Development of this protocol was funded by private donations directed to the Parkinson's Institute Brain Donation Program.

뇌 기증 등록을 기부하는 그들의 의도 등록자에 의한 설명서가 포함되어 있습니다. 법이 허용 조직 검색에 대한 부검 권한은 친척의 다음에 의해 제공됩니다. 수집 부검 표본을 사용하여 연구 연구는 건강 보험 양도 및 책임에 관한 법률 (HIPAA) 규정을 준수하기 위해 제도적 검토위원회 (IRB)에 의해 검토된다. 참고 : Leptomeninges 샘플은 뇌 해부 동안 뇌 해부학자 또는 신경 병리학에 의해 수집되고, 25 ~ 30 ML의 수막 성장 미디어를 포함하는 50 ML 원뿔 튜브에 저장됩니다. 샘플은 샘플 준비 될 때까지 4 ℃에서 저장된다. 세포의 생존 시간의 사후 감소로 처리가 가능한 한 빨리 수행되어야한다. 1 세트 업 Leptomeninges 해부를 시작하기 전에 참고 : - 1.3 바이오 안전성 캐비닛 내부에서 수행 할 수 있습니다 1.1 단계를 반복합니다. <ol><li> 375 mL의 둘 베코 변형 이글 매체를 조합하여 수막 성장 배지를 준비 태아 소 혈청 100 ㎖, 5 ㎖의 10 mM 비 필수 아미노산, 5 ㎖의 200 mM의 L- 알라 닐 -L- 글루타민, 5 ㎖의 100 mM의 피루브산 나트륨 5 ㎖ 10,000 U / ㎖ 페니실린 / 스트렙토 마이신 및 250 μg의 5 ㎖ / ㎖의 암포 테리 신 B, 500㎖ 필터 유닛이다. 필터와 혼합한다. 최대 4 주 동안 용지를 사용하십시오. </li><li> 해부를 시작하기 전에 바이오 안전성 캐비닛에있는 모든 재료를 넣 배 배양 접시, 배 6 웰 플레이트, 배 메스, 15 ~ 20 멸균 15 mm 커버 전표, 피펫을 흡입 인산염 완충 생리 식염수 (PBS), 혈청 학적 피펫. </li><li> 6 웰 플레이트의 각 웰에 멸균 멸균 0.1 % 젤라틴 용액 1 ㎖를 추가한다. 30 ~ 60 분 동안 따로 접시를 설정합니다. 배 6 웰 플레이트를 준비합니다. </li></ol> Leptomeninges 샘플 2. 준비 참고 : - 2.3 바이오 안전성 캐비닛 내부에서 수행 할 수 있습니다 2.1 단계를 반복합니다. <ol><li> 에 PBS의 약 10 mL를 넣고멸균 10 cm 조직 배양 접시는 접시에 수막 샘플을 배치합니다. 포셉 사용하여 부드럽게 혈액을 제거하기 위해 PBS와 leptomeninges을 씻는다. </li><li> 신선한 PBS의 10 ㎖를 포함하는 새로운 10 cm 조직 배양 접시에 수막을 전송하고 세척을 계속합니다. 가능한 한 많은 혈액을 제거 할 필요 반복합니다. </li><li> 약 6cm X 6cm 큰 조각으로 조직 leptomeninges 절단이 메스를 사용. </li><li> 수평 층류 후드의 해부 현미경으로 배양 접시 및 전송에 놓고 덮개. </li></ol> Leptomeninges 조직 3. 해부 주 - 3.3 해부 현미경을 사용하여 수평 층류 후드 내부에서 수행되어야 3.1 단계. <ol><li> 적어도 20 ~ 25 3mm X 3mm 조각을 생성 할 수있을만큼 leptomeninges 조각 (단계 2.3)에 영역에서 혈관을 제거합니다. 한 메스과 장소에 leptomeninges을 잡고 다른과, 부드러운 얕은 긁어 모 사용기는 혈관을 분리합니다. </li><li> 준비된 지역에서 조직의 작은 사각형을 잘라. 첫 번째 큰 조각을 한 다음 작은 섹션으로 사람들을 슬라이스하여 단계적 과정에서 잘라. </li><li> 요동과 조직을 절단하는 대신에 조직과 다른 메스를 개최 한 메스를 사용합니다. 조직의 일관성으로 인해, 서로에 대해 메스 슬라이드하는 것이 곤란하다. 이것은 따로 조직을 찢어 및 비정형 가장자리에 발생합니다. </li><li> 20 ~ 25 3mm X 3mm 조각이 될 때까지 반 조각을 절단 계속합니다. </li></ol> 조직 배양 플레이트 상에 해부 수막 조각 4. 전송 주의 : 단계 4는 바이오 캐비닛 내부에 수행되어야한다. <ol><li> 6 웰 플레이트에서 (단계 1.3에서) 대기음 젤라틴. 각 웰에 수막 성장 미디어의 1 ML을 추가합니다. 멸균 집게를 사용하여 각 웰에 3-4 생검 조각을 배치합니다. </li></ol> M을 통해 커버 전표 5. 배치eninges 조각 주 - 5.2 해부 현미경을 사용하여 수평 층류 후드 내부에서 수행되어야 5.1 단계. <ol><li> 물론 당 1-2 멸균 15 mm 원형 된 커버와 조각을 커버. </li><li> 조각이 판의 하단을 터치되도록 집게로 단단히 누르십시오. 