Name: dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila
Uploaded: 2015-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
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우리는 짝짓기 실험에 도움을 준 알렉스 Hitchen와 멕 부스에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 TP에 H015604 / 1 / NERC 보조금 NE에 의해 지원되었다.

식용 색소와 플라이 음식 1. 준비 <ol><li> 바닥에 음식의 약 20 ㎖ (그림 1)과 표준 초파리 병을 가져 가라. 끓는 물 1 L 이용한 식품 믹스하기 배합 사용 한천 10g, 85g의 포도당, 옥수수 가루 60g, 효모 40g을 서서히 끓는하고 5 분 동안 교반한다. 혼합물을 75 ℃로 냉각되면 10 % nipagen의 25 ML을 추가합니다. </li><li> 음식은 냉각시키고, 두 방울 추가 고화 후 - 음식 위로 청색 식용 색소 (대략 0.5 내지 1 ㎖) 및 바이알의 표면 전체에 걸쳐 (도 1). 선호하는 경우 다른 색상의 염료를 사용합니다. </li><li> 염료가 식품의 상부층에서 흡수되도록 냉장고에서 이틀 동안 음식 남기기; 이 숙성 기간 동안에 파리 과도한 수분 손상을 방지한다. 과도한 습기가 여전히 다음 이후에 남은 물기과를 가릴 수있는 문제의 경우 조직에 작은 종이 조각을 추가를 제거합니다. </li><li> 전송은 개별적으로 또는 그룹으로 음식에 파리. 참고 : 파리는 음식에 배치되는 일일 내 장 염색을 얻을 것입니다. 또한, 전에 완전히 실험 (식품 염료에 노출 관찰되지 않았다 성숙 기간 동안 사망률 증가)로 염색 음식에 파리를 성숙. </li><li> 염색 파리 비 염색 파리에서 쉽게 구별 될 수 있는지 확인합니다. 염료의 높은 농도, 또는 다른 염료를 사용하여 1.4 - 그들이 구별 될 수없는 경우, 반복 단계 1.1. </li></ol> 음식 색을 사용하여 2. 두 남자 상대의 시험 <ol><li> 자손을 생산하는 경우, 여성과 남성 파리 쌍 포함 된 여러 바이알 (남성과 여성의 작은 그룹을 애벌레의 과밀을 방지하기 위해주의를 기울여야하지만,도 적합하다)를 설정합니다. 7 일 - 암컷이 알을 낳기 모든 5 새로운 유리 병에 파리를 이동할 수 있습니다. 관심의 종류에 적합한 온도에서 보관 유리 병 (22 ° C 형 (F)또는 D. pseudoobscura 및 D. subobscura 및 D. 25 ° C의 melanogaster의). </li><li> pseudoobscura 25 ° C, D.에서 6 시간 - - 수집 실험 파리는 남성과 여성을 수집하기 전에 설정 한 시간에 수집 유리 병에서 모든 파리를 제거하기 전에 그들이 처녀 (D. melanogaster의 될 것입니다 보장하기 위해 18 시간 22 ° C에서, 그리고 D.의 subobscura - 22 ° C에서 24 시간). 참고 : 파리는 처녀가 아닌 경우이 의지 바이어스 짝짓기 실험 (15)에 자신의 행동. <ol><li> 저장 및 개별적으로 표준 75 X 20mm 플라스틱 병에서 성숙한 남자 (음식 ~ 20 ㎖를 포함). 남성은 그룹 16에 보관 때 남성 짝짓기 행동과 어떤 종에서 볼 피트니스에 부정적인 영향을 피할 수 있습니다. </li><li> 원하는 치료로 남성의 절반을 노출 (CO이 경우 2 마취). CO 2 매트를 사용하거나 필요한 시간 동안 파리를 노출 누릅니다. 말의 저장 절반ES 상대까지 색깔 음식의 각 처리에서 발생한다. 이 짝짓기 시험 동안 그들을 시각적으로 구별 할 것입니다. </li><li> 전송을 위해 파리 흡인기 (17)를 사용합니다. 치료 및 남성의 색 상태 모두를 식별하기 위해 각 바이알 레이블. 여기에, 네 개의 트리트먼트 사용 (마취, 비 색깔 = G-NC, 마취, 색깔 = GC, 마취, 비 착색, NG-NC 및 마취, 색깔, NG-C). </li></ol></li><li> 10의 그룹으로 성숙 신선한 음식 바이알에 새로 등장 여성을 전송합니다. </li><li> 삼일, D.의 pseudoobscura - - 오일, D.