우리는 그의 설명 작업 데니스 마티아스을 인정하고 싶습니다. 이 작품은 NIH T32AI 106704-01A1와 오하이오 주립 대학의 장기 이식, 관류, 엔지니어링 및 재생을위한 T 플레쉬 기금에 의해 지원되었다.

모든 절차는 기관 동물 관리 및 동물 애호 실험실 동물의 관리 및 사용 (IACUC)의 국가 연구위원회 설명서의 지침에 따라 수행되었다 오하이오 주립 대학 IACUC위원회의 승인을 겪었다. 1. 초기 셋업 <ol><li> 셋업 수술 현미경 및 운영 극장 (그림 3, 그림 4). 마취를 유지하고 생체 신호를 모니터링하는 등 모든 장비를 켭니다. 전기 수술 장치와 온난화 패드를 켭니다. 수술대 근처 주입 펌프를 배치합니다. <ol><li> 마취 주사기 흡입 (분자량 184.5)에 대해 액체 10 mL의 이소 플루 란을 작성하고, 마취 장치에 배치. </li><li> 셋업 혈액 샘플이 처리 될 원심 근처 200 ㎖의 수술대에 가까운 액체 질소 용기 다른. </li><li> 포스수술기구, 4-0 및 7-0 꼰 실크 봉합사 멸균 면봉, 4 × 4 부직포 스폰지, 5 ㎖ 주사기와 수술대 근처 27 게이지 인슐린 주사기 ition. </li></ol></li><li> 이소 플루 챔버를 준비 충분한 이소 플루 란 마취를 유도 전달 시스템에 주입되도록한다. </li></ol> 마취 2. 유도 <ol><li> 다음과 같은 개인 보호 장비 (PPE)에 넣어 쥐를 취급하기 전에 : 수술 용 마스크, 수술 용 장갑, 일회용 가운. </li><li> 쥐 무게와 무게를 기록한다. 참고 : 스프 라그 돌리 쥐가 사용되어야한다. </li><li> 마취 챔버에서 쥐를 놓고 이소 플루 란과 산소를 ​​켭니다. 이소 플루 챔버를 사용하여 마취를 유도한다. </li><li> 청소기 노출 (그림 5)를 허용하는 전기 머리 깎기를 사용하여 동물의 복부 머리를 클립. </li><li> additio의 이소 플루 란 챔버에서 동물 다시 배치최종 일분. 마취의 깊이를 확인하기 위해 발가락 핀치를 수행합니다. </li></ol> 3. 지원 절차 <ol><li> 동물의 코 콘에서 코와 온난화 패드에 구속 또는 테이프로 고정 된 사지를 가진 쥐를 놓습니다. </li><li> 이상 250g 무게 % 동물 200 내지 250g 무게 4의 동물에 대해 3.6 %로 마취로 마취 전달 시스템 노우즈 콘 및 이소 플루 란 마취를 이용하여 계속. 발가락 핀치와 피부 핀치를 수행하여 마취의 깊이를 확인합니다. </li><li> 예리한 가위 (도 6)를 사용하여 피부를 통해 칼 모양하는 치골에서 중심선 복부 절개를. </li><li> 칼 모양의 방광이나 장 손상되지 않도록 복부 돌보는를 입력 치골에서 원격 교육 알바를 따라 복막에 절개를합니다. 간은 또한 전방으로 칼 모양의 과정 가까운 복막에 스틱으로 이전이 아칸소에서 복벽을 절개에 릴리스되도록개. </li><li> 피부를 통해 가로 절개와 간 우엽의 열등한 국경의 수준에서 복막을 확인합니다. </li><li> 이상 250g 무게 동물을위한 200 % 사이 250g 2 무게 동물 1.6 %로 마취를 줄이십시오. </li><li> 곡선 모기 클램프를 사용하여 칼 모양 후퇴 프로세스. </li><li> 중심선으로부터 멀리 떨어져 가능한 리브 당기는 찾는 리브 견인기 (도 7). 횡격막 낫 모양, 그리고 위의 인대를 잘라. 적신 멸균 면봉을 사용하여 간을 올립니다. </li><li> 간이에 접근하기 위해 추가 인대 필요 잘라. 식염수에 적신 거즈 (그림 7)과 내장 회전을 수행합니다. </li><li> 날카 롭거나 무딘 절개를 사용하여 포털 폐문 위에 놓여 느슨한 결합 조직을 제거합니다. 포털 정맥의 길이를 덮는 느슨한 결합 조직을 제거합니다. </li><li> 느슨한 결합 t을 밀어 집게를 사용하여창을 왼쪽 포털 정맥, 동맥 및 담즙 덕트에 문제 후방 및 4-0 포츠 봉합을 배치하지만 (그림 8) 아래 식은 죽 먹기가 없습니다. </li><li> 우측 신장의 약 수준으로 제공 포털 정맥에 후방 분기를 덮는 느슨한 결합 조직을 취소합니다. 이 정맥 삽관에 사용됩니다. </li><li> 인슐린 주사기 (도 9)과 대정맥 (IVC)에서 혈액 0.5ml를 그리기. 12 분 동안 135 XG에 작은 바이알 원심 혈액 0.5 mL로 놓는다. 혈청을 그리는 시도합니다. <ol><li> 135 × g으로 3 분 - 뚜렷한 선 적혈구 혈청 사이 알 수없는 경우, 추가로 2 원심 분리하려고. 알라닌 - 아미노 전이 효소 (ALT)에 대한 유리 병에서 혈청과 장소를 그립니다. 스냅 액체 질소에 직접 배치하여이 표본을 동결. </li></ol></li><li> 정맥에 사용됩니다 7-0 봉합과 정맥에 가까운 장소의 두 조각을 잘라기. 