이 웰의 바닥에 조직 조각을 부착 할 수있다. </li><li> 37 ° C, 5 % CO 2 배양기로 6 웰 플레이트를 놓습니다. </li></ol> 6. 세포 배양 유지 보수 참고 : - 6.3 바이오 안전성 캐비닛 내부에서 수행 할 수 있습니다 6.1 단계를 반복합니다. 커버 슬립이 이동하고 수막 조각을 제거하지 말아야으로 치료와 배양 접시를 처리합니다. <ol><li> 문화 2 일 후, 각 웰에 신선한 수막 성장 미디어의 추가 1 mL를 넣어. </li><li> 7 일에, 신중하게 미디어를 대기음하고 각 웰에 신선한 미디어의 2 mL를 넣고. </li><li> 9 일 후, 성장 배지를 매일 계속 변화문화까지 다른 일 합류하게된다. </li></ol> (7)과 Passaging 참고 : 모든 단계는 바이오 안전성 캐비닛 내부에서 수행 할 수 있습니다. 수막 아세포는 수막 조직편에서 마이그레이션 큰 배양 접시에 수막 섬유 아세포를 배양 용기의 가장자리를 향해 성장 확장 시작되면. <ol><li> 15 ~ 30 분 동안 1 % 젤라틴과 계대 코트 배양 접시를 시작하기 전에. </li><li> 대기음 6 잘 접시에서 미디어 및 2 mL의 PBS로 세척 세포. </li><li> 각 웰에 트립신 / EDTA의 1 mL를 넣고 5 ~ 10 분 동안 37 ° C에서 품어. 또한, 커버 슬립 또는이 단계의 수막 조직을 제거 할 필요가 없다. </li><li> 셀은 원형이며, 분리 배지 2 mL를 첨가하기 시작하면. </li><li> 피펫 세포까지 완전히 모든 대단히 짧은 시간을 방해 큰 배양 접시에 세포 솔루션을 전송하려면 아래로. </li><li> 1 내지 3 : 1의 비율을 사용하여 4 세 6 웰 접시에서 세포를 결합 할한 T75의 배양 접시에. </li><li> 수막 섬유 아세포 세포를 T75 배양 플라스크에서 컨 플루 언트되면, 세포를 Trypsinize, 1 × 106 세포 / mL의 바이알에서 동결 배지에서 cryopreserve. 합류 수막 섬유 아세포와 함께 한 T75 문화 플라스크에 대한 5-7000000 세포가 포함되어 있습니다. </li></ol> 면역 염색에 의한 수막 섬유 아세포의 8 특성 주 : 절차를 시작하기 전에, PBS (블로킹 완충액)에서 4 % 파라 포름 알데히드 용액을, 5 % 정상 염소 혈청을 제조 0.3 % 트리톤 X-100의 PBS (permeabilization 버퍼), 일차 및 이차 항체 용액, 및 1 μg의 중 / ㎖의 훽스트 33342 10 ㎎ / ㎖의 재고에서 PBS에 희석. <ol><li> 8 잘 챔버 슬라이드 씨 15,000 30,000 수막 섬유 아세포는 0.1 % 젤라틴으로 코팅. </li><li> 세포가 부착 된 경우 24 시간 후, 실온에서 10 분 동안 웰 당 100 μL 4 % 파라 포름 알데히드로 세포를 고정한다. 1X PBS로 우물 3 회 반복한다. </li><li> 실온에서 5 분 동안 0.3 % 트리톤 X-100 150 μL와 세포 Permeabilize 하시려면. 1X PBS로 우물 3 회 반복한다. </li><li> 실온에서 1 시간 동안 차단 용액 200 μL (PBS + 5 % 정상 염소 혈청)을 추가한다. </li><li> 차단 솔루션을 기음과 솔루션을 차단에 희석 원하는 차 항체의 150 μL를 추가합니다. 이중 염색의 경우, 다음과 같이 얼음에 별도의 원심 분리기 튜브의 일차 항체의 작업 희석을 준비 : <ol><li> 안티 피브로넥틴 + 1 (300) 희석 : 솔루션을 차단하는 안티 네 스틴의 200 희석 (1)을 준비합니다. 안티 SERPINH1 + 1 (250) 희석 : 솔루션을 차단하는 안티 TUJ1 1000 희석 1을 준비합니다. (1) 준비 : 안티 - SERPINH1 250 희석 + 1 : 솔루션을 차단하는 안티 SOX2 100 희석 </li></ol></li><li> 밤새 4 ° C에서 품어. </li><li> 1X PBS로 우물 3 회 반복한다. </li><li> 작업 한 준비 : 이차 항체는 항 - 토끼를 염소 라벨 형광 400 희석 (녹색, 예 / 엠 2 </s최대&gt; 519분의 495 ㎚)과 염소 항 - 마우스 (빨강, 예 / 엠 2 617분의 590 ㎚) 차단 솔루션과 각 웰에 100 μL를 추가합니다. 실온에서 어두운 곳에서 1 시간 동안 배양. 그런 다음 1X PBS로 한번 우물을 씻는다. </li><li> 각 솔루션은 물론 3 분 동안 어둠 속에서 부화 / mL의 훽스트 1 μg의 100 μL를 33342 (예 / 엠 2 461분의 358 nm의 청색)를 추가합니다. 웰의 최종 1X PBS 세척에두고 1X PBS로 웰을 3 회 세척하고, 알루미늄 호일로 슬라이드 커버. </li><li> 형광 현미경으로 세포를 분석 할 수 있습니다. </li></ol>