의 subobscura -. D에 대한 (예를 들어, 22 ° C를 연구되고 18 저장소 종에 적합한 온도에서 날아 칠일 파리가 짝짓기 나이 (D. melanogaster의에 성숙 할 수 있도록 허용 . pseudoobscura 및 D의 subobscura 25 ° C D. melanogaster의 경우). </li><li> 계속 (개별 유리 병에 여성 이동음식 ~ 20 ml)을 결합 유리 병에 순응의 결합 시험 전에 일일를 aining. 유리 병이 차별화 될 수 있도록 이러한 병 레이블. 중립 라벨을 사용하여 실험을 눈 멀게주의하십시오 (즉, 1-150) 그래서 어떤 병에 파리의 신원을 추측 할 수 없습니다. 참고 : 각 유리 병에 파리를 배치하는 사람이 그들이 염색 된 치료주의 할 것이다 각 유리 병에 배치 파리의 신원을 알고 있어야합니다. 그러나, 짝짓기 시계 관찰자는 자신의 정체성을 모르는 것이다. 이 두 개 이상의 실험자이 필요합니다 설정하는 하나 하나 관찰을 수행합니다. </li><li> (10) 사이의 결합 시험 시작 - 자정, 또는 빛이 파리가 (파리에 대해 &quot;새벽&quot;)에 노출되는 빛 / 어둠주기에 오는 일치 한 번에. 흡입기를 사용 (하나의 여성 비행 포함) 각각의 짝짓기 유리 병에 두 남성 파리를 추가합니다. 두 남성 (다른 치료에서 마취 있는지 확인 또는제어) 및 그 하나는 가능한 서로를 구별 할 수 있도록하고, 염색 된 남성주의해야 할 장 염색이있다. </li><li> (- 색 색깔 또는 비 중) 교미가 발생하면, 동료 남성의 상태를 기록한다. 2 시간 동안 마지막 시련, 가정하면 암컷은 짝짓기를하지 않습니다. 2 시간이 종에 적합하지만, 다른 초파리는 다소 시간이 필요할 수 있습니다. </li></ol> 3. 단일 남성 짝짓기 시험 <ol><li> 단일 남성 시험의 경우, 두 가지 변화와 프로토콜 2를 반복합니다 : <ol><li> 단계 2.3에서 색깔의 음식에 남성을 보관하지 않습니다. </li><li> 단계 2.7에서 각 바이알에 단 하나의 남성을 추가합니다. </li></ol></li><li> 단계 2.8에서, 비행 바이알, 정합 완료 메이팅 시작하고 시간이 기록되어야하는 시간에 부가되는 시간을 기록한다. 이 값에서, 성공, 대기 시간 및 기간을 짝짓기 계산합니다. </li></ol> 4. 데이터 분석 <ol><li> 아나에 적합한 통계 패키지를 사용하여용해. 데이터가 정상입니다 만, 두 치료가 t-시험 또는 이와 동등한 일반화 선형 모델 (GLM)를 사용하는 경우. 두 남성 실험을 위해, 이항 시험 또는 기본 통계 패키지로 제공된다 이항 GLM을 사용합니다. 참고 : 예를 들어 데이터의 경우, 모든 분석은 R 버전 3.0.3 (19)을 실시 하였다. </li><li> 각각의 치료 (20) 대기 시간 및 기간의 주파수 히스토그램을 플로팅 및 샤피로 - 윌크으로 정상에 대한 테스트를 사용하여, 정상의 짝 대기 시간과 짝짓기 기간 데이터를 확인합니다. 정상이 아닌 경우이를 변환하거나, 비모수 통계 20 당량을 사용한다. 참고 : 하나의 남성 실험의 예 데이터 로그 변환이 정상과 등분의 요구 사항을 충족. </li><li> 데이터가 표준화 될 수있는 경우 두먼트 (21)를 사용하는 경우, 사용 t-테스트 남성 단일 결합 시험에서 상대 지연 및 지속 시간의 차이를 조사한다. 다중 처리는 사용되는 경우,분산 분석 (ANOVA) (20)를보십시오. 데이터를 정규화 할 수없는 경우, 해당하는 비 파라 메트릭 테스트 (21)를보십시오. </li><li> 경쟁 남성 (20)의 짝짓기 성공에 식용 색소 또는 CO 2 마취 중 하나의 효과를 테스트하기 위해 이항 테스트를 사용합니다. 예컨대 데이터의 경우처럼 다수의 처리가 사용되면, 오류 이항 구조 (21)를 사용 GLM. </li><li> 예컨대 데이터의 두 남성 시험 들어 에러 이항 구조와 GLMS를 사용한다. 하나 GLM는 응답 변수 (0 = 가스실 및 가스화하지로서 CO 2 검사 설명 variables.One GLM으로 장착 응답 변수 (컬러 = 0이고 비 착색 = 1) 종, 가스 상태 및 가스 처리로서 색을 조사 = 1)를 장착 종 색상 상태 및 가스 처리와. 각각의 경우에 최대 모델을 생성하고, AIC (20)에 기초하여 단순화 된 모델을 수행한다. </li></ol>