내측까지 가능한이 혈관 주변의 제 7-0 루프를 놓는다. 이 루프를 묶은 곡선 모기 클램프 (도 10)를 사용하여 후퇴 사용. 포털 정맥과의 교차점 근처에 삽관에 사용되는 하나 개의 넥타이를 배치됩니다 정맥에 두 번째 7-0 루프를 놓고, 그러나 아래 식은 죽 먹기가 없습니다. </li><li> 시약 3 ㎖와 함께 5 ㎖ 주사기와 주입 펌프를 준비한다. 프라임 튜브. </li><li> 미세 수술 클램프를 사용하여 말초 포털 정맥을 클램프. 참고 : 정맥이 삽관을 위해 절개 할 때 출혈을 줄일 수 있습니다. </li><li> 7-0 체류 봉합 작은 미세 수술 가위를 사용하여 문맥과의 교점 사이의 정맥에 0.5 mm 구멍을 잘라. 왼쪽 포털 정맥 시스템 (그림 11, 그림 12) cannulate에 27-0 카테터를 사용합니다. 왼쪽 및 오른쪽 포털 정맥의 분기점을지나 카테터를 삽입합니다. </li><li> infus에 의해 정맥의 위치를 ​​확인생리 식염수 1 ㎖를 보내고 그리고 희게하는 간 왼쪽 측면 및 중간 엽위한 시계. 수동으로 카테터 오른쪽 포털 정맥의 이륙 과거는 아니지만 중간 엽를 공급 포털 정맥의 이륙을 넘어 확인합니다. </li><li> 포츠 봉합 아래 식은 죽 먹기와 허혈 시간을 시작합니다. 정맥 주위에 7-0 봉합 제자리에 고정 및 말초 문맥에서 클램프를 제거 27-0 카테터를 조입니다. </li><li> 주입 펌프를 사용하여 폴리에틸렌 글리콜 - 슈퍼 옥사이드 디스 뮤타 아제 (SOD-PEG, 0.00067 g / ㎖)의 투여를 시작한다. 허혈 시간의 시작에 가능한 한 가깝게 주입을 시작합니다. </li></ol> 4. 모니터링 <ol><li> 주입에 걸쳐 동물의 생체 신호를 모니터링하기 위해 계속합니다. 0.9 % 생리 식염수 2 mL를 15 분에 걸쳐 0.9 % 생리 식염수에 용해 된 PEG-SOD 2 ㎖ (0.00067 g / ㎖)를 제공한다. </li></ol> 5. 재관류 <ol><li> 한 시간의 I의 처음부터 통과 할 수 있도록 허용schemic 시간. 이 따뜻한 허혈 시간의 1 시간이다. </li><li> 포츠 봉합사를 제거합니다. 27-0 카테터를 제거합니다. 정맥 주위에 7-0 봉합을 식은 죽 먹기. 시간을합니다. 이 재관류의 시간을 표시합니다. </li></ol> 6. 계속 샘플링 <ol><li> 120 분 후 재관류에 IVC에서 혈액 0.5ml를 그리기. 적혈구 용혈 방지하기 위해 천천히 피를 그립니다. 천천히 유리 병에 피를 똑. 하대 정맥에서 출혈하는 것은 각각의 혈액 무승부 제어되어 있는지 확인합니다. <ol><li> 출혈이 계속되면 멸균 면봉이나 거즈에서 1cm 섹션 컷에 의해 작은 1cm로 부드러운 압력을 적용합니다. </li></ol></li><li> 12 분 동안 135 XG 원심 분리기. 135 × g으로 3 분 - 충분한 분리가 달성되지 않는 경우, 추가로 2 시도. </li><li> ALT 뒷부분 처리 바이알에 혈청의 절반을 놓는다. 스냅 이러한 표본을 동결. </li></ol> 7. 안락사 <ol><li> 쥐가 마취 여전히 동안 IVC와의 컷uperior 베나 카바 (SVC)과 혈액의 흐름, 호흡과 심장 박동을 중지 할 때까지 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 다이어프램 절개 및 원형 조리개를 절개하여 복강에 남아 간 접속 부가 결합 조직을 절개하여 간단한 절제술을 수행한다. 복강으로부터 간을 제거한다. </li><li> 간 우엽에서 간의 왼쪽과 중간 엽에서 4 개 개의 샘플과 4 개 개의 샘플을 가져 가라. 샘플은 가능한 한 커야과 크기 만 사용할 간 조직의 양에 의해 제한된다. 작은 레이블 유리 병에 이들을 배치하고 액체 질소에 동결 스냅. 조직 아데노신 삼인산 (ADP), 말론 디 알데히드 (MDA)과 글루타치온 (GSH) 나중에 처리를 위해 다음을 사용합니다. </li></ol> 8. 포스트 실험 분석 <ol><li> 진단 키트를 사용하여 글루타치온 (GSH), 말론 디 알데히드 (MDA)와 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT) 간 조직의 활동과 혈청 샘플을 확인제조업체의 지침에 따라. </li><li> 용해 완충액으로 간 조직을 균질화하고, 브래드 포드 분석법을 이용하여 정량화. 벽개 capase -3- 액틴에 대한 항체를 사용 도데 실 황산나트륨 - 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 및 면역 블롯에 의하여 조직 용 해물을 분석한다. 공개 소프트웨어로 수행 웨스턴 블랏을 정량화. </li></ol>

