Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
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우리는 Heng 린 응, 크리스 패튼, Petrina 존슨 및 우리의 식민지 유지 관리 방법의 개발에 그들의 공헌에 대 한 클레어 Doig 및 원고를 개선 하는 데 도움이 그들의 제안에 대 한 3 명의 익명 검토자 인정 합니다. 우리의 연구 국민 건강에서 아에 프로그램 그랜트와 장학금에 의해 지원 됩니다 그리고 의료 연구 위원회 및 번역 Wellcome 트러스트에서 부여. 파 한 호주 정부 연구 훈련 프로그램 장학금의 받는 사람입니다.

멜버른 인간의 윤리 위원회의 대학에 의해 승인 되었다 혈액 인간 주제에 모기의 먹이 (승인 #: 0723847). 제공 하는 모든 자원 봉사자 정보 서 면된 동의.
1. 애벌레 양육
참고: 모기는 26 ± 0.5 ° C 및 50-70% 상대 습도,이 식민지 유지 관리 프로토콜에 대 한 12시 12분 h (빛: 다크) photoperiod와에서 개최 됩니다. 이러한 조건을 평균 기후 조건, 호주 및 최적의 열 범위 Ae aegypti 생존과 개발44,,4546대와 비슷합니다. 높은 온도 Wolbachia 감염 모기 식민지에서의 손실 될 수 있습니다 고 피할된47이어야 한다. 우리는 근 친 결혼;을 최소화 하기 위해 인구 당 적어도 500 개인 유지 더 작은 크기의 식민지 유지 피트 니스 결과 [로스 외 미 발표] 가질 수 있습니다. 이러한 조건과 가정 적절 한 영양에서 평균 세대 시간은 ( 표 1참조)는 28 일 이다.
<ol><li>물고기 음식의 ~ 300 mg에 트레이 (그림 1A) (역방향 삼 투 물 또는 세 수도 물, 수돗물 사용 전에 h 24 쟁반에 두어서 생성), 물 3 L를 포함 하는 기판에 계란을 잠수함 (분쇄 한 태블릿 테이블의 자료를 참조 하십시오)와 해칭48유도 활성 건조 효 모의 몇 가지 곡물.</li>
	<li>해칭, 후에 1 일 물 (그림 1B)의 4 L을 포함 하는 쟁반에 약 500 애벌레를 전송, 리모콘 카운터를 사용 하 여 계산 하는 유리 피 펫을 사용 합니다. 각 트레이를 두 짓 눌린된 물고기 음식 정제를 추가 합니다. 필요한 경우, 애벌레 (그림 1A), 양육에 대 한 다양 한 크기의 용기를 사용 하지만 애벌레 밀도 밀을 피하기 위해 0.5 애벌레/mL 이하로 유지.</li>
	<li>확인 매일 트레이 애벌레가 충분 한 음식; 매 2 일 쟁반에 약 2 개의 식품 정제를 추가 합니다. 식품 광고 libitum 제공 하지만 0.5 mg/유 충/일은 개발 동기 이며, 신체 크기를 보장 하기 위해이 기간 동안 사용할 수 있는 일치 하는, 실험의 결과 혼동 수 있습니다 그렇지 않으면 보장 (대표 결과 참조).</li>
	<li>애벌레의 지나치게 하지 않도록 주의 특히 작은 양육 용기 덜 물 면적 및 볼륨. 물 흐린 경우 또는 경우 상당한 애벌레 사망률, 신선한 물;로 대체 사망률은 애벌레 최적으로 먹이 면 무시할 수 있어야 합니다.</li>
</ol>2. 성인 출현
참고: 애벌레 먹이 잘 하는 경우 부 화 후 5 일에서 pupate에 시작 되 고 대부분 부 화 후 7 일에 의해 pupate 한다. 성인 26 ° C에서 최적으로 유지 하는 경우 pupation 후 약 2 일 신흥 시작 됩니다 ( 대표 결과참조). 애벌레의 개발 때 하지 Wolbachia 감염에 의해 일반적으로 영향을 받는 충분 한 음식23,,3949제공 됩니다.
<ol><li>부 화 후 7 일 좋은 메쉬를 통해 용지함의 전체 내용을 부 어 (기 공 크기 0.4 m m). Ovicups에서 나중에 사용에 대 한 필터링 된 애벌레 물을 유지 ("혈액 먹이 산란" 섹션 참조). 메쉬를 반전 하 고 번데기를 전송 하는 물 200 mL와 함께 플라스틱 용기에 그것을 찍어. 모든 애벌레 남아 있으면 추가 음식을 제공 합니다.</li>
	<li>10% 자당 해결책 (그림 1 층)의 2 개의 컵 및 건조 (그림 1E)을 방지 하기 위해 젖은 솜 털의 2 개의 컵을 제공 하 여 성인 출현 케이지 (그림 1C)을 준비 합니다.</li>
	<li>번데기 섹스에 의해 정렬할 필요가 없는 경우 pupae의 lidded 컨테이너 감 금 소에 놓고 뚜껑을 약간 성인으로 등장할 수 있도록 열려 떠나. 또는, 익사를 최소화 하기 위해 컨테이너를 통해 거꾸로 깔때기를 놓습니다. 케이지 방지 느린 개발자에 대 한 선택에서 컨테이너를 제거 하기 전에 모든 성인 등장 확인 합니다.</li>
</ol>3. 번데기 Outcrossing 대 파는