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저자는 그들이 더 경쟁 금융 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 데이터는 CO 2 마취의 영향은 거의 영향을 보여주는 두 세 가지의 종과 종 사이의 일관성이 있음을 보여줍니다. 우리의 결과는 음식 염료와 라벨 2 마취 D.에 대한 CO보다 남성 짝짓기 성공에 낮은 영향을 미쳤다 제안 melanogaster의. 이러한 실험 음식 염료 쉽고 싸게 여러 수컷 관련된 결합 분석법 라벨 날아간하는데 사용될 수 있다는 것을 입증한다. 세 가지 모델 초파리 종의 만 D., 검사 melanogaster의 경쟁력있는 상황에서 정합 성능에 CO 2 마취 효과를 나타내었다. 대조적으로, 종 중에 D. 대한 이전 결과 반대로 상대 지연의 측면에서 단일 결합 시험에서 가스의 컬렉션에 효과가 없었다 melanogaster의 5. 경쟁의 영향은 따라서 만 검출 가능한 CO 2 마취 미묘한 니스 효과를 강조 할 수있다상황에 따라 남성 남성 경쟁이입니다. 초기 수집 및 일일에 노출 재판에 앞서 D.의 남성의 능력에 부정적인 영향을 미칠 짝짓기를 얻기 위해 melanogaster의. 이일 이전 시험에 노출 그러나 효과적인 결과를 보이지 못했다. D. 두 pseudoobscura 및 D. subobscura은 시험 중 임의의 가스에 노출 된 효과적인 결과를 보이지 못했다. 한 설명은 것입니다 D. 남성 처녀 보장하기 위해 다른 종보다 - (6 시간 이전 0)이 이전의 삶에서 수집해야하기 때문에 melanogaster의 주식 2 초 노출에 취약했다. 따라서 남성 D. 파리의 표피는 여전히 강화하기 위해 자신의 표피에 대해 더 이상 가지고있는 다른 종에 비해 강화 된 바와 같이이 시대의 melanogaster의 더 민감 할 수있다. 일반적으로, 이것은 CO 2 마취 효과가 특정 종에서 적절 타겟 종의 효과를 테스트해야 조사관 있다는 생각을 지원한다. CurrentlY, CO 2 마취의 효과에 대한 작업의 대부분은 다른 관련 종에 적용하는 것이 적절하지 않을 수 있습니다 때문에 초파리 5,11,22에서 수행하고있다. 파리를 구별하기 위해 제시된 대안 비 침습적 방법은 음식 염료입니다. 이러한 처리 결과는 모든 종에 걸쳐 조사에 영향을 미치지 아니 제안한다. 그 사용은 개인을 구별하는 저렴하고 쉽게 볼 마커를 제공하는데 성공하면서 그러나, 염료 D.에서 구별하기 쉽다는 것을 주목해야한다 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 이전 저자는 4,6 (적색, 녹색 및 청색) 여러 가지 색상을 사용했다. 우리는 D. 모든 종에서 구별하는 가장 쉬운 특히으로 푸른 색을 발견 pseudoobscura 및 D. subobscura. 잠재적으로 많은 개별적으로 표시 flie 더 복잡한 실험을 허용하는 여러 가지 색상을 사용하여의. 어떤 음식 염료 소비 할 때 가능성이 소화되고, 파리 색상을 실패하지만, 다른 염료의 예비 시험은 필수적이다. 다른 염료)은 독성을 가지고 날아 생존을 감소시키고, 14 피해야있다. 더 비싼 얼룩을 이용한 대체 착색료 방법은 D. 위해 장내 무결성을 검사하는 데 사용되어왔다 23 melanogaster의. 이러한 대안을 제공 할 수 있지만, 고가의 염색 방법 (23). 파리 컬렉션에서 염색이 식품에 저장 될 수있는 방법은 염료 CO 2 날개 클리핑만큼 빠르다. 음식의 흡수는 (~ 3 시간) 빠른, 그래서 다른 연구 (6)에 사용되는 색깔의 음식에 저장 O / N은, 파리를 표시하기에 충분하다. (10-12일) 24 마킹 날개 (영구) 클리핑이나 형광등 먼지 비교 - (5 시간 ~ 4) 그러나, 착색의 기간이 상대적으로 짧다. 초파리 종으로서에 따라 다릅니다, 다른 염료는 다소 다른 종에 대해서 유효합니다, 일부 균주로 (예를 들어, 녹아웃 돌연변이) 다이어트의 변화에 취약 할 수있는, 염료의 사용은 그 효과에 대한 예비 시험 특히 긴 경우 필요합니다 염료에 장기간 노출 14 독성이있을 수 있습니다. Kalaw 등. (14)의 연구와는 달리, 우리는 D.에 대한 색깔의 음식에 여러 일 동안 저장 후 유의 한 사망률 발견 melanogaster의 (3 일), D. pseudoobscura (오일), 또는 D. subobscura (7 일), 아마도 염료의 차이로 사용했다. 염료 기술을 성공적으로 사용하기위한 중요한 단계는 선택한 염료 종과 변형을 사용하고 잘 작동하는지 확인하는 단계입니다 1.5입니다. 대체 기술은 현장 실험 24에서 사용하기 전에 즉시 외부로 착색 분진을 적용하는 단계를 포함한다. 이 방법은 필드에서 t 인해 개인을 추적하기 위해 사용되어왔다O 마킹 기간 및 마킹 질량의 용이성 24 날아간다. 우리가 명시 적으로 결합 시험에서이 방법을 테스트하지 않았지만, 그것은 먼지가 특히 초파리 25, 26, 짝짓기에 중요한 감각에 미칠 수있는 영향을 검토하는 것이 중요 할 것입니다. 종 그러나, 장 염색이 가능하지 않은, 이 방법이 적합 할 수있다. 결론적으로 우리는 테스트 세 종 (D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)의 두 CO 2 마취 또는 수컷의 짝짓기 능력에 식용 색소 중 하나의 발견 아무런 효과가 없다는 것을 발견했다. D. 들어 검출 된 CO 2 마취의 부정적인 영향을 melanogaster의,하지만 식용 색소는이 종에 성공 짝짓기에 영향을 미치지 않았다. 전반적으로, 염색 방법은 동일 또는 CO 2 마취를 필요 방법보다 더 낫다고 초파리 개인을 식별하기위한 단순 및 저렴한 비 침습적 방법을 제공한다. 그것가능성이 방법은 종의 범위에서 작동하는 것입니다.