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	<li>Decimo, I., Fumagalli, G., Berton, V., Krampera, M., Bifari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meninges:+from+protective+membrane+to+stem+cell+niche.">Meninges: from protective membrane to stem cell niche.</a> Am J Stem Cells. 1 (2), 92-105 (2012).</li><li>Bifari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+stem/progenitor+cells+with+neuronal+differentiation+potential+reside+in+the+leptomeningeal+niche.">Novel stem/progenitor cells with neuronal differentiation potential reside in the leptomeningeal niche.</a> J Cell Mol Med. 13 (9B), 3195-3208 (2009).</li><li>Bifari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meninges+harbor+cells+expressing+neural+precursor+markers+during+development+and+adulthood.">Meninges harbor cells expressing neural precursor markers during development and adulthood.</a> Front Cell Neurosci. 9, 383 (2015).</li><li>Decimo, I., Bifari, F., Krampera, M., Fumagalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cell+niches+in+health+and+diseases.">Neural stem cell niches in health and diseases.</a> Curr Pharm Des. 18 (13), 1755-1783 (2012).</li><li>Hayashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+cells+induce+dopaminergic+neurons+from+embryonic+stem+cells.">Meningeal cells induce dopaminergic neurons from embryonic stem cells.</a> Eur J Neurosci. 27 (2), 261-268 (2008).</li><li>Nakagomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptomeningeal-derived+doublecortin-expressing+cells+in+poststroke+brain.">Leptomeningeal-derived doublecortin-expressing cells in poststroke brain.</a> Stem Cells Dev. 21 (13), 2350-2354 (2012).</li><li>Hjelm, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+autopsy+donor-derived+somatic+cells.">Induction of pluripotent stem cells from autopsy donor-derived somatic cells.</a> Neurosci Lett. 502 (3), 219-224 (2011).</li><li>Hjelm, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-differentiated+neural+cell+cultures+progress+towards+donor-identical+brain+tissue.">In vitro-differentiated neural cell cultures progress towards donor-identical brain tissue.</a> Hum Mol Genet. 22 (17), 3534-3546 (2013).</li><li>Meske, V., Albert, F., Wehser, R., Ohm, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+autopsy-derived+fibroblasts+as+a+tool+to+study+systemic+alterations+in+human+neurodegenerative+disorders+such+as+Alzheimer's+disease--methodological+investigations.">Culture of autopsy-derived fibroblasts as a tool to study systemic alterations in human neurodegenerative disorders such as Alzheimer's disease--methodological investigations.</a> J Neural Transm (Vienna). 106 (5-6), 537-548 (1999).</li><li>Bliss, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+postmortem+human+dura+mater+and+scalp+for+deriving+human+fibroblast+cultures.">Use of postmortem human dura mater and scalp for deriving human fibroblast cultures.</a> PLoS One. 7 (9), e45282 (2012).</li><li>Sproul, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+iPSC+lines+from+archived+non-cryoprotected+biobanked+dura+mater.">Generation of iPSC lines from archived non-cryoprotected biobanked dura mater.</a> Acta Neuropathol Commun. 2, 4 (2014).</li><li>Adler, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+clinical+diagnostic+accuracy+of+early+vs+advanced+Parkinson+disease:+clinicopathologic+study.">Low clinical diagnostic accuracy of early vs advanced Parkinson disease: clinicopathologic study.</a> Neurology. 83 (5), 406-412 (2014).</li><li>Hughes, A. J., Daniel, S. E., Kilford, L., Lees, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+clinical+diagnosis+of+idiopathic+Parkinson's+disease:+a+clinico-pathological+study+of+100+cases.">Accuracy of clinical diagnosis of idiopathic Parkinson's disease: a clinico-pathological study of 100 cases.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 55 (3), 181-184 (1992).</li><li>Hughes, A. J., Daniel, S. E., Lees, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+accuracy+of+clinical+diagnosis+of+Lewy+body+Parkinson's+disease.">Improved accuracy of clinical diagnosis of Lewy body Parkinson's disease.</a> Neurology. 57 (8), 1497-1499 (2001).</li><li>Langston, J. W., Sch&#252;le, B., Rees, L., Nichols, R. J., Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multisystem+Lewy+body+disease+and+the+other+parkinsonian+disorders.">Multisystem Lewy body disease and the other parkinsonian disorders.</a> Nature Genetics. 47 (12), 1378-1384 (2015).</li><li>Vangipuram, M., Ting, D., Kim, S., Diaz, R., Sch&#252;le, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+punch+biopsy+explant+culture+for+derivation+of+primary+human+fibroblasts.">Skin punch biopsy explant culture for derivation of primary human fibroblasts.</a> J Vis Exp. (77), e3779 (2013).</li><li>Byers, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SNCA+triplication+Parkinson's+patient's+iPSC-derived+DA+neurons+accumulate+alpha-synuclein+and+are+susceptible+to+oxidative+stress.">SNCA triplication Parkinson's patient's iPSC-derived DA neurons accumulate alpha-synuclein and are susceptible to oxidative stress.</a> PLoS One. 6 (11), e26159 (2011).</li><li>Sanders, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRK2+mutations+cause+mitochondrial+DNA+damage+in+iPSC-derived+neural+cells+from+Parkinson's+disease+patients:+reversal+by+gene+correction.">LRRK2 mutations cause mitochondrial DNA damage in iPSC-derived neural cells from Parkinson's disease patients: reversal by gene correction.</a> Neurobiol Dis. 62, 381-386 (2014).</li><li>Beevers, J. E., Caffrey, T. M., Wade-Martins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+(iPSC)-derived+dopaminergic+models+of+Parkinson's+disease.">Induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived dopaminergic models of Parkinson's disease.</a> Biochem Soc Trans. 41 (6), 1503-1508 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

이 프로토콜은 뇌 기증과 관련하여 수집 된 인간 사후의 leptomeninges에서 수막 섬유 아세포 문화를 유도하는 간단하고 강력한 프로토콜을 설명합니다. 사후 인간의 물질로 세포 배양을 유도하는 프로토콜의 거의 설명이 있습니다. 두 연구는 피부 유래 섬유 아세포를 배양 7, 8, 9, 한 연구는 경질 샘플 (10)을 설?...