<ol><li>번데기는 섹스 (예를 들어, outcrossing 위한)에 의해 정렬할 필요가, 플라스틱 쟁반 애벌레에서 번데기 하 고 별도 남녀 (그림 2) 플라스틱 용기 (그림 1A)에 물 200 mL와 함께 모든 24 h 각 성의 원하는 번호까지 에 도달 했습니다. 용기에 뚜껑을 배치 하 고 폐쇄 그들을 두고.</li>
	<li>성인은 컨테이너;으로 나타날 것입니다. 감 금 소 (그림 2C)로 발표 하기 전에 그들의 섹스를 확인 합니다. 어른 sexed 하지 올바르게 출현의 24 시간 이내 흡 인기와 성적 성숙에 도달 하기 전에 제거 합니다. 일단 남녀 확인 되었습니다, 감 금 소 모든 24 h에 성인을 릴리스.</li>
	<li>
Wolbachia를-자연적인 인구에 유사한 유전 배경의 감염 된 식민지 outcross Wolbachia추가 하 여-의 여성을 실험실 식민지에서 감 금 소에 감염 되지 않은 남성 ovitraps에 의해 수집 된 계란에서 파생 된 감염 필드39, 인구 당 500 개인의 소정의 밀도 유지.
	<ol>
<li>적어도 87.5% 필드 인구39유전자와 유사한 식민지를 생산 하기 위해 적어도 3 개의 연속 세대 outcrossing 반복 합니다. 중요:이 단계에서 남녀 올바른지 확인 (단계 3.1 참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>여성 애 aegypti 는 일반적으로 내 화물50짝짓기의 시간 더 수정입니다. 때 식민지 outcrossing, 허용 여성 남성 2 일에 대 한 별도 연습장에 성숙 하 고 다음으로 남성 여성을 발음에 모든 남성에 게 동등한 기회를 제공 하.</li>
</ol>4. 혈액 먹이 산란
<ol><li>
적어도 3 일 후에 마지막 여성 혈액 충분 한 시간을 성숙 수 있도록 수 유 전에 나왔다 기다립니다. 혈액 특히 장 수22,,2449저하 Wolbachia 감염 모기에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 출현 후 2 주 이내 여성을 피드. 먹이 속도 향상 시킬 수 유 전날 설탕 컵을 제거 합니다.
	<ol>
<li>여성 모기 먹이를 수 있도록으로 그들의 팔 뚝을 삽입 하는 자원 봉사를 부탁 드립니다. 대부분 여성 투입 5 분 이내에 피드 해야 하지만 느린 모이 통에 대 한 선택 영역을 줄이기 위해 15 분, 또는 때까지 모든 암컷은 눈에 띄게 부풀어 오른; 장에 팔 뚝을 두고 물린에서 손을 보호 하기 위해 라텍스 장갑은 옵션 이지만 권장.</li>
		<li>혈액 수 유 후 2 일으로 계란을 낳 기 위해 여성에 대 한 애벌레 양육 물을 포함 하 고 샌드 페이퍼 (그림 1G) (또는 필터 종이 (그림 1 H))의 스트립을 늘어서 두 개의 플라스틱 컵을 놓습니다. 부분적으로 그것을 축축한 유지 하는 물에서 샌드 페이퍼 스트립 잠수함. 물 산란 컵 밖에 서 그들의 알을 낳은에서 여성을 방지 하기 위해 다른 소스를 제거 합니다. 참고:는 컵에 수돗물을 사용할 수 있습니다 하지만 애벌레 양육 물 산란51,52 장려 및 여성 더 동기적으로 그들의 알을 낳는 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 달걀 수집 및 컨디셔닝
<ol><li>여성은 바로 위에 물 선; 샌드 페이퍼에 알 것 이다 수집 하 고 더 많은 계란이 마련 매일 샌드 페이퍼 스트립 교체. Note는 산란 최대 1 주일까지 계속 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 30 종이 타월에 blotting에 의해 부분적으로 건조 샌드 페이퍼 스트립 s, 계란을 꺼내 려 하지 않도록 주의 복용. 그리고 건조 종이 타월의 시트에서 스트립 포장 접착 비닐 봉투 (그림 1I)에 배치 합니다.</li>
	<li>(그림 3) 해 현미경 계란의 상태를 확인 하십시오. 샌드 페이퍼 스트립 너무 젖, 계란 물 (그림 3B), 침수 되 고 전에 해치 수 있습니다 하지만 너무 가혹 하 게 건조, 달걀 (그림 3C) 축소 수 있습니다.</li>
	<li>계란 3 일 후 컬렉션 넘어 언제 든 해치 할 수 있습니다. 차세대 개인의 큰 임의의 수영장에서 샘플링은 되도록 물의 동일한 컨테이너에 있는 모든 일에 걸쳐 수집한 각 식민지에서 모든 달걀을 부 화 한다.</li>
	<li>장기 보관을 위해 계란에에서 계속 높은 (> 80%) 습도에 봉인 된 컨테이너 약 20 ° c.에 이러한 조건 하에서 높은 해치 요금53,54를 유지 하면서 몇 달 동안 Wolbachia 없이 계란을 저장할 수 있습니다.</li>