지난 몇 년 동안이 진화 1,2에 어떻게 성적 선택과 경쟁 남성 사이에 미치는 영향에 대한 관심이 증가하고있다. 교미 행동에 대한 실험은 개발 및 3,4- 성 선택 이론 테스트에서 중요한 역할을 해왔다. 속 초파리의 특정 연구하여 종에서는 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여하고있다. 그러나, 일반적으로 사용되는 표준 기술은 5,6- 결합 실험의 결과를 인공적으로 치우치게 할 수 있는지 여부를 조사하는 것이 중요하다. 마취는 종종 실험 7 취급 및 식별을 위해 사용됩니다. 예를 들어, 파리 일반적 메이팅 수집 전에, 또는 (CO 2) 마취 이산화탄소를 이용하여 실험 치료 또는 유전자형으로 분류. 둘 이상의 개인이 구별 될 필요가 실험에서, FL을 anaesthetise 것이 일반적이다IES와 날개 오프 클립 부분은 각각의 처리 그룹 또는 5,8- 동정을 행 하였다. 그것은 그러나, CO 2 처리가 행동에 미치는 영향을 이해하는 매우 중요합니다. CO 2 마취의 효과가 초파리 melanogaster의에서 조사 된이있는 2 짝짓기를 더 크게했다 및 전반적인 비 마취 남성 또는 남성보다 낮은 짝짓기 성공을 거두었 감기 5 노출을 사용하여 마취 CO에 노출 된 남성. 이 효과는 관찰 모두 마취 실험 당일에 도포했을 때 복구 할 수는 파리 하루 주어진 경우. 그러나이 연구는 하나의 남성 각 여성 5에 제출에만 검사 시험에서 제한되었다. 여성이 때문에 마취에 대한 남성의 적합성에 미묘한 손실의 검출을 허용 할 수 있습니다 남성 간의 경쟁을 허용, 여러 남성 9,10 발생하는보다 현실적인 시나리오입니다. CO 2 마취의 사용은 또한 수있다실내는 성인 D.의 다산과 장수를 줄이기 위해 발견 그들은 우화 직후에 노출되었을 때 처녀를 수집하는 것은 11을 날아 때 일반적인로, melanogaster의. 2 마취를 공동의 대안은 그들에게 염료 4,6,10,12,13과 색깔의 음식을 공급하여 파리를 표시하는 것입니다. 이 염료는 색의 파리가 무색 파리에서, 또는 다른 색으로 표시 파리 구별 될 수 있도록, 파리의 창자를 입력하고 복부를 통해 볼 수 있습니다. 염색 보충 효모 붙여 넣기 (6)를 통해, 또는 새로운 염색 음식 기판 (13)에 노출을 통해, 음식 (12)에 직접 추가되는 : 방법은 어떻게 적용 할 수 다르다. 이러한 마킹 기술이 결합 성능 4,6에 영향을 보여주지 보인다. 그러나, 종이에 직접 성인 D. 같은 식용 색소의 효과를 검토 melanogaster의 수명은 14 강한 감소를 발견했다. 이전 작업은 ALM 초점을 맞추고있다OST 완전히 D.에 melanogaster의 모두 CO 2 마취 5,11 및 착색료 방법 (14)의 효과에 관해서. 현재, CO 2 마취 또는 장 색상의 사용이 다른 초파리의 짝짓기 행동에 영향을 미치는 방법에 대한 약간의 정보가있다. 다음의 연구는 초파리의 세 가지 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D.의 subobscura)의 정합 동작에 CO 2 마취 효과를 평가한다. CO 2에 날아 포집 효과와 두 남성 단일 결합 실험 모두에서 확인 하였다. CO 2의 효과는 다양 D. 밝혀졌다 melanogaster의 5와 2를 공동 노출과 결합 사이의 너무 다른 대기 기간이 시험 하였다. 마취 날개 클리핑에 방법을 표시 대안 : 파리 스테인 음식 염료의 사용도 평가된다.