뇌경막, 지주막과 피아 이잖아요 : 수막은 뇌를 보호하는 세 개의 막으로 구성되어 있습니다. 최근에, 또한 수막 뇌 발달 한 뇌 항상성에 중요한 역할을한다는 것을 인식하고있다. 수막은 중간 엽 및 신경 능선 유래 세포로부터 유래하고 흥미로운 시험 관내 및 생체 내 2, 3, 4에서의 이식 후 뉴런을 야기 할 수있는 수막에 존재하는 전구 세포를 보였다. 들은 도파민 뉴런 (5)에 배아 줄기 세포의 분화를 위해 간질 세포 유래 유도부 활성을 갖는 수막으로 배양 성공적, 급전 층으로서 사용되어왔다. 또한 leptomeninges 직접 허혈성 조건 하에서 6 뉴런, 아스트로 사이트, 올리고 덴드로 사이트와로 분화 할 수있는 잠재력을 가지고있다. 이 프로토콜의 경우, 인간의 사후 수막 샘플을 총칭하여 지주막과 피아 이잖아요에서 수집 leptomeninges라고, 연구 목적으로 인간의 두뇌 기부의 일환으로 조달된다. 뇌의 해부 죽음의 24 시간 내에서 수행되며,이 프로토콜 여기에 도시 된 바와 같이 leptomeninges 샘플은 다음 6-8 시간 내에서 추가 처리를 위해 저온 성장 배지에 배치된다. 이 프로토콜은 환자의 기본 leptomeninges 세포 배양의 개발에 대한 해부와 인간의 수막 샘플의 준비에 대해 설명합니다. 조직은 약 3mm X 3mm 사각형의 25 ~ 30 조각으로 절단됩니다. 세 가지 각 6 웰에 배치됩니다 젤라틴 코팅 잘 라운드 커버 글라스로 누르고. 뇌막 해부은 약 25 ~ 35 분 소요됩니다. 이 문화의 주요 과제는 뇌 조달, 운송 및 박리 등의 불임은 일반적으로 무균 조건 하에서 수행하지 않는 것입니다. 티herefore, 페니실린, 스트렙토 마이신 및 암포 테리 신 B의 칵테일 배양 배지를 보충하고 별도로 배양 조직 조각을 멀티 웰 접시를 사용하는 것이 중요하다. 수막 섬유 아세포의 부산물은 일반적으로 첫 주 내에서 발생합니다. 세포가 합류 할 때까지 미디어 매 2 ~ 3 일 변화 및 세포 효소 적으로 계대된다. 수막 섬유 아 세포는 냉동 보존 매체에 ㎖ / 바이알 당 100 만 세포의 냉동 보관한다. 이 프로토콜로, 20-30000000 수막 섬유 아 세포는 냉동 보존에 대한 6-8주에서 유도 될 수있다. 이러한 수막 섬유 아세포의 다운 스트림 응용 프로그램은 질병 연구, 직접 신경 세포 분화 또는 질병 메커니즘의 이해 및 약물 개발을위한 leptomeninges에서 유도 만능 줄기 세포의 유도를위한 차 문화입니다.

<table><tbody><tr><td>Corning Petri dishes</td><td>Fisher Scientific</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 6-well plate</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-832-11</td><td></td></tr><tr><td>15-mm cover slips</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-83 15CIR-1D</td><td></td></tr><tr><td>Scalpels, sterile blade, No. 15</td><td>Miltex</td><td>4-415</td><td></td></tr><tr><td>Curved precision tip forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-100-122</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230490</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>Sigma</td><td>G1890-100G</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30264.02</td><td></td></tr><tr><td>Corning 500 mL filter unit</td><td>Fisher Scientific</td><td>430770</td><td>Combine media components and filter.</td></tr><tr><td>Nunc Cell Culture Treated Flasks with Filter Caps, T175 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>178883</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Growth Media&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hyclone DMEM</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30081.02</td><td></td></tr><tr><td>Hyclone FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30910.03</td><td></td></tr><tr><td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100x)</td><td>Thermo Fisher</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement (100x)</td><td>Thermo Fisher</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B (Yellow Solution/250 &amp;micro;g/mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP264520</td><td></td></tr><tr><td>Bambanker Freeze 120 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9582225</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Fibronectin Staining&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8 well chamber slides&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>1256518</td><td></td></tr><tr><td>20% paraformaldehyde&amp;nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>100% Glycerol&amp;nbsp;</td><td>BioRad</td><td>9455</td><td></td></tr><tr><td>100% normal goat serum&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>101098-382</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fibronectin antibody [F1]</td><td>Abcam</td><td>ab32419</td><td>1:300 dilution in blocking solution</td></tr><tr><td>Anti-SERPINH1</td><td>Sigma</td><td>S5950-200ul</td><td>1:250 dilution in blocking solution</td></tr><tr><td>Anti-SOX2</td><td>Millipore</td><td>MAB4343</td><td>1:100 dilution in blocking solution</td></tr><tr><td>Anti-Nestin</td><td>Millipore</td><td>MAB5326</td><td>1:200 dilution in blocking solution</td></tr><tr><td>Anti-TUJ1</td><td>Covance</td><td>MMS-435P</td><td>1:1,000 dilution in blocking solution</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-rabbit</td><td>Thermo Fisher</td><td>A11029</td><td>1:400 dilution in blocking solution; (green channel; Ex/Em2 495/519 nm)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 anti-mouse</td><td>Thermo Fisher</td><td>A21424</td><td>1:400 dilution in blocking solution; (red channel; Ex/Em2 590/617 nm)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 stain</td><td>Thermo Fisher</td><td>H3570</td><td>dilute to a final concentration of 1.0 &amp;mu;g/mL; (blue channel; Ex/Em2 358/461 nm)</td></tr><tr><td colspan="4">Suppliers are suggestions, similar products from alternative vendors can be used as well.</td></tr></tbody></table>