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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylene+glycol-superoxide+dismutase+inhibits+lipid+peroxidation+in+hepatic+ischemia/reperfusion+injury.">Polyethylene glycol-superoxide dismutase inhibits lipid peroxidation in hepatic ischemia/reperfusion injury.</a> Crit Care. 3, 127-130 (1999).</li></ol>

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이러한 일련의 실험이 증명이 대조군에 비해 왼쪽으로 PEG-SOD 및 ALT의 방출에 크게 감소되었다 중간 엽, 세포막의 지질 과산화 (MDA)와 글루타치온의 유지 (GSH)의 주입 (생리 식염수 ). 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT)를 포함한 간 조직 트랜스 아미나은 간세포 손상의 마커를 설정됩니다. 좌측 엽 PEG-SOD 주입되는 ALT의 감소는 PEG-SOD의 보호 효과를 시사한다. 증가 된 조직 MDA는 지질 과산화를 증가 나타냅니다 산화 스트레스 및 조직 손상의 마커 간주됩니다. 활성 산소의 과잉 생산은 MDA (26)의 생산의 증가를 야기한다. PEG-SOD 주입 한 동물의 좌측 및 중간 엽 조직에서 MDA의 현저한 감소는 PEG-SOD의 보호 효과를 보여준다. 이 PEG-SOD는 손상으로부터 세포를 보호하는 현재의 이해와 일치부분적으로 감소 된 반응성 산소 종 (27)에 의해 발생. 또한, 활성 산소 종의 존재 하에서, 글루타치온 디설파이드 글루타티온 (GSH) (28)로 감소된다. 상기 PEG-SOD 주사 간 좌측 및 중간 엽에서 GSH에서 유지 PEG-SOD의 보호 효과를 강화한다. 또한 허혈 재관류 손상에 노출 된 조직에서, 절단 된 카스파 제 3, 아폽토시스의 생성물이 증가한다는 증명된다. PEG-SOD 처리 좌측 엽 절단 된 카스파 제 -3의 감소는 PEG-SOD는 세포 자멸의 감소에 이르게 것을 시사한다. 과산화물 디스 뮤타 아제 (SOD)의 활성 산소 종의 중독에서 중요한 효소이다. 효소는 과산화수소와 물로 두 수퍼 옥사이드 음이온의 전환을 촉매한다. 효소 카탈라제는 프로세스 (25)를 완성 물 및 산소를 과산화수소로 변환한다. 의 반감기네이티브 SOD 공액 폴리에틸렌 글리콜 - 슈퍼 옥사이드 디스 뮤타 아제 (SOD-PEG)의 개발까지 실험 모델에서의 사용을 제한했다. 폴리에틸렌 글리콜에 컨쥬 게이션 SOD의 14 시간을 6 분에서의 반감기를 증가시킨다. 구엔은 등. 전신 배달 (29)를 사용하여 쥐 모델에서 간 허혈에서 지질 과산화를 완화 할 수있는 능력을 보여 주었다. 기술 여기에 설명 된 일부는 이전에 문헌에 기술 된 잠재적 인 수정의 다양한있다. 모델에 사용 된 분자에 따라 흡입 (11), 경막 외 주입 (12), 복강 내 주사 17, 18, 21, 22, 정맥 내 투여 10, 14, 15을 사용하여 전달 된 <su주연 장간막 정맥 내로 8&gt; P, 19, 23, 24 또는 주사. 이 프로토콜에서 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 가장 중요한 것은 문맥의 삽관입니다. 치료는 정맥을 잘라 구멍이 너무 크지 않도록주의해야합니다. 조직은 매우 탄력적 및 정공은 자체적으로 확대된다. 우리는 미세 수술 가위로 0.5 mm 인 구멍을 절단하여 시작하는 것이 좋습니다. 캐 뉼러는 손 절차의 일부를 수행하려는 경우보다 민첩성 허용하는기구를 사용하여 구멍을 통해 공급 될 수있다. 처음에 캐 뉼러를 공급하면서 또한, 정맥의 뒤쪽 벽에 구멍을 파고 않도록 좌우 포털 정맥의 분기점을 향해 직접 겨냥한다. 캐뉼라 팁 분기점에 도달하면, 그 다음 특정 왼쪽 정맥 내로 공급 될 수있다동맹국. 정맥은 왼쪽과 중간 엽을 모두 공급하는 왼쪽 포털 정맥에 공급되면, 그 위치는 정맥 내부를 느낌에 의해 수동으로 확인할 수 있습니다. 그 위치는 간장의 공급 세그먼트의 창백 효과를 차가운 생리 식염수를 소량 주입으로보고 확인할 수있다. 쥐의 간 문부 클램프 모델 간 허혈 - 재관류 손상을 입증하기위한 재현하고 안정적인 플랫폼을 제공합니다. 가변 폐문 클램프 모델은 산화 방지제 및 다른 작은 분자가 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14의 보호 효과를 연구하는 연구자들이 사용되어왔다. 변화 점은 혈관 클램프를 포함 할 수 있습니다<html> 담관이 포함되어 있는지의 여부 허혈성 만들어진 세그먼트 ED, 재관류 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18의 기간의 길이, 19, 20, 21. 이 모델은 분자 투여 경로 투여의 영향을 연구하기 위해 사용되는 경우 또한 이기종 8, 10, 11,&quot;&gt; 12, 14, 15, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24. 상술 한 방법에 몇 가지 장점이있다이. 우선, 허혈성 세그먼트 포털 공급 직접 캐 뉼러에 직접 분절 간 전송을 허용 연구중인 약물 물질. 이것은 내부 제어로서 간 다른 돌출부의 이용을 허용한다. 둘째, 분절 간 삽관이 검토되고 분자에 대한 분포의 감소 된 용적을 허용한다. 이러한 접근하여 같은 전신 부작용의 위험을 줄일 물질이. 관심 간 세그먼트에 직접 주입 간 세그먼트의 직접 삽관 전 허혈을 제공하는 물질을 가능하게한다, 내 허혈 후 허혈. 이는 허혈 - 재관류 손상 사이클의 어느 지점에서 분자의 효과를 연구 할 수 있습니다. 허혈성 시간의 증가 길이 가능한 것 간 재생을 연구하는 부상 추가적인 기회의 증가 수준. 이 방법의 몇 가지 제한이있다. 첫 번째는 창업 비용이다. 수술 현미경의 구입은 이미 하나를 가지고 있지 않는 실험실의 중요한 시작 비용이 될 수 있습니다. 이 기술은 현미경없이 어렵거나 불가능할 수있다. 두 번째는 곡선 시간을 배우고있다. 이 절차는 비교적 간단하지만 그것은 연습이 필요하며 만약 초보자가 전문가가되기 위해 절차의 상당수를 필요로 할 것 같다. 요약하면,이 모델은 간 허혈 - 재관류 손상을 연구하기 위해, 재현 간단하고 비용 효율적인 플랫폼을 수 있습니다. 프로토콜에 폴리에틸렌 GL 여기 설명되었지만ycol - 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제, 자유 라디칼 스 캐빈 저 (25), 주입 된이 모델은 간에서 I / R 손상에 미치는 영향을 평가하기 위해 다른 약물 물질의 다양한 주입하는 데 사용할 수 있습니다.