	<li>일부 Wolbachia 감염 크게 나이49,55와 계란의 가능성을 줄일 수, 해치 Wolbachia에서 계란-라인 컬렉션 관련에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 1 주일 이내 감염 변종입니다. 혈액 더 많은 알 필요 하면 1 주일 후 다시 여성을 피드.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>하루</td>
			<td colspan="3">단계</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td colspan="3">해치 계란</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td colspan="3">쟁반에 수 애벌레</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td colspan="3">애벌레와 번데기 식민지 연습장에 전송</td>
		</tr>
<tr>
<td>17</td>
			<td colspan="3">혈액 피드 여성 성인</td>
		</tr>
<tr>
<td>21</td>
			<td colspan="3">계란을 수집 시작</td>
		</tr>
<tr>
<td>25</td>
			<td colspan="3">계란을 수집 완료</td>
		</tr>
<tr>
<td>28</td>
			<td colspan="3">해치 계란</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 개요 26 Ae aegypti 식민지 유지 관리 일정의 ° c. 계란의 부 화는 여성의 혈액 공급의 타이밍은 유연 하지만, 이러한 단계에서 긴 기간 피해 야 한다 특히 모기가 Wolbachia, 사망률을 최소화 하기 위해 감염에 대 한. 이 일정에 따라 최적으로 애벌레는 먹이 빠르게 또는 느리게 개발 하거나 모든 생활 단계에서 성숙 하는 모기에 대 한 선택을 최소화 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig1.jpg"> 그림 1: 장비 실험실에서 Ae aegypti 양육. 부 화 계란 또는 애벌레 500, 볼륨을 양육에 대 한 사용 (A) 플라스틱 용기 750과 5000 mL (왼쪽에서 오른쪽). 물 4 L에 보통 500 애벌레 제어 밀도에 애벌레를 양육에 사용 되는 (B) 쟁반 (C) 19.7 L 및 (D) 3 패 케이지 주택 성인 사용. 25 성인의 밀도 또는 리터 당 충분 한 공간을 제공 하기 위해 유지 되어야 한다. (E) 성인 물 소스로 제공 촉촉한 솜 털과 35 mL 컵. 자당 솔루션 코드 또는 치과 심지를 통해 제공 하는 설탕의 근원으로 (F) 35 mL 컵. (HG-) 컵 애벌레 양육 물으로 채워지고 늘어서 샌드 페이퍼 또는 필터 종이의 산란 기판 (G , H, 각각). (나) 지퍼 잠금 가방 샌드 페이퍼 스트립 또는 필터 종이의 저장을 위해 사용. 샌드 페이퍼에 검은 반점은 모기 계란. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig2.jpg"> 그림 2: 측면 (A) 및 pupae와 성인 Ae aegypti (C) 보여주는 그들의 성적 동종이 형의 등 쪽 (B) 플레이. 남성은 왼쪽 및 오른쪽 각 패널에 여성에 배치 됩니다. 먹 일 때 최적으로, 남성과 여성의 번데기 크기;으로 구분 됩니다. 여성 남성 (A) 보다 더 큰 고 아첨 측면 (B)는 남성에 비해 상대적으로 주먹코 cephalothorax. 성인 남성은 그들의 plumose 안테나와 긴 palps에 의해 주로 여성 모든 양육 조건에 쉽게 구별입니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig3.jpg"> 그림 3입니다. 다른 조건 하에서 4 일 오래 된 Ae aegypti 계란. (A) 본래 어떤 보이는 수 분 하지 않고 높은 (> 80%)의 습도 유지 하는 샌드 페이퍼 스트립에 계란. 올바르게 유지 관리 하는 경우 해치 요금 야생-타입 Ae aegypti 에 대 한 90% 이상 이어야 한다. (B) 계란 물 (조 숙한 해칭)에 빠져들 되 고 전에 해치 분리 된 달걀 모자와 보이는 유 충에 의해 구별 된다. 샌드 페이퍼 스트립 너무 촉촉한 유지 했다 나타냅니다. (C) 알을 너무 가혹 하 게 건조 축소 수 있습니다, 그리고 그들의 오목한 모양에 의해 명확 하 게 볼 수 있습니다. 샌드 페이퍼 뻣 뻣 한 경우 또한 알이 너무 건조 수 있습니다 나타냅니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