derivation of leptomeninges explant cultures from postmortem human brain donors

큰 진전 파킨슨 병의 임상 적 특성에 만들어졌다하더라도, 몇몇 연구는 파킨슨 병의 병리학 적 진단이 임상 진단 파킨슨 병의 최대 25 %에서 확인되지 않은 것을보고한다. 따라서, 티슈는 오진의 높은 속도를 가질 수 특발성 파킨슨 병 환자의 임상 진단에서 수집; 전임상 모델이 쓸데 될 수 따라서 같은 조직에서 시험관 연구에서 파킨슨 병을 연구한다. 파킨슨 병의 확인 신경 병리학 적 진단 사후 인간의 leptomeninges를 수집하고 흑질 선조체 세포 손실과 루이 기관이라는 세포 내 단백질 흠을 특징으로 한 임상 관찰 파킨슨 다른 기저 질환 과정 (예를 들어 종양, 동맥 경화)에 의해 발생한 것이 아닌지 확신 할 수 있습니다. 이 프로토콜 presen해부 및 수막 섬유 아세포 문화의 유도에 대한 사후 인간의 leptomeninges의 준비 TS. 이 절차는 견고하고 높은 성공률을 갖는다. 뇌 조달은 일반적으로 무균 조건 하에서 수행되지 않는 문화의 문제는 불임이다. 따라서, 페니실린, 스트렙토 마이신 및 암포 테리 신 B의 칵테일 배양 배지를 보충하는 것이 중요 파킨슨 병 부검 확인 된 경우에서 수막 섬유 아 세포의 유도는 파킨슨 병의 체외 모델링을위한 기반을 제공합니다. 수막 섬유 아세포는 3~9일 샘플 준비 후 나타나는 약 20-30000000 세포 6-8 주 만에 동결 보존 할 수 있습니다. 수막 섬유 아세포 배양 균질하고 세포 피브로넥틴, 수막을 식별하기 위해 일반적으로 사용되는 마커를 표현한다.

leptomeninges 처리 프로토콜이 성공하면이 뇌에 대한 사후 간격의 길이에 따라 달라질 수 있지만, 수막 섬유 아 세포의 생장는 3 구 일 절제술 후 관찰 처음이다. 그림 1은 네 개의 다른 기증자의 수막 섬유 아세포 문화를 보여줍니다. 도 1a는 10 시간 20 분 사후 간격으로 88 세 기증자에서 처리 후 조직 사일 주위에 유리 커버 슬립 (어두운 대각선)와 섬?...

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Derivation of Leptomeninges Explant Cultures from Postmortem Human Brain Donors

인간의 사후 뇌에서 leptomeninges 이식편 문화 프로토콜 6-8 주 이내에 피브로넥틴 양성 수막 섬유 아세포를 유도 약 20-30000000 세포를 cryopreserve하기 위해 기술적으로 강력하고 간단한 방법입니다.

사후 인간의 두뇌 기증자로부터 Leptomeninges 이식편 문화의 유도

Even though great progress has been made in the clinical characterization of Parkinson&#39;s disease, several studies report that the diagnosis of ...

derivation-leptomeninges-explant-cultures-from-postmortem-human-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

8.2K 조회수.  Parkinson’s Institute and Clinical Center.  인간의 사후 뇌에서 leptomeninges 이식편 문화 프로토콜 6-8 주 이내에 피브로넥틴 양성 수막 섬유 아세포를 유도 약 20-30000000 세포를 cryopreserve하기 위해 기술적으로 강력하고 간단한 방법입니다. 