유입 폐색, 간 이식 주요 간 수술, 따뜻한 국소 빈혈의 기간 및 허혈 / 재관류 (I / R) 부상 1에 이르는 재관류의 기간을 필요로한다. 간에서 I / R 손상의 결과는 광범위하게 1, 2, 3 설명하고있다. I의 결과는 / 문헌에 상세히 R 부상을 포함한다 : 반응성 산소 종의 생성을, 호중구 활성화, 쿠퍼 세포, 내피 세포, 수신자와 같은 수용체의 헴 옥 시게나 제 시스템의 활성화 및 활성화 포함한 염증성 캐스케이드의 개시 엔도 텔린과 산화 질소, 핵 인자 κB의 활성화 및 전 염증성 사이토 카인 및 부착 분자의 합성 1, 2, 3 사이의 불균형의 촉진. 이 염증성 이벤트 리터 수도세포 사멸, 괴사, 장기 기능 장애 및 궁극적으로 장기 부전 3 EAD. 나는 / 간 이식 향하는 기관의 R 손상은 초기 이식 손실로 이어질과 한계 장기 부상 3에 더 취약으로 현재 기증자 부족에 기여 할 수 있습니다. 2015 5에서 수행 된 미국 4에서 간 이식 대기 목록에 15,226 잠재적 인 수신자 만 5950 간 이식은 현재이 있습니다. 때문에 장기 가용성이 극단적 인 제한으로 연구 간 I / R 손상이 이식 기능과 기관의 활용을 최적화하기 위해 필요한 탐구. 간 I / R 부상을 연구하는 데 사용 동물 모델 쥐 문부 클램프 모델과 쥐의 간 이식 모델을 포함한다. 현재 사용중인 쥐 문부 클램프 다양한 모델이있다. 가장 일반적인 하나 인 문맥, 간동맥 및 담즙 뒤CT 왼쪽 측면 및 중간 엽이 미세 수술 클립 6, 7, 8, 9, 10, 11, 60 분의 재관류 30 다음 최소 6, 7, 10, 13, 14 및 60 동안 12를 이용하여 고정되어 공급 H 7, 9, 10, 13 (24), (14)가 허용된다. 래트 간 왼쪽 측면 및 중간 엽이 간 실질 (9)의 약 70 %를 포함한다. 허혈 양상을 연구하기위한 일부 프로토콜은 문부 혈관의 간헐적 인 클램핑을 포함또는 폐문 용기 (9), (13)를 클램핑에 의해 유도 된 허혈성 장기간에 뒷다리 종래. 문헌에 기술 된 몇 가지 수정이있다. 첫 번째는 좌측 측면 및 중간 엽 공급 문맥과 간동맥 클램프 있지만 담관 (15)를 제외한다. 제 2 변형은 종래 디비전 16, 17, 18, 19, 20 간문맥, 간동맥 및 담관 클램핑하여 총 간 허혈을 유도하는 것이다. 제 3 변형은 30~60 분 8 오른쪽 로브의 폐문 혈관 클램프를 포함한다. 추가의 변형, 21 간 13에 손상을 유도하기 위해 하나 개 뒷다리의 관다발 클램핑 포함 </suP&gt;. 폐문 클램프 절차에 대한 다양한 접근 방법이도 1a-D에 도시되어있다. 쥐 간 문부 클램프 모델 간 I / R에 다른 분자 및 화합물의 효과를 연구하기 위해 사용되었다. 주연 장간막 정맥 (8)로 흡입 (11), 경막 외 주입 (12), 복강 내 주사 17, 18, 21, 22, 정맥 내 투여 10, 14, 15, 19, 23, 24 또는 주입을 사용하여 전달 된 이들 분자 모델에 사용 따라 . 이 보고서에 포함하여에 설명 된 쥐의 간 문부 클램프의 모델연구중인 약물 물질의 직접 분절 간 전송을 허용 문맥의 곁가지를 통해 허혈성 세그먼트 포털 공급 (도 2), 직접 삽관을 말이지. 우리의 방법은이 경우의 연구 대상 물질의 주입, 페 길화 슈퍼 옥사이드 디스 뮤타 아제, 자유 라디칼 스 캐빈 저 (25), 허혈성 세그먼트에 직접 주입하는 동안, 60 분 동안 왼쪽 측면 및 중간 엽에서 허혈을 유도하는 . 혈액 샘플은 허혈 유도 전에 및 120 분 후 재관류에서 촬영된다. 이 시점에서, 쥐가 희생되고 샘플은 왼쪽과 중간 엽에서 가져옵니다. 또한, 샘플은 내부 제어 역할을 오른쪽 로브에서 촬영된다. 이 방법에 많은 장점이 있습니다. 무엇보다도, 연구중인 약물 물질 직접 허혈성 부분에 주입 될 수있는 볼륨 OF 분포는 전신 순환에 주입 분배의 부피 또는 복강에 비해 상당히 낮다. 또한,이 방법은 감소, 전신 부작용의 가능성을 배제하지 않는다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="674">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Sprague-Dawley Rat&#160;</td>
			<td style="width:196px;">Harlan Sprague Dawley Inc.&#160;</td>
			<td style="width:128px;">200- 250 grams&#160;</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Microscope&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>M500-N w/ OHS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Charcoal Canisters</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SOMNO-2001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane Molecular Weight 184.5&#160;</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pressure-Lok Precision Analytical Syringe&#160;&#160;</td>
			<td>Valco Instruments Co, Inc.&#160;</td>
			<td>SOMNO-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electrosurgical Unit</td>
			<td>Macan&#160;</td>
			<td>MV-7A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Warming Pad</td>
			<td>Braintree Scientific&#160;</td>
			<td>HHP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>SS-MVG-Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>PS-MSTAT-RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane chamber&#160;</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SOMNO-0530LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SurgiVet</td>
			<td>Isotec</td>
			<td>CDS 9000 Tabletop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxygen&#160;</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>98015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">27-0 Micro-Cannula</td>
			<td>Braintree Scientific&#160;</td>
			<td>MC-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rib retractors&#160;</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>INS600240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Glycol - Superoxide Dismutase (PEG-SOD)</td>
			<td>Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td>S9549 SIGMA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GenieTouch</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 0338-0048-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4x4 Non-Woven Sponges&#160;</td>
			<td>Criterion</td>
			<td>104-2411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile Q-Tips</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>1009175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">U-100 27 Gauge Insulin Syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>22-272328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5mL Syringe</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>REF 309603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Braided Silk Suture</td>
			<td>Deknatel, Inc.</td>
			<td>198737LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">7-0 Braided Silk Suture</td>
			<td>Teleflex Medical&#160;</td>
			<td>REF 103-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 mL Arcticle Cryogenic Tube</td>
			<td>USA Scientific&#160;</td>
			<td>1418-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microsurgical Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company&#160;</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Scissors&#160;</td>
			<td>Roboz&#160;</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large Scissors</td>
			<td>S&#38;T&#160;</td>
			<td>SAA-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps - Large Angled</td>
			<td>S&#38;T&#160;</td>
			<td>JFCL-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps - Small Angled&#160;</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>FRAS-15 RM-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clip Applier</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scissors - non micro</td>
			<td>FST 14958-11</td>
			<td>14958-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps - Straight Tip&#160;</td>
			<td>S&#38;T&#160;</td>
			<td>FRS-15 RM8TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large Microsurgical Clip</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>18055-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Microsurgical Clip</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>18055-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Microsurgical Clip</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>18055-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Microsurgical Clip</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>18055-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Other Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company&#160;</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Mosquito Clamps</td>
			<td>Generic&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Analysis&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company&#160;</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alannine aminotransferase (ALT) assay&#160;</td>
			<td>Biovision</td>
			<td>K752-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malondialdehye (MDA) assay&#160;</td>
			<td>Abcam&#160;</td>
			<td>ab118970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glutathione (GSH) assay</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>7030002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antibodies - Cleaved Caspase-3 and Actin&#160;</td>
			<td>Cell Signaling Tecnology</td>
			<td>Antibody 9661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ Software&#160;</td>
			<td>National Institutes of Health&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RIPA Lysis and Extraction Buffer&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>10-188</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method of direct segmental intra-hepatic delivery using a rat liver hilar clamp model