여기에 제시 된 Wolbachia의 유지 보수에 대 한 프로토콜에 따라-감염 된 Ae aegypti 일관성 있는 품질의 건강 한 모기 실험에 대 한 생산 및 필드 자료 열을 확인 해야. (참조57참조) 모기의 대량 양의 생산 우선 순위를 지정 하는 다른 프로토콜, 달리 방법 모두 세대 편안한 양육 조건, 구현 하 여 고에서 자신의 체력을 극대화에 집중 근 친, 선택 및 실험실 적응을 최소화 ?...

Aedes aegypti 모기는 뎅기열, Zika chikungunya1를 포함 하 여 세계에서 가장 중요 한 arboviruses의 일부를 전송 합니다. 이러한 바이러스 Ae aegypti 열 대 지방에 널리 분포2,,34를 확장 하는 계속 되 고 세계 보건에 대 한 증가 위협 되 고 있다. 여성 애 aegypti 우선적으로 인간의 피5 에 피드 하 고 따라서 인구는 가장 조밀한 도시 지역에서 특히 인 간에 게 가까운 근접에서 사는 경향이. 인간과이 가까운 협회를 통해 그들은 또한 타이어, 냄비, 하 수구 및 물 탱크6,7을 포함 하 여 인공 서식 지에서 번 식에 적응 했습니다. Ae aegypti 또한 쉽게 어디 그들은 유지 될 수 있는 어떤 특별 한 필요 조건 없이 Aedes 속8, 다른 종족과 달리 필드에서 직접 수집 후 실험실 환경에 적응 9,10. 유지 보수의 용이성 그들의 분야의 광범위 한 범위에 실험실에서 널리 공부 그들 본, 전송할 수 있습니다 궁극적으로 질병 모기 제어를 목표로 하는 것.
전통적으로, arboviral 제어 모기 인구를 줄이기 위해 살충제의 사용에 크게 의존 합니다. 그러나, 접근 수정된 모기 실험실에서 양육 하 고 자연적인 인구에 발표에서 증가 관심이 있다. 출시 된 모기는 유전자에11,12,13, 생물학14,15, 방사선 조사16, 화학 치료17,18를 통해 수정할 수 있습니다. 또는 결합 된 기법19 모기 인구를 억제 하거나 arboviral 전송20내 화물은 모기와 함께 그들을 대체 합니다.
Wolbachia 박테리아 arboviruses. 에 대 한 생물 학적 제어 에이전트로 현재 사용 되 고 있다 여러 변종의 Wolbachia 최근 Ae aegypti 배아 microinjection21,22,,2324를 사용 하 여 실험적으로로 소개 되었다. 이러한 변종 유포 및 떨어지면서 그들의 전송 잠재적인23,25,,2627,28 모기에 복제 하는 arboviruses의 용량을 줄일 . 그러나 Wolbachia 감염 감염 된 남성과 감염 되지 않은 여성22친구 때 특정 긴장 무 균을 유도 하는, 자손에 게 어머니에서 전송 됩니다. Wolbachia-감염 된 남성 최근에 다른 Aedes 종15,29에서 설명 하는 천연 모기 인구를 억제 하에 따라서 나올 수 있습니다. 그러나, 이후 Wolbachia 또한 Ae aegyptiarboviral 전송 억제, 모기 수 또한 나올 가난한 벡터 본토 인구를 바꿉니다. Ae aegypti Wolbachia 실험적으로 감염 됩니다 지금이 후자의 접근14,,3031를 사용 하 여 여러 국가에서 필드에 출시 되고있다.
Wolbachia-arboviral 컨트롤에 대 한 기반된 접근법 Wolbachia, 모기와 환경 간의 상호 작용의 소리 이해에 의존. Wolbachia 곤충의 광범위 한 범위에서 자연스럽 게 발생 하 고 모기에 도입 하는 긴장은 그들의 효과32에서 다양 한. Wolbachia 감염 신형 Ae aegypti24에 소개는, 그것은 모기 피트 니스, 재생산 및 다양 한 조건에서 arboviral 간섭에 미치는 영향에 대 한 각 스트레인을 특성화 하는 데 필요한. 실험실에서 엄격한 실험 따라서 Wolbachia 종자 분야에서 성공 하기 위한 잠재력을 평가 해야 합니다.
Wolbachia 감염 Ae aegypti 의 오픈 필드 자료 자주 출시 될 영역 당 모기의 수천 수만 수천 reared 각 주14,,3031요구할 수 있습니다. 초기 출시의 성공 그들의 통치33 과 짝짓기 성공34,35극대화에 큰 크기의 모기를 방출 하 여 개선할 수 있습니다. 그러나 모기도 그들은 행동과 필드 성능36,37에 영향을 줄 수 있는 생리에 변화를 일으킬 수 있습니다 장기 실험실 양육 분야에서 경험 하 게 됩니다 하는 조건에 적응 해야 38.
우리 애 aegypti 기본 장비를 사용 하 여 실험실에서 양육에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 두 야생-타입에 적합 및 Wolbachia-감염 모기, 후자는 요구할 수 있습니다 특별 한 관심으로 일부 Wolbachia 변종 모기 생활 역사 특색39, 에 상당한 영향을 미칠 40. 양육 조건과 밀 하 고 일관 된 크기는 벡터 역량 및 피트 니스 실험에 대 한 중요 하 고 모기는 필드 릴리스41에 대 한 건강 보장의 모기를 생산 하는 식품에 대 한 경쟁 방지 . 우리는 또한 선택 압력을 감소 시켜 실험실 적응 및 근 친 결혼을 최소화 하기 위해 예방 조치를 취해야 하 고 큰, 임의의 풀에서 샘플링은 되도록 다음 세대. 그러나, 실험실 환경 분명히 다른 필드 조건, 그리고 편안한 조건에서 장기적인 유지 관리 릴리스 필드37,42,43에 따라 모기의 피트 니스를 줄일 수 있습니다. . 우리가 따라서 크로스 여성 필드 수집 남성 주기적으로 실험실 라인에서 식민지 유전자 실험 비교에 대 한 유사 고는 대상 필드 인구39적응의 결과로. 방법 어떤 특수 장비를 필요로 하지 않는 및 필드 출시에 대 한 주당 개인의 수천의 수만 후방에 확장할 수 있습니다. 프로토콜은 또한 곤충 자연 인구에 설립에 대 한 운명에 대 한 중요 한 고려 사항 시간과 세대를 걸쳐 모기의 피트 니스 우선순위. 이 프로토콜은 특히 모기와 필드에 relatability의 일관 된 품질은 중요 한 실험적인 비교에 대 한 Ae aegypti의 유지 보수를 필요로 하는 대부분의 실험실에 적합 합니다.