<table><tbody><tr><td>Plastic tubing</td><td>Fisher Scientific</td><td>TWT-200-061G</td><td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td></tr><tr><td>Fine mesh</td><td>Any haberdashery</td><td>-</td><td>Fine curtain mesh is suitable</td></tr><tr><td>1 ml pipette tips</td><td>VWR</td><td>83007-376</td><td>Various brands of pipette tips would be suitable</td></tr><tr><td>Plastic Vials</td><td>Sarstedt</td><td>58.49</td><td>Larger vials or bottles could also be used.</td></tr><tr><td>Cotton Balls</td><td>Lewis Medical Solutions</td><td>28170</td><td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td></tr><tr><td>Blue Food colouring</td><td>Thesugarcraftcompany</td><td>-</td><td>Other dye colours and brands can have variable results.</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Tank</td><td>BOC</td><td>BOC 40VK</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie Markers</td><td>Steadtler</td><td>Lumocolor 313 S</td><td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td></tr><tr><td>Stopwatch</td><td>Salter</td><td>SL3920</td><td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td></tr></tbody></table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

초파리를 이용하여 결합 실험은 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여했다. 실험은 종종 시험에서 개인을 구별하는, 간단 간단하고 저렴한 방법이 필요합니다. 이에 대한 표준 기술은 각 비행 클리핑 CO 2 마취 후 라벨 또는 날개입니다. 그러나, 이는 침입 성 및 동작에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 다른 기술은 파리를 식별하기 위해 채색을 사용했다. 이 문서에서는 식용 색소를 사용하여, 그들을 개별적으로 실험 내에서 확인할 수 있습니다 라벨링 초파리을위한 간단하고 비 침습적 방법을 제안한다. 이 방법은 두 남성이 여성과 짝짓기 경쟁 시험에서 사용된다. 염색 빠르고 쉽게 식별을 허용했다. 시험 세 종간 착색의 강도에 약간 차이가 있지만,이 있었다. 데이터는 염료를 보여주는 제시 초파리 멜라노에서 CO 2보다 짝짓기 행동에 낮은 영향을gaster. CO 2 마취의 영향은 D.으로, 초파리의 종에 의존 도시 pseudoobscura 및 D. subobscura, D. 반면 영향을 보여주는 melanogaster의 남성은 짝짓기 성공을 감소했다. 제시된 방법은 염료 실험 광범위한 설계에도 적용 가능하다.

두 남성 짝짓기 시험 - 2 마취 짝짓기 행동에 CO의 효과 CO 2의 마취 효과의 변화를 설명하는 것으로 최상의 모델은 요소로 (D. D.의 pseudoobscura과의 subobscura 서로간에 차이가 없었다로 융합)와 종을 함유 하였다. D.에서 pseudoobscura 및 D. subobscura 두 남성 시험 (Z 1589 = 0.087, P = 0.931)에서 짝짓기 성공에 CO 2 마취의 유의 한 효과가 없었다. D. 들어 melanogaster의, 2 마취를 CO에 노출 된 남성은 상당히 낮은 짝짓기 성공 (Z1,589 = 2.467, P = 0.014)을했다. 더 큰 효과 종 및 치료 (χ 2 1589 = 6.83, P = 0.009) 사이에 상당한 상호 작용 D. 때 들키지이 있었다 melanogaster의 컬렉션에서 가스에 노출 또는 일일 시험 (표 1) 전 하였다. Howev어, D. melanogaster의 남성은 CO 2의 효과를 보여주지 않았다 2 이일 실험 시험 전에 CO에 노출. 두 남성 짝짓기 시험 - 짝짓기 행동에 장 채색의 효과 모델 단순화는 식용 색소의 유의 한 효과는 세 가지 종 (&gt; 0.1 P) 중 어떤 발견되고 있었다. 치료 또는 가스 상태가 분석에 포함되었을 때 이들은 (P는&gt; 0.1) 또한 유의하지 않았다. 치료법에 걸쳐 컬러 파리 성공적인 교배 비율은 표 2에 나타낸다. 파리 사이 착색 차가 컬러 및 착색 음식도 1에서 볼 수있다. 장내 식용 색소 강도 D. 컸다에 보관 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 단일 결합 실험 - CO에게 마취 m 2를 사용하는 효과운 전압 동작 CO 2 마취 최근 등장 성인 수집하는 데 사용 된 세 가지 경우 중 어느 한 종을위한 정합 지연 시간의 차이는 없었다. 효과는 D.