유입 폐색, 간 이식 주요 간 수술, 따뜻한 국소 빈혈의 기간 및 허혈 / 재관류 (I / R) 무수히 많은 부정적인 결과와 부상으로 이어지는 재관류의 기간을 필요로한다. 간 이식 향하는 한계 기관의 잠재적 인 I / R 손상은 감소 장기 가동률에 차 현재 기증자 부족에 기여한다. 중요한 필요가 이식에서 이식 기능에 미치는 영향을 중재하기 위해 간 I / R 부상을 탐험하기 위해 존재한다. 쥐의 간 문부 클램프 모델 간 I / R 손상에 다른 분자의 영향을 조사하기 위해 사용된다. 모델에 따라, 이들 분자는 주변 장간막 정맥 내로 흡입, 경막 외 주입, 복강 내 주사, 정맥 내 투여 또는 주사하여 전달 하였다. 쥐의 간 문부 클램프 모델은 I / R 손상을 완화의 약물 분자의 영향을 연구에 사용하기 위해 개발되었다. describ쥐 간 문부 클램프 용 ED 모델 직접 분절 간 전송을 허용 간문맥의 곁가지를 통해 허혈성 간장 세그먼트 포털 공급 직접 캐 뉼러를 포함한다. 우리의 접근 방식은 연구 대상 물질이 주입되는 시간 동안 60 분 동안 왼쪽 측면과 중앙 로브에 허혈을 유도하는 것입니다. 이 경우, 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 - 페 길화는 (PEG-SOD), 자유 라디칼 스 캐빈 저는, 허혈성 세그먼트에 직접 주입된다. 실험이 시리즈는 PEG-SOD의 주입이 간 I / R 손상에 대한 보호는 것을 보여줍니다. 이 방법의 이점은 전신 부작용의 감소 및 분포의 용적 감소와 그에 허혈성 세그먼트로 분자의 직접적인 주입을 포함한다.