<table><tbody><tr><td>Wild type &lt;em&gt;Aedes aegypti&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others&lt;sup class=&quot;xref&quot;&gt;39&lt;/sup&gt; for details</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;w&lt;/em&gt; Mel-infected &lt;em&gt;Aedes aegypti&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others&lt;sup class=&quot;xref&quot;&gt;23&lt;/sup&gt; for information on the strain</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;w&lt;/em&gt; AlbB-infected &lt;em&gt;Aedes aegypti&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others&lt;sup class=&quot;xref&quot;&gt;21&lt;/sup&gt; for information on the strain</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;w&lt;/em&gt; MelPop-infected &lt;em&gt;Aedes aegypti&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others&lt;sup class=&quot;xref&quot;&gt;22&lt;/sup&gt; for information on the strain</td></tr><tr><td>Instant dried yeast</td><td>Lowan</td><td></td><td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td></tr><tr><td>5 L plastic tub</td><td>Quadrant</td><td>Q110950</td><td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td></tr><tr><td>Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td><td>Tetra</td><td>16152</td><td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td></tr><tr><td>Plastic containers</td><td></td><td></td><td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td></tr><tr><td>Glass pipette</td><td></td><td></td><td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td></tr><tr><td>Clicker counter</td><td>RS Pro</td><td>710-5212</td><td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td></tr><tr><td>Rearing trays</td><td>Gratnells</td><td></td><td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td></tr><tr><td>Nylon mesh</td><td></td><td></td><td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td></tr><tr><td>Cages</td><td>BugDorm</td><td>DP1000</td><td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td></tr><tr><td>35 mL plastic cup</td><td>Huhtamaki</td><td>AA272225</td><td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td></tr><tr><td>35 mL plastic cup lid</td><td>Huhtamaki</td><td>GB030005</td><td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td></tr><tr><td>Cotton wool</td><td>Cutisoft</td><td>71841-13</td><td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td></tr><tr><td>White Sugar</td><td></td><td></td><td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td></tr><tr><td>Rope</td><td>M Recht Accessories</td><td>C323C/W</td><td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td></tr><tr><td>Plastic cup (large)</td><td></td><td></td><td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td></tr><tr><td>Sandpaper</td><td>Norton Master Painters</td><td>CE015962</td><td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>Whatman</td><td>1001-150</td><td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td></tr><tr><td>Latex gloves</td><td>SemperGuard</td><td>Z560979</td><td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td></tr></tbody></table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

