으로, 간단한 저렴하고 강력한이다. 우리는 포만감 분석이 동기 부여 상태의 신경 생물학에 많은 새로운 통찰력을 생성 할 전망이다.

초파리 상대 거리를 특성화하기 위해, 3 일된, WT 캔톤-S 남성은 2-D 포만 분석에서 시험 하였다. 분석 (4.5 시간)에 걸쳐, 수컷 4.8 ± 0.3 평균 정합 시간 (평균, SEM의 ± 표준 오차를 의미한다). 교배는 제 2 시간 (78 %) (도 6A, 6B)에 주로 개시 및 분석법 (도 6A, 6B)에 진행됨에 따라 덜 빈번해진다. 이 감소는 상대 파트너의 부족 (74 %의 여성이 분석을 ?...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster at JoVE.com

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

11.0K 조회수.  Boston Children’s Hospital.  이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다. 

비디오: Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

연구

신경과학

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

In this article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the lipophilic fluorescent membrane marker DiI. This method allows the visualization of neuronal cell morphology in great detail. It is possible to label any cell in the CNS: cell bodies of target neurons are visualized under DIC optics or by expression of a fluorescent genetic marker such as GFP. After labeling, the DiI can be transformed into a permanent brown stain by photoconversion to allow visualization of cell morphology with transmitted light and DIC optics. Alternatively, the DiI-labeled cells can be observed directly with confocal microscopy, enabling genetically introduced fluorescent reporter proteins to be colocalised. The technique can be used in any animal, irrespective of genotype, making it possible to analyze mutant phenotypes at single cell resolution.

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

We present a technique for labeling single neurons in the central nervous system (CNS) of Drosophila embryos, which allows the analysis of neuronal morphology by either transmitted light or confocal microscopy.

의 중추 신경계에 단일 세포의 라벨<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

의 이스케이프 문제의 Optogenetic의 자극<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

사회적 공간에 영향을 미치는 조건<em&gt; 초파리</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

대한 꼴 경로 길이 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 애벌레

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

측정과 남성의 변경 결합 드라이브

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae

의 중추 신경계에 단일 세포의 라벨

의 이스케이프 문제의 Optogenetic의 자극

의 자발적인 운동 활성의 결정

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동

사회적 공간에 영향을 미치는 조건

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반

대한 꼴 경로 길이 프로토콜

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정