이 실험은 2 개 군의 N = 3 마리씩을 수행 하였다. 세 쥐 간 15 분에 걸쳐 주입 펌프에 생리 식염수 2 ㎖ (NS) 주사 하였다. 세 쥐 간 15 분에 걸쳐 주입 펌프 페 길화 수퍼 옥사이드 디스 뮤타 아제 (SOD-PEG, 0.00067 g / mL)로 혼합 된 생리 식염수 2 ㎖ (NS) 주사 하였다. 상기 프로토콜에 기재된 바와 같이, 혈액 시료는 미리 폐문 클램프 및 120 분 후 재관류로 촬영 하였다. 재관류 네 간 조직 샘플의 120 분의 완료는 좌측 및 중간 엽 네 간 샘플로부터 찍은 후 또한 래트 간 오른쪽 엽에서 촬영 하였다. 혈청 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT)의 사전 폐문 클램프 제어 120 분 후 재관류 (NS) 및 실험 (PEG-SOD) 동물에서 측정 하였다. 제어 ALT 수준 사이에는 유의 한 차이가 있었다 (NS)동물 사전 폐문 클램프 및 120 분 후 재관류시. ALT 제어 레벨 (NS) 및 실험 동물 (PEG-SOD) 120 분 (도 13a) 사이에 큰 차이가 있었다. 티슈 말론 알데히드 (MDA)의 제어부 (NS) 및 실험 (PEG-SOD) 간 좌우 돌출부 모두의 동물에 대해 측정 하였다. 제어 주입 (NS) 실험 주사 (PEG-SOD)와 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프)에서 MDA 조직에는 큰 차이를 설명하지 않는다. 제어 분사 좌엽 (포스트 폐문 클램프 재관류) 조직 MDA (NS)의 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프) p &lt;0.001보다 상당히 다르다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 및 재관류) 실험 주사 (PEG-SOD) p &lt;0.005 (도 13B)에 비해 제어 주입 (NS)와 조직 MDA 상당히 상이한 레벨을 갖는다. 티슈 글루타티온 (GSH)을 측정 및 제어 주입 (NS)을 가진 티슈 글루타티온 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프)이었다ND 실험 주입 (PEG-SOD)는 큰 차이를 설명하지 않는다. 제어 분사 좌엽 (포스트 폐문 클램프 재관류) 조직 GSH (NS)는 제어 주입 (NS) p &lt;0.05 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프)보다 상당히 다르다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 및 재관류) 실험 주사 (PEG-SOD) p &lt;0.005 (도 13C) 대 제어 주입 (NS)와 티슈 글루타티온 농도의 유의 한 차이가있다. 웨스턴 블롯은 대조군 동물의 우측 및 좌측 엽을 비교 수행 하였다 보여 증가 카스파 제 -3 폐문 클램프 및 재관류 (도 13D) 후 좌측 엽 절단. 두번째 웨스턴 블롯 제어 및 PEG-SOD (도 13E)로 처리 된 동물의 좌측 엽을 비교 하였다. 이 PEG-SOD로 치료 동물의 간 조직에서 쪼개진 카스파 제 -3 감소하는 방법을 보여줍니다. 농도계는 demonstra을 수행 하였다절단 된 카스파 제 -3 간 조직에서의 레벨이 상당히 대조 동물 (도 13F)의 바로 좌측 엽 비해 증가된다 팅. 생리 식염수 주입 페그 SOD 주입 실험 동물의 좌측 엽 간 조직 및 대조 동물의 좌측 엽 간 조직을 비교할 때, 농도계 동물에 비해 PEG-SOD 처리 동물에서 절단 된 카스파 제 -3을 크게 저하 보여 제어부 (도 13G)로 처리 하였다. <img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig1.jpg" /> 그림 1 : 해부학 삽화. 쥐의 간 A. 해부학 그림. 쥐의 간 B. 해부학 그림. 간장의 왼쪽과 중간 엽에 포털 꽃자루가 고정된다. 왼쪽과 중간 엽은 허혈성 있습니다. C. 해부학쥐의 간의 그림입니다. 좌측 엽 포털 척추 경은 클램프된다. 왼쪽 엽은 허혈성입니다. 쥐의 간 D. 해부학 그림. 오른쪽 로브 포털은 척추 경 고정되고 오른쪽 로브 허혈성이다. <img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig2.jpg" /> 그림 2 : 해부학 삽화. 포털 쥐의 간 해부학 그림은 정맥 곁가지를 통해 유관. 간 좌측 및 중간 엽 포털 척추 경을 봉합에 의해 포위되고, 미세 혈관 클램프는 관다발 주위에 체결하기 위해 사용되었다. 왼쪽과 중간 엽은 허혈성 있습니다. <img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig3.jpg" /> 그림 3 : 장비 셋업. 이 그림은 일을 보여줍니다<html> 전자 악기 설정합니다. <img alt="그림 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig4.jpg" /> 그림 4 : 수술실 셋업. 이 그림은 수술실 설정을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig5.jpg" /> 그림 5 : 복부 헤어의 트리밍. 이 그림은 복부 머리의 트리밍을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 로드 / 54729 / 54729fig6.jpg &quot;/&gt; 그림 6 : 고정화 및 피부 절개. 이 그림은 쥐의 피부 절개의 고정을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig7.jpg" /> 그림 7 : 늑골 견인기 배치 및 안구 내용 제거술. 이 그림은 늑골 견인기 배치 및 내장 적출을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig8.jpg" /> 그림 8 : 장소<html> 봉합의, 표준. 이 그림은 봉합의 위치를 ​​보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig9.jpg" /> 그림 9 : 하대 정맥에서 혈액 그리기. 이 그림은 하대 정맥에서 채혈을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig10.jpg" /> 그림 10 : 정맥 지점은 오프 묶여 철회. 분기 묶었 및 수축 된 지정 맥이 그림은 보여줍니다.<html> ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig10large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt; 검색이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig11.jpg" /> 그림 11 : 캐 뉼러의 프로세스. 이 그림은 삽관의 과정을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig11large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig12.jpg" /> 그림 12 : 캐 뉼러. 이 그림은 삽관을 보여줍니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig12large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 내용 &quot;FO : 유지 - together.within 페이지 =&quot;1 &quot;&gt; <img alt="그림 13" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig13.jpg" /> 그림 13 : 대표 결과 : 쥐 폐문 클램프 모델을 사용하여 페 길화 수퍼 옥사이드 디스 뮤 타제의 직접 분절 간내 배달. NS 정상 식염수 =. PEG-SOD = 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 - 페 길화, ALT = 알라닌 아미노기 전이 효소, MDA는 말론 디 알데히드 =. A. 혈청 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT 뮤 / mL)로 미리 폐문 클램프 및 120 분 후 재관류를 비교. 제어부 (NS) 전 문부 클램프 제어 120 분 후 재관류시 (NS) (p &lt;0.001) 사이의 유의 한 차이가있다. 120 분 후 재관류 (p &lt;0.05)에서 제어부 (NS)과 실험군 (PEG-SOD) 사이에 상당한 차이가있다. 학생의 T-테스트가 사용되었다. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. 제어 주입 (NS)는 오른쪽으로 로브 (비 폐문 클램프)에 B. 티슈 말론 디 알데히드실험 D 주사 (PEG-SOD)는 큰 차이를 설명하지 않는다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 재관류) 제어 주입 (NS)와 티슈 말론 디 알데히드 바로 로브 (비 폐문 클램프) p &lt;0.001보다 상당히 다르다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 및 재관류) 실험 주사 (PEG-SOD) p &lt;0.005 대 제어 주입 (NS)와 티슈 말론 상당히 상이한 레벨을 갖는다. 학생의 T-테스트가 사용되었다. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. 제어 주입 (NS) 실험 주사 (PEG-SOD)과 C. 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프)의 조직 글루타티온은 유의 한 차이를 설명하지 않는다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 재관류) 제어 주입 (NS)와 티슈 글루타티온 제어 주입 (NS) p &lt;0.05 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프)보다 상당히 다르다. 좌엽 (포스트 폐문 클램프 재관류)을 제어 조직 injectio과 글루타티온 상당히 상이한 레벨을 갖는실험 주입 대 N (NS) (PEG-SOD) p &lt;0.005. 학생의 T-테스트가 사용되었다. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. D. 웨스턴 블롯은 대조군 동물의 오른쪽 로브 (비 폐문 클램프) 대 좌측 엽 (포스트 폐문 클램프 재관류) (생리 식염수)의 간 조직에서 절단 된 카스파 제 -3 증가 입증. E. 서양 오점을 보여주는 제어 (생리 식염수)로 처리 동물에 비해 PEG-SOD로 치료 동물의 간 조직에서 쪼개진 카스파 제 -3 감소했다. 절단 된 카스파 제 -3 간 조직에서의 F. 레벨이 크게 후 폐문 클램프 재관류 동물 (p &lt;0.05) 증가된다. 학생의 T-테스트가 사용되었다. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. G.은 (PEG-SOD 주입) 실험 동물의 좌측 엽 간 조직 및 (생리 식염수 주입) 대조군의 좌엽의 간 조직과 비교에서, 쪼개진 카스파 제 -3이 크게 저하제어 (생리 식염수)로 처리 동물에 비해 PEG-SOD로 치료 imals. 학생의 T-테스트가 사용되었다. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다.