실험적 감염 Wolbachia aedes aegypti 모기는 뎅기열, chikungunya, Zika 등 arboviruses의 확산을 제어 하는 프로그램에서 활용 되고있다. Wolbachia-감염 된 모기 호환 되지 않는 matings 통해 인구 크기를 줄이거나 또는 바이러스 전송 내 화물은 모기와 인구 변환 필드에 나올 수 있습니다. 성공할이 전략에 대 한 실험실에서 필드에 출시 모기 네이티브 모기와 경쟁 해야 합니다. 그러나, 실험실에서 모기를 유지 될 수 있습니다 근 친, 유전적 부동 및 실험실 적응 분야에서 자신의 체력을 줄일 수 있으며 실험의 결과 혼동 수 있습니다. 테스트 하려면 배포에 대 한 다른 Wolbachia 감염의 적합성 분야에서 그것은 여러 세대에 걸쳐 제어 된 실험실 환경에서 모기를 유지 하는 데 필요한. 우리 모두 Wolbachia적합 실험실에서 Ae aegypti 모기를 유지 하기 위한 간단한 프로토콜 설명-감염 및 야생-타입 모기. 방법 실험실 적응을 최소화 하 고 필드 모기에 실험의 관련성을 높이기 위해 outcrossing 구현. 또한, 식민지는 오픈 필드 자료에 대 한 자신의 적합성을 극대화 하기 위해 최적의 조건에서 유지 됩니다.

그림 4 에서는 Ae aegypti 애벌레의 개발에 차선의 영양의 효과 보여 줍니다. 때 컨테이너 애벌레 하루 당 식품의 0.25 밀리 그램 제공 됩니다 또는, 개발 시간 증가 둘 다 남성과 여성, 하 고 음식의 0.5 mg와 용기에 보다 적게 동기 제공 됩니다. 적절 한 음식 애벌레의 개발 기간을 통해 제공 되지 않은 경우 유지 관리 일정에 부정적인 영향을 미칠 수...

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Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

14.1K 조회수.  Bio21 Institute and University of Melbourne. Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

비디오: Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the development of new and innovative methods of mosquito control based around the Sterile Insect Technique (SIT)1-3. A control method known as RIDL&#160;(Release of Insects carrying a Dominant Lethal)4, is based around SIT, but uses genetic methods to remove the need for radiation-sterilization5-8. A RIDL&#160;strain of Ae. aegypti was successfully tested in the field in Grand Cayman9,10; further field use is planned or in progress in other countries around the world.
Mass rearing of insects has been established in several insect species and to levels of billions a week. However, in mosquitoes, rearing has generally been performed on a much smaller scale, with most large scale rearing being performed in the 1970s and 80s. For a RIDL&#160;program it is desirable to release as few females as possible as they bite and transmit disease. In a mass rearing program&#160;there are several stages to produce the males to be released: egg production, rearing eggs until pupation, and then sorting males from females before release. These males are then used for a RIDL&#160;control program,&#160;released as either pupae or adults11,12.
To suppress a mosquito population using RIDL&#160;a large number of high quality male adults need to be reared13,14. The following describes the methods for the mass rearing of OX513A, a RIDL&#160;strain of Ae. aegypti 8, for release and covers the techniques required for the production of eggs and mass rearing RIDL&#160;males for a control program.

