이 췌장 덕트 주입 절차의 전반적인 목표는 췌장에 있는 혈통 추적, 유전자 소개 및 세포 주 별 표적을 가능하게 하는 것입니다. 이 방법은 만성 췌장염, 당뇨병 및 췌장암을 포함하여 췌장에 영향을 미치는 질병에 대한 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있었습니다. 시작하려면, 그것의 복부가 시야의 중앙에 위치하도록 해부 현미경의 밑에 마취마우스를 놓습니다.
수술용 테이프로 동물을 고정한 다음 안과 연고를 눈에 적용하여 건조를 방지합니다. 다음으로, 제모 크림의 두꺼운 층으로 마우스의 복부를 덮습니다. 그리고 약 3 분 후, 부드럽게 모든 머리를 제거하기 위해 70 %에탄올에 담근 거즈로 크림을 닦아.
마지막으로, 70%에탄올로 피부를 닦아낸 다음 10%의 포비도요드 용액을 사용하여 오염 물질을 제거하고 피부를 소독합니다. 수술을 시작하려면 메스로 심포이성 공정에서 배꼽까지 이어지는 중간선 피부 절개를 만듭니다. 그런 다음 Adson 집게를 사용하여 회리죄를 들어 올리고 가위로 작은 중간 구멍으로 만듭니다.
길이가 피부 절개 길이와 같도록 회음의 중간선을 따라 컷을 확장합니다. 다음으로, 무딘 리트랙터를 사용하여 간을 끌어당기고 일반적인 담관을 노출한 후 곡선 불독 혈관 클램프로 고정하십시오. 십이지극과 아루가 집게로 식별하고, 십이지장의 두 번째 부분의 전방 표면에 흰색 반점으로 보이는 유두를 표시하기 위해 caudally 꺼내냅니다.
췌장 덕트를 식별하려면 십이지장 카우들렌을 철회한 다음 30-1/5 게이지 바늘을 십이지장에게 접선으로 배치하고 유두와 정면으로 맞은 벽에 구멍을 만듭니다. 솔루션을 주입하려면 생성된 십이지장 절제술을 통해 주입 펌프에 연결된 카테터를 도입하고 선박 내에서 볼 수 있지만 경미한 덕트 지류를 우회하지 않도록 1센티미터 이상 에 도달할 때까지 덕트를 따라 밀어 내십시오. 두 번째 곡선 불독 혈관 클램프로 카테터를 고정하여 고정합니다.
그런 다음 펌프를 켜서 용액 150 마이크로리터를 덕트에 주입합니다. 다음으로, 식염수의 약 1.5 밀리리터마우스의 복막에 주입한 다음, 증식을 방지하기 위해 증조거로 노출된 대장을 덮는다. 주입이 완료되면 고정 된 카테터를 방출하고 불독 클램프를 사용하여 췌장 덕트에서 부드럽게 제거하십시오.
그런 다음 일반적인 담관에서 클램프를 놓습니다. 지속적으로 단일 층에서 그들을 봉합하여 회중과 피부를 닫고 진통제의 두 복용량의 첫 번째를 관리, 두 번째는 다음 날 주어질 것이다. 그런 다음 열 램프 아래에 위치한 케이지에 마우스를 반환하고 음식과 물 광고 리비툼을 동물을 제공합니다.
그것은 흉골 회복에 명시 된 충분 한 의식을 회복 될 때까지 마우스를 관찰. 수술 7일 후, 안락사된 동물 췌장에서 비장, 간, 십이지장에서 돌출하여 대조군으로 활동합니다. 전체 격리 된 조직을 4 % para포름 알데히드 솔루션에 담그고 하룻밤 사이에 섭씨 4도에서 수정하십시오.
조직이 고정되면, 냉동은 하룻밤 섭씨 4도에서 30 % 자당 용액에 담그어 샘플을 보호합니다. 하룻밤 냉동 보호 후, 스냅 액체 질소에 샘플을 동결 하고 마이크로 토메를 사용하여, 6 마이크로 미터에서 조직 섹션을 잘라. 마지막으로, 형광 현미경의 밑에 단면도를 심상.
여기에 제시 된 췌장 섹션의 현미경 이미지는 GFP 유전자를 운반하는 AAV8의 가짜 수술 및 췌장 덕트 주입 후 7 일 마우스에서 배회. 간, 비장, 및 AAV8주입된 마우스로부터 분리된 십이지장들은 췌장이 눈에 띄는 GFP 발현을 드러내는 동안 어떤 GFP 신호를 도모하지 않았고, 췌장성 바이러스의 췌장별 전달을 확인하여 췌장성 주입을 확인했습니다. 일단 마스터되면 이 기술을 제대로 수행하면 10분 만에 수행할 수 있습니다.
이 절차를 수행하는 동안, 신중한 해부를 수행하고 카테터의 도입을위한 가장 작은 가능한 십이지장 절제술을 하는 것이 매우 중요합니다. 그것의 발달 후에, 기술은 설치류와 더 큰 동물 모형 둘 다에 있는 만성 췌장염, 당뇨병 및 췌장암을 포함하여 기관을 괴롭히는 병학의 수를 조사하기 위하여 췌장을 공부하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 췌장 덕트를 효과적이고 선택적으로 주입하는 방법에 대해 매우 잘 이해해야 합니다.