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Derivation of Enriched Oligodendrocyte Cultures and Oligodendrocyte/Neuron Myelinating Co-cultures from Post-natal Murine Tissues

Identifying the molecular mechanisms underlying OL development is not only critical to furthering our knowledge of OL biology, but also has implications for understanding the pathogenesis of demyelinating diseases such as Multiple Sclerosis (MS). Cellular development is commonly studied with primary cell culture models. Primary cell culture facilitates the evaluation of a given cell type by providing a controlled environment, free of the extraneous variables that are present in vivo. While OL cultures derived from rats have provided a vast amount of insight into OL biology, similar efforts at establishing OL cultures from mice has been met with major obstacles. Developing methods to culture murine primary OLs is imperative in order to take advantage of the available transgenic mouse lines. 
Multiple methods for extraction of OPCs from rodent tissue have been described, ranging from neurosphere derivation, differential adhesion purification and immunopurification 1-3. While many methods offer success, most require extensive culture times and/or costly equipment/reagents. To circumvent this, purifying OPCs from murine tissue with an adaptation of the method originally described by McCarthy &amp; 
de Vellis 2 is preferred. This method involves physically separating OPCs from a mixed glial culture derived from neonatal rodent cortices. The result is a purified OPC population that can be differentiated into an OL-enriched culture. This approach is appealing due to its relatively short culture time and the unnecessary requirement for growth factors or immunopanning antibodies. 
While exploring the mechanisms of OL development in a purified culture is informative, it does not provide the most physiologically relevant environment for assessing myelin sheath formation. Co-culturing OLs with neurons would lend insight into the molecular underpinnings regulating OL-mediated myelination of axons. For many OL/neuron co-culture studies, dorsal root ganglion neurons (DRGNs) have proven to be the neuron type of choice. They are ideal for co-culture with OLs due to their ease of extraction, minimal amount of contaminating cells, and formation of dense neurite beds. While studies using rat/mouse myelinating xenocultures have been published 4-6, a method for the derivation of such OL/DRGN myelinating co-cultures from post-natal murine tissue has not been described. Here we present detailed methods on how to effectively produce such cultures, along with examples of expected results. These methods are useful for addressing questions relevant to OL development/myelinating function, and are useful tools in the field of neuroscience.

This article describes methods to derive enriched populations of murine oligodendrocyte precursor cells (OPCs) in primary culture, which differentiate to produce mature oligodendrocytes (OLs). In addition, this report describes techniques to produce murine myelinating co-cultures by seeding mouse OPCs onto a neurite bed of mouse dorsal root ganglion neurons (DRGNs).

포스트 - 나탈 Murine 조직의 공동 문화를 Myelinating 풍부한 Oligodendrocyte 문화와 Oligodendrocyte / 신경 세포의 유도

Identifying the molecular mechanisms underlying OL development is not only critical to furthering our knowledge of OL biology, but also has implications ...

연구

신경과학

Derivation of Glial Restricted Precursors from E13 mice

This is a protocol for derivation of glial restricted precursor (GRP) cells from the spinal cord of E13 mouse fetuses. These cells are early precursors within the oligodendrocytic cell lineage. Recently, these cells have been studied as potential source for restorative therapies in white matter diseases. Periventricular leukomalacia (PVL) is the leading cause of non-genetic white matter disease in childhood and affects up to 50% of extremely premature infants. The data suggest a heightened susceptibility of the developing brain to hypoxia-ischemia, oxidative stress and excitotoxicity that selectively targets nascent white matter. Glial restricted precursors (GRP), oligodendrocyte progenitor cells (OPC) and immature oligodendrocytes (preOL) seem to be key players in the development of PVL and are the subject of continuing studies. Furthermore, previous studies have identified a subset of CNS tissue that has increased susceptibility to glutamate excitotoxicity as well as a developmental pattern to this susceptibility. Our laboratory is currently investigating the role of oligodendrocyte progenitors in PVL and use cells at the GRP stage of development. We utilize these derived GRP cells in several experimental paradigms to test their response to select stresses consistent with PVL. GRP cells can be manipulated in vitro into OPCs and preOL for transplantation experiments with mouse PVL models and in vitro models of PVL-like insults including hypoxia-ischemia. By using cultured cells and in vitro studies there would be reduced variability between experiments which facilitates interpretation of the data. Cultured cells also allows for enrichment of the GRP population while minimizing the impact of contaminating cells of non-GRP phenotype.

This protocol outlines the derivation of Glial Restricted Precursors from fetal spinal cords and maintained in vitro either for transplantation or for the study of oligodendrocytic lineage.

E13 생쥐에서 Glial 제한된 엽 성의 전구 물질의 유도

This is a protocol for derivation of glial restricted precursor (GRP) cells from the spinal cord of E13 mouse fetuses. These cells are early precursors ...

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF differentiates from the amniotic fluid upon closure of the anterior neural tube. CSF volume then increases over subsequent days as the neuroepithelial progenitor cells lining the ventricles and the choroid plexus generate CSF. The embryonic CSF contacts the apical, ventricular surface of the neural stem cells of the developing brain and spinal cord. CSF provides crucial fluid pressure for the expansion of the developing brain and distributes important growth promoting factors to neural progenitor cells in a temporally-specific manner. To investigate the function of the CSF, it is important to isolate pure samples of embryonic CSF without contamination from blood or the developing telencephalic tissue. Here, we describe a technique to isolate relatively pure samples of ventricular embryonic CSF that can be used for a wide range of experimental assays including mass spectrometry, protein electrophoresis, and cell and primary explant culture. We demonstrate how to dissect and culture cortical explants on porous polycarbonate membranes in order to grow developing cortical tissue with reduced volumes of media or CSF. With this method, experiments can be performed using CSF from varying ages or conditions to investigate the biological activity of the CSF proteome on target cells.

The ventricular cerebrospinal fluid (CSF) bathes the neuroepithelial and cerebral cortical progenitor cells during early brain development in the embryo. Here we describe the method developed to isolate ventricular CSF from rodent embryos of different ages in order to investigate its biological function. In addition, we demonstrate our cerebral cortical explant dissection and culture technique that allows for explant growth with minimal volumes of culture medium or CSF.