의 짝짓기 기간 동안 발견 subobscura는 그것은 2 이일 결합 시험 (; 표 2 그림 2와 3) 전에 CO에 노출되었을 때. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> 그림 1. 컬러 및 비 컬러 플라이 식품 (A)의 유리 병을 보여주는 사진과 남성 D. 장내 착색의 힘 Subobscura (B). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> 남성은 마취시키다 때, 싱글 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 대기 시간 그림 2. 평균 95 % 신뢰 구간D (조명 막대)하거나하지 마취 (어두운 바)를 할 때 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집 할 때 남성이 (어두운 막대) 마취 (조명 막대)을 마취하거나하지 된 그림 3. 평균 및 단일 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 기간에 대한 95 % 신뢰 구간,. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 치료 </td><td> 종 </td><td> 번호 시험 </td><td> 번호 파리 색깔의 짝 그 </td><td> p- 값 </td><td> 번호 파리 가스실에 어울리게 그 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2 컬렉션 </td><td> D. 멜 </td><td> 73 </td><td> (36) </td><td> (1) </td><td> (27) </td><td> 0.0344 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td>79 </td><td> (41) </td><td> 0.8221 </td><td> (44) </td><td> 0.3682 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (71) </td><td> (40) </td><td> 0.3425 </td><td> (33) </td><td> 0.6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 18 시간을 CO에 노출 이전 </td><td> D. 멜 </td><td> 57 </td><td> (28) </td><td> (1) </td><td> (19) </td><td> 0.0163 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (65) </td><td> (32) </td><td> (1) </td><td> (31) </td><td> 0.8043 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (68) </td><td> (38) </td><td> 0.3961 </td><td> (35) </td><td> 0.9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 이일을 공동 노출. </td><td> D. 멜 </td><td> (56) </td><td> (19) </td><td> 0.0222 </td><td> (32) </td><td> 0.3497 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (70) </td><td> (32) </td><td> 0.5504 </td><td> (33) </td><td> 0.7202 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (56) </td><td> (29) </td><td> 0.8939 </td><td> (26) </td><td> 0.6889 &lt;/ TD&gt; </tr></tbody></table> 표 심사 모든 종과 치료의 맞은 편에 두 남자의 선택 실험 1. 결과. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 종 </td><td> 특성 </td><td> DF </td><td> t 값 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. melanogaster의 </td><td> 대기 시간 </td><td> (58) </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (58) </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 pseudoobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (109) </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (109) </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 subobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (83) </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (83) </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> 단일 결합의 결합 대기 시간에 CO 2 마취에 컬렉션의 효과를 검사 실험 및 기간에서 표 2. 결과. 시험은 초파리의 세 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)에서 수행 하였다.