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Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

고유 한 쥐의 간 문부 클램프 모델은 허혈 - 재관류 손상을 완화의 약물 분자의 영향을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 직접 간 전송을 허용, 포털 정맥의 지점을 통해 허혈성 간 세그먼트 포털 공급의 직접 삽관이 포함되어 있습니다.

쥐 간 문부 클램프 모델을 사용하여 직접 분절 인트라 간 납품 방법

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

14.0K 조회수.  The Ohio State University Wexner Medical Center.  고유 한 쥐의 간 문부 클램프 모델은 허혈 - 재관류 손상을 완화의 약물 분자의 영향을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 직접 간 전송을 허용, 포털 정맥의 지점을 통해 허혈성 간 세그먼트 포털 공급의 직접 삽관이 포함되어 있습니다. 

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Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, T2D results in elevated blood glucose levels. The "gold-standard" in assessing insulin sensitivity is a hyperinsulinemic-euglycemic clamp or insulin clamp. In this procedure, insulin is infused at a constant rate resulting in a drop in blood glucose. To maintain blood glucose at a constant level, exogenous glucose (D50) is infused into the venous circulation. The amount of glucose infused to maintain homeostasis is indicative of insulin sensitivity. Here, we show the basic clamp procedure in the chronically catheterized, unrestrained, conscious rat. This model allows blood to be collected with minimal stress to the animal. Following the induction of anesthesia, a midline incision is made and the left common carotid artery and right jugular vein are catheterized. Inserted catheters are flushed with heparinized saline, then exteriorized and secured. Animals are allowed to recover for 4-5 days prior to experiments, with weight gain monitored daily. Only those animals who regain weight to pre-surgery levels are used for experiments. On the day of the experiment, rats are fasted and connected to pumps containing insulin and D50. Baseline glucose is assessed from the arterial line and used a benchmark throughout the experiment (euglycemia). Following this, insulin is infused at a constant rate into the venous circulation. To match the drop in blood glucose, D50 is infused. If the rate of D50 infusion is greater than the rate of uptake, a rise in glucose will occur. Similarly, if the rate is insufficient to match whole body glucose uptake, a drop will occur. Titration of glucose continues until stable glucose readings are achieved. Glucose levels and glucose infusion rates during this stable period are recorded and reported. Results provide an index of whole body insulin sensitivity. The technique can be refined to meet specific experimental requirements. It is further enhanced by the use of radioactive tracers that can determine tissue specific insulin-stimulated glucose uptake as well as whole body glucose turnover.

The hyperinsulinemic-euglycemic clamp is the "gold standard" for the assessment of insulin action. Insulin is infused at a constant rate stimulating glucose uptake. The amount of exogenous glucose infused to counter this drop is indicative of insulin sensitivity. Here the procedure is performed on a conscious, unrestrained rat.