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

To achieve population suppression of Aedes aegypti using the RIDL&#174; (Release of Insects carrying a Dominant Lethal) system, large numbers of male mosquitoes need to be released. This requires the use of mass rearing techniques and technology to provide reliable systems to obtain the maximum number of high quality male mosquitoes.

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

연구

환경과학

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

My name is Voia Friedman. I am associate researcher at Princeton University. And today I'm going to tell you about a few protocols that I developed to trans infect, to I initially to isolate, to go back from the heli of infected flies, and later on help to inject the heli feed to unaffected flights.So basically, this is a very simple protocol to isolate him oly for basics. And you will use this device from, from mepo that contains a filter that goes on top of an E.So you basically needs to put you, we start from around a hundred flies. You anize the flies, you put them into the filter device, you can just use a funnel and that will add our other fit very easily on this device and wash it with 70%ethanol.You just take the, take the future away, you can throw away the ethanol, and then after three times your last wash you do with molecule water because you don't want have the bacteria from the, with traces of ethanol. Well, and then you just go to a new weapon door and, and then you spin down on a micro, real micro for two minutes And later on how you can inject that. He only feed do unaffected flies.So basically take a double stick tape and usually these double stick tapes have two side, one side is a sticker than the other. So leave the sticker side up because that's the side that you're gonna glue that flies on top of it. And basically you'll, the gas apparatus, if you have this light on top of it, you'll be no gas flow and the flies you wake up if they're on top of the slide.So you can just direct the flow, making a little hood, a little chamber using tape. Then you direct the gas over the flies. So then you put your, this light here with the tape and you, you have your flies.Stick the flies on the top of the tape, all of them the same orientation, and put their head towards the direction that you'll be bringing the needle from. Because then you can just over the, the wing, you make sure since they fly, you don't want to fly. If they woke up during the procedure, don't want them to go away.So make sure that you take a little tip and pressure against the, the, the wings of the fly on the tail. And it's okay if they wings get damaged. And when you get rid, when you take the flies up the injection, most likely they'll lose their wings anyway, so they'll survive.That can, that can be useful because you're not gonna lose the flies that, so he puts a mineral oil on the micrometer for the back of the needle, then the needle injection polar, and then the, you can just adjust the pressure to bring the material up to the tip of the needle. I, I did to inject Somewhere between 10 to 15 nanoliters, but as, as long, as long as I'm consistents. Okay, so one important detail there is a cushion of this experiment is that the, the fly, once the apply is being injected when you saw the needle needs to come as far as you can through the upper part of the abdomen.Because here, basically when the needle penetrates, you have a, a, a, a, a bigger space to go up and down. And basically if it's close, closer to the cuticle, it's less likely they're gonna penetrate vital organs in the flight. You, it is very likely unlikely that you're gonna punch a hole in your gut, for instance, if that is gonna kill the flight that you are performing the surgery.My name is Voia Friedman. I am associate researcher at Princeton University in the lab of Eric Hels. And today I would like to tell you about this protocol that you just saw, the demonstration.So this protocol was done because we wanted to prove that UBA is capable of crossing tissues. So UBA is one of the most successful intracellular paras on the face of the earth. Infects from 20 to 70%of insects and many particles.And also is, is very important in terms of human diseases because also infect nematodes that transmit diseases like river blindness or s and ssis. And so, and CCA is our obligatory endo in, in these worms. And there's a great, a very big interest in using CCA also as means to control parasitic diseases transmitter by mosquito and Danny and this and by mosquito such as malaria and dengue.So this, this, this protocol basically was developed to show that once CCA inside the abdominal cavity of a fly, they can cross tissues and reach the germ. So basically what you can see here is the oph of the drosophila ovary and go back once present in the he leaf it, it can cross a pink peronial. She that is around the ovary.And then they cross a muscle layer. And actually one of the first places that they, they go inside the ovary is the somatic stem cell image. And then they can reach the germline.And this bacteria is transmitted the same way that mitochondria is transmitted is through, is through the mother transmitted, through the mother cyop plants present in the egg. So of course they needs to be present into the germline. So that's why this protocol is developed.And this protocol is, can be very useful to basically traditionally the way that people would try to trans infect wbaa basically take wbaa and introduce a new insect species. It would be through doing micro injections into the, into the embryo. But those are much more complicated.And basically here we are just taking advantage of the o biology since they are capable to cross tissues and moving into the stem cell tissues from, they can pass to the, through to the germline. So that's make easier taking UBA from certain, from, from certain species of insects that are infected and they can be transmitted to uninfected species. Prob I think it's the injection itself.Basically you need to be careful to mobilize the fly as well as you can. We are using double sided stick tape and you need to penetrate the needle basically as close to the, as parallel to the fly as possible so you don't go to deep. And it's less likely that we're gonna kill the fly after they're performing the surgery.

Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염

생물학

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of the virus in the mosquito tissues. This protocol is routinely used for studying mosquito-virus interactions, especially for identification of novel host factors that are able to determine vector competence. The entire experiment must be conducted in a BSL2 laboratory. Similar to Plasmodium falciparum infections, proper attire including gloves and lab coat must be worn at all times. After the experiment, all the materials that came in contact with the virus need to be treated with 75% ethanol and bleached before proceeding with normal washing. All other materials need to be autoclaved before discarding them.

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Once a gene is identified as potentially refractory for the dengue virus, it must be evaluated for it's role in preventing viral infections within the mosquito. This protocol illustrates how the extent of dengue infections of mosquitoes can be assayed. The techniques for growing up the virus in culture, membrane feeding mosquitoes human blood, and assaying viral titers in the mosquito midgut are demonstrated.

모기 (A. aegypti)와 감염 표현형 결정에 뎅그열 감염 프로토콜

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ascertain the viability of the purified Wolbachia and (3) maintain the now extracellular Wolbachia in cell-free medium.  Purified Wolbachia remain alive in the extracellular phase but do not replicate until re-inoculated into eukaryotic cells.  Extracellular Wolbachia purified in this manner will remain viable for at least a week at room temperature, and possibly longer.  Purified Wolbachia are suitable for micro-injection, DNA extraction and other applications. 


This video describes a method for purifying Wolbachia pipientis from an Anopheles gambiae cell line and then culturing the endosymbiont in cell-free medium. An assay for viability of the bacterium is demonstrated.

셀없는 매체 Wolbachia을 유지

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Small-Cage Laboratory Trials of Genetically-Engineered Anopheline Mosquitoes

Control of mosquito-borne pathogens using genetically-modified vectors has been proposed as a promising tool to complement conventional control strategies. CRISPR-based homing gene drive systems have made transgenic technologies more accessible within the scientific community. Evaluation of transgenic mosquito performance and comparisons with wild-type counterparts in small laboratory cage trials provide valuable data for the design of subsequent field cage experiments and experimental assessments to refine the strategies for disease prevention. Here, we present three different protocols used in laboratory settings to evaluate transgene spread in anopheline mosquito vectors of malaria. These include inundative releases (no gene-drive system), and gene-drive overlapping and non-overlapping generation trials. The three trials vary in a number of parameters and can be adapted to desired experimental settings. Moreover, insectary studies in small cages are part of the progressive transition of engineered insects from the laboratory to open field releases. Therefore, the protocols described here represent invaluable tools to provide empirical values that will ultimately aid field implementation of new technologies for malaria elimination.

The protocols reported here illustrate three alternative ways to assess the performance of genetically-engineered mosquitoes destined for vector control in laboratory-contained small cage trials. Each protocol is tailored to the specific modification the mosquito strain bears (gene drive or non-gene drive) and the types of parameters measured.

유전자 조작 된 아노펠리인 모기의 작은 케이지 실험실 시험

Control of mosquito-borne pathogens using genetically-modified vectors has been proposed as a promising tool to complement conventional control ...

유전학

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine the rate of infection, disseminated infection, and potential transmission of the virus in the mosquito population in question. These procedures are widely utilized with various modifications in vector competence evaluations globally. They are important in determining the potential role that a given mosquito (i.e., species, population, individual) may play in the transmission of a given agent.

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

The presented protocol can determine the vector competence of Aedes aegypti mosquito populations for a given virus, such as Zika, in a containment setting.

지카 바이러스를 사용하여 Aedes aegypti 모기에 