해부하는 뇌 두피 Explants와 함께 사용하기위한 쥐 태아의 뇌척수의 절연

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

<meta charset="utf8"></head><body>순환 종양 세포를 사용하여 연수막 질환을 연구하기 위한 쥐 모델

Ex Vivo Culture of Circulating Tumor Cells in the Cerebral Spinal Fluid from Melanoma Patients to Study Melanoma&#45;Associated Leptomeningeal Disease

Melanoma-associated leptomeningeal disease (M-LMD) occurs when circulating tumor cells (CTCs) enter into the cerebral spinal fluid (CSF) and colonize the meninges, the membrane layers that protect the brain and the spinal cord. Once established, the prognosis for M-LMD patients is dismal, with overall survival ranging from weeks to months. This is primarily due to a paucity in our understanding of the disease and, as a consequence, the availability of effective treatment options. Defining the underlying biology of M-LMD will significantly improve the ability to adapt available therapies for M-LMD treatment or design novel inhibitors for this universally fatal disease. A major barrier, however, lies in obtaining sufficient quantities of CTCs from the patient-derived CSF (CSF-CTCs) to conduct preclinical experiments, such as molecular characterization, functional analysis, and in vivo efficacy studies. Culturing CSF-CTCs ex vivo has also proven to be challenging. To address this, a novel protocol for the culture of patient-derived M-LMD CSF-CTCs ex vivo and in vivo is developed. The incorporation of conditioned media produced by human meningeal cells (HMCs) is found to be critical to the procedure. Cytokine array analysis reveals that factors produced by HMCs, such as insulin-like growth factor-binding proteins (IGFBPs) and vascular endothelial growth factor-A (VEGF-A), are important in supporting CSF-CTC survival ex vivo. Here, the usefulness of the isolated patient-derived CSF-CTC lines is demonstrated in determining the efficacy of inhibitors that target the insulin-like growth factor (IGF) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways. In addition, the ability to intrathecally inoculate these cells in vivo to establish murine models of M-LMD that can be employed for preclinical testing of approved or novel therapies is shown. These tools can help unravel the underlying biology driving CSF-CTC establishment in the meninges and identify novel therapies to reduce the morbidity and mortality associated with M-LMD.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 연수막 질환 연구에서 순환 종양 세포의 잠재력 평가

This article describes a protocol for the propagation of cerebral spinal fluid-circulating tumor cells (CSF-CTCs) collected from patients with melanoma-associated leptomeningeal disease (M-LMD) to develop preclinical models to study M-LMD.

Ex 생체 내 흑색종 관련 연수막 질환을 연구하기 위한 흑색종 환자의 대뇌 척수액 내 순환 종양 세포 배양

Melanoma-associated leptomeningeal disease (M-LMD) occurs when circulating tumor cells (CTCs) enter into the cerebral spinal fluid (CSF) and colonize the ...

암 연구학

Isolating Central Nervous System Tissues and Associated Meninges for the Downstream Analysis of Immune cells

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier between the periphery and the CNS. The CNS is an immunologically specialized site, and in steady state conditions, immune privilege is most evident in the CNS parenchyma. In contrast, the meninges harbor a diverse array of resident cells, including innate and adaptive immune cells. During inflammatory conditions triggered by CNS injury, autoimmunity, infection, or even neurodegeneration, peripherally derived immune cells may enter the parenchyma and take up residence within the meninges. These cells are thought to perform both beneficial and detrimental actions during CNS disease pathogenesis. Despite this knowledge, the meninges are often overlooked when analyzing the CNS compartment, because conventional CNS tissue extraction methods omit the meningeal layers. This protocol presents two distinct methods for the rapid isolation of murine CNS tissues (i.e., brain, spinal cord, and meninges) that are suitable for downstream analysis via single-cell techniques, immunohistochemistry, and in situ hybridization methods. The described methods provide a comprehensive analysis of CNS tissues, ideal for assessing the phenotype, function, and localization of cells occupying the CNS compartment under homeostatic conditions and during disease pathogenesis.

This paper presents two optimized protocols for examining resident and peripherally derived immune cells within the central nervous system, including the brain, spinal cord, and meninges. Each of these protocols helps to ascertain the function and composition of the cells occupying these compartments under steady state and inflammatory conditions.

면역 세포의 다운스트림 분석을 위한 중추신경계 조직 및 관련 수막 분리

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier ...

면역학 및 감염병학

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find preventive and curative measures. The most effective way to achieve this is through direct examination of diseased and healthy brain tissue. The authors present a protocol to obtain, process, characterize and store good quality brain tissue donated by individuals registered in an antemortem brain donation program. The donation program includes a face-to-face empathic approach to people, a collection of complementary clinical, biological, social and lifestyle information and serial multi-dimensional assessments over time to track individual trajectories of normal aging and cognitive decline. Since many neurological diseases are asymmetrical, our brain bank offers a unique protocol for slicing fresh specimens. Brain sections of both hemispheres are alternately frozen (at -80 &#176;C) or fixed in formalin; a fixed slice on one hemisphere corresponds to a frozen one on the other hemisphere. With this approach, a complete histological characterization of all frozen material can be obtained, and omics studies can be performed on histologically well-defined tissues from both hemispheres thus offering a more complete assessment of neurodegenerative disease mechanisms. Correct and definite diagnosis of these diseases can only be achieved by combining the clinical syndrome with the neuropathological evaluation, which often adds important etiological clues necessary to interpret the pathogenesis. This method can be time consuming, expensive and limited as it only covers a limited geographical area. Regardless of its limitations, the high degree of characterization it provides can be rewarding. Our ultimate goal is to establish the first Italian Brain Bank, all the while emphasizing the importance of neuropathologically verified epidemiological studies.