의식 랫에서 인슈린 과다 - Euglycemic 클램프

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

연구

의학

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

고립의 방법<em&gt; 전의 VIVO</em쥐 모델에서&gt; 폐 관류 : 쥐 EVLP 프로그램 개발에서 교훈을

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

쥐에이 dimethylnitrosamine 유도 된 간 섬유화 모델

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage Renal Disease with high risk of death for cardiovascular events. Moreover, recent clinical studies have shown that renovascular structure and function may have a great impact on functional renal recovery after surgery. Here, we describe a protocol for the delivery of drugs into the renal artery of rats. This procedure offers significant advantages over the frequently used systemic administration as it may allow a more localized therapeutic effect. In addition, the use of rodents in pharmacodynamic analysis of preclinical studies may be cost effective, paving the way for the design of translational experiments in larger animal models. Using this technique, infusion of rat recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) protein in rats has induced activation of VEGF signaling as shown by increased expression of FLK1, pAKT/AKT, pERK/ERK. In summary, we established a protocol for the intrarenal delivery of drugs in rats, which is simple and highly reproducible.

The administration of drugs for recovery of kidney function requires control of the localization and distribution of the therapeutic compound. Here, we describe in detail a simple technique for intrarenal delivery of drugs in rats. This procedure may be easily performed with no mortality and high reproducibility.

쥐의 신장에 생물의 혈관 배달

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep learning curve. The introduction of the cuff technique for anastomosis of the portal vein (PV) and infrahepatic vena cava (IHVC) has significantly simplified the transplant procedure in rats. However, due to the short anterior wall of the recipients' suprahepatic vena cava (SHVC), the cuff technique is very difficult to use for the reconstruction of the SHVC. Most researchers in this field still use the hand-suture technique for SHVC reconstruction, which makes it the bottleneck step in rat orthotopic liver transplantation. The magnetic anastomosis technique (i.e., magnamosis) is a method of connecting two vessels using the attractive force between two magnets. Our recent study has shown that the magnetic anastomosis technique is superior to the hand-suture technique for SHVC reconstruction in rats. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using the novel magnetic anastomosis technique. In this model, the reconstruction of the PV and IHVC was performed by the standard cuff technique, while the reconstruction of the bile duct (BD) was performed by a stent technique. The hepatic re-arterialization was not performed. The magnetic anastomosis technique made SHVC reconstruction much easier and significantly shortened the anphepatic phase. After a reasonable learning curve, even researchers without advanced microsurgical skills can produce reliable and reproducible results using this rat model of OLT.

The reconstruction of the suprahepatic vena cava (SHVC) remains a difficult step in rat orthotopic liver transplantation. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using a novel magnetic anastomosis technique.

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and detoxifying functions of the liver. In most irreversible liver damage cases, orthotropic liver transplant (OLT) remains the only available treatment. To study the therapeutic potential of a treatment for ALF, its prior testing in an animal model of ALF is essential. In the current study, an ALF model in rats was developed by combining 70% partial hepatectomy (PHx) and injections of acetaminophen (APAP) that provides a therapeutic window of 48 h. The median and left lateral lobes of the liver were removed to excise 70% of the liver mass and APAP was given 24 h postsurgically for 2 days. Survival in ALF-induced animals was found to be severely decreased. The development of ALF was confirmed by altered serum levels of the enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP); changes in prothrombin time (PT); and assessment of the international normalized ratio (INR). Study of the gene expression profile by qPCR revealed an increase in expression levels of genes involved in apoptosis, inflammation, and in the progression of liver injury. Diffused degeneration of hepatocytes and infiltration of immune cells was observed by histological evaluation. The reversibility of ALF was confirmed by the restoration of survival and serum levels of ALT, AST, and ALP after intrasplenic transplantation of syngeneic healthy rat hepatocytes. This model presents a reliable alternative to the available ALF animal models to study the pathophysiology of ALF as well as to evaluate the potential of a novel therapy for ALF. The use of two different approaches also makes it possible to study the combined effect of physical and drug-induced liver injury. The reproducibility and feasibility of current procedure is an added benefit of the model.

The acute liver failure animal model developed in the current study presents a feasible alternative for the study of potential therapies. The current model employs the combined effect of physical and drug-induced hepatic injury and provides a suitable time window to study the potential of novel therapies.

70% 부분 간 절제술과 아세트아미노펜을 결합하여 급성 간 기능 부전의 쥐 모델 생성

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the luminal surface area in arteries thereby reducing adequate blood flow to organs and distal tissues. Clinically, revascularization procedures such as balloon angioplasty with or without stent placement aim to restore blood flow. Although these procedures reestablish blood flow by reducing plaque burden, they damage the vessel wall, which initiates the arterial healing response. The prolonged healing response causes arterial restenosis, or re-narrowing, ultimately limiting the long-term success of these revascularization procedures. Therefore, preclinical animal models are integral for analyzing the pathophysiological mechanisms driving restenosis, and provide the opportunity to test novel therapeutic strategies. Murine models are cheaper and easier to operate on than large animal models. Balloon or wire injury are the two commonly accepted injury modalities used in murine models. Balloon injury models in particular mimic the clinical angioplasty procedure and cause adequate damage to the artery for the development of restenosis. Herein we describe the surgical details for performing and histologically analyzing the modified, pressure-controlled rat carotid artery balloon injury model. Additionally, this protocol highlights how local periadventitial application of therapeutics can be used to inhibit neointimal hyperplasia. Lastly, we present light sheet fluorescence microscopy as a novel approach for imaging and visualizing the arterial injury in three-dimensions.

The rat carotid artery balloon injury mimics the clinical angioplasty procedure performed to restore blood flow in atherosclerotic vessels. This model induces the arterial injury response by distending the arterial wall, and denuding the intimal layer of endothelial cells, ultimately causing remodeling and an intimal hyperplastic response.

쥐 경동맥 압력 제어 세그먼트 풍선 부상 과식 치료 응용 프로그램

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...