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Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.8K 조회수.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

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A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

연구

행동분석학

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

신경과학

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에<em&gt; 초파리</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but effective method to observe and document the behavior or morphology of flies. Flies were placed in a translucent observation chamber c.a. &#216;15 x 5mm (no food inside) or &#216;15 x 12 mm (with an 8 mm-high piece of food inside). After covering with an ultraviolet (UV)/clear filter with high light transmittance, the chamber was placed under a 5-50x zoom stereo microscope, and mini light-emitting diode (LED) video lights were placed on both sides of the microscope to illuminate the chamber to obtain uniform, soft, bright, and nearly shadow-free light. Then, a compact digital camera with 3-5x optical zoom, which can record 1080 P high-definition or higher resolution video (at a frame rate of &#8805;30 fps), was connected to the eyepiece of microscope through a bracket, and photographs or videos were taken through the eyepiece. By adjusting the zoom knob of the zoom stereo microscope, it was very easy to track the flies and take panoramic or detailed close-up images as needed, while the camera recorded everything under the microscope. Because the flies can stay at any position in the chamber, they can be observed and recorded from all directions. The photographs or videos taken are of good image quality. This method can be used both for scientific research and teaching.

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

This protocol describes how to make a simple adult Drosophila behavior observation chamber, and how to take high-definition photographs/videos of the morphology or behavior of different types of fruit flies in the observation chamber through relatively simple and affordable methods.

드로소필라 성인의 행동 연구를 위한 조정 가능한 고화질 화상 진찰 시스템

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

Drosophila 그루밍 행동의 부량

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

초파리 애벌레 동작 Optogenetic 후 각 신경의 자극에 대 한 응답 추적

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Behavioral Assays for Optogenetic Manipulation of Neural Circuits in Drosophila melanogaster

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study introduces easy-to-implement setups for applying optogenetic methods in Drosophila melanogaster. Two optogenetic tools, CsChrimson, a red-light-activated cation channel, and GtACR2, a blue-light-activated anion channel, were employed in four experimental approaches. Three of these approaches involve single-fly experiments: (1) a blue-light optogenetic thermotactic positional preference assay targeting temperature-sensitive heating cells, (2) a red-light optogenetic positional preference assay activating bitter sensing neurons, and (3) a proboscis extension response assay activating the sweet-sensing neurons. The fourth approach (4) is a fly maze setup to assess avoidance behaviors using multiple flies. The ability to manipulate neural activity temporally and spatially offers powerful insights into sensory processing and decision-making, underscoring the potential of optogenetics to advance our knowledge of neural function. These methods provide an accessible and robust framework for future research in neuroscience to enhance the understanding of specific neural pathways and their behavioral outcomes.

This paper presents methods for optogenetic manipulation in Drosophila melanogaster, utilizing CsChrimson and GtACR2 to activate and silence specific neurons. Four experiments are described to utilize optogenetics to explore thermotactic and gustatory behaviors, providing insights into the underlying neural mechanisms governing these processes.

Drosophila melanogaster에서 신경 회로의 광유전학적 조작을 위한 행동 분석

Optogenetics has become a fundamental technique in neuroscience, enabling precise control of neuronal activity through light stimulation. This study ...

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동

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