This protocol describes a method to track individual brain-aging trajectories through a brain donation program and proper characterization of brains. Brain donors are involved in a long-term longitudinal study including serial multi-dimensional assessments. The protocol contains a detailed description of brain processing and an accurate diagnostic methodology.

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Induction of Leptomeningeal Cells Modification Via Intracisternal Injection

The protocol outlined here describes how to safely and manually inject solutions through the cisterna magna while eliminating the risk of damage to the underlying parenchyma. Previously published protocols recommend using straight needles that should be lowered to a maximum of 1-2 mm from the dural surface. The sudden drop in resistance once the dural membrane has been punctured makes it difficult to maintain the needle in a steady position. Our method, instead, employs a needle bent at the tip that can be stabilized against the occipital bone of the skull, thus preventing the syringe from penetrating into the tissue after perforation of the dural membrane. The procedure is straightforward, reproducible, and does not cause long-lasting discomfort in the operated animals. We describe the intracisternal injection strategy in the context of genetic fate mapping of vascular leptomeningeal cells. The same technique can, furthermore, be utilized to address a wide range of research questions, such as probing the role of leptomeninges in neurodevelopment and the spreading of bacterial meningitis, through genetic ablation of genes putatively implicated in these phenomena. Additionally, the procedure can be combined with an automatized infusion system for a constant delivery and used for tracking cerebrospinal fluid movement via injection of fluorescently labelled molecules.

We describe an intracisternal injection that employs a needle bent at the tip that can be stabilized to the skull, thus eliminating the risk of damage to the underlying parenchyma. The approach can be used for genetic fate mapping and manipulations of leptomeningeal cells and for tracking cerebrospinal fluid movement.

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

The protocol outlined here describes how to safely and manually inject solutions through the cisterna magna while eliminating the risk of damage to the ...

감염 및 선천성 면역을 연구하기 위한 배아 마우스 뇌 혼합 세포 배양

Establishing Mixed Neuronal and Glial Cell Cultures from Embryonic Mouse Brains to Study Infection and Innate Immunity

Models of the central nervous system (CNS) must recapitulate the complex network of interconnected cells found in vivo. The CNS consists primarily of neurons, astrocytes, oligodendrocytes, and microglia. Due to increasing efforts to replace and reduce animal use, a variety of in vitro cell culture systems have been developed to explore innate cell properties, which allow the development of therapeutics for CNS infections and pathologies. Whilst certain research questions can be addressed by human-based cell culture systems, such as (induced) pluripotent stem cells, working with human cells has its own limitations with regard to availability, costs, and ethics. Here, we describe a unique protocol for isolating and culturing cells from embryonic mouse brains. The resulting mixed neural cell cultures mimic several cell populations and interactions found in the brain in vivo. Compared to current equivalent methods, this protocol more closely mimics the characteristics of the brain and also garners more cells, thus allowing for more experimental conditions to be investigated from one pregnant mouse. Further, the protocol is relatively easy and highly reproducible. These cultures have been optimized for use at various scales, including 96-well based high throughput screens, 24-well microscopy analysis, and 6-well cultures for flow cytometry and reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) analysis. This culture method is a powerful tool to investigate infection and immunity within the context of some of the complexity of the CNS with the convenience of in vitro methods.

저자 스포트라이트: 감염 및 선천성 면역을 연구하기 위해 배아 마우스 뇌에서 혼합 신경 세포 및 신경교세포 배양 확립  

This protocol presents a unique way of generating central nervous system cell cultures from embryonic day 17 mouse brains for neuro(immuno)logy research. This model can be analyzed using various experimental techniques, including RT-qPCR, microscopy, ELISA, and flow cytometry.

감염 및 선천성 면역을 연구하기 위해 배아 쥐 뇌에서 혼합 신경 세포 및 신경교 세포 배양 확립

Models of the central nervous system (CNS) must recapitulate the complex network of interconnected cells found in vivo. The CNS consists primarily of ...

사후 인간의 두뇌 기증자로부터 Leptomeninges 이식편 문화의 유도

요약

더 많은 비디오 탐색

포스트 - 나탈 Murine 조직의 공동 문화를 Myelinating 풍부한 Oligodendrocyte 문화와 Oligodendrocyte / 신경 세포의 유도

E13 생쥐에서 Glial 제한된 엽 성의 전구 물질의 유도

해부하는 뇌 두피 Explants와 함께 사용하기위한 쥐 태아의 뇌척수의 절연

Ex 생체 내 흑색종 관련 연수막 질환을 연구하기 위한 흑색종 환자의 대뇌 척수액 내 순환 종양 세포 배양

Ex 생체 내 흑색종 관련 연수막 질환을 연구하기 위한 흑색종 환자의 대뇌 척수액 내 순환 종양 세포 배양

Ex 생체 내 흑색종 관련 연수막 질환을 연구하기 위한 흑색종 환자의 대뇌 척수액 내 순환 종양 세포 배양

면역 세포의 다운스트림 분석을 위한 중추신경계 조직 및 관련 수막 분리

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

감염 및 선천성 면역을 연구하기 위해 배아 쥐 뇌에서 혼합 신경 세포 및 신경교 세포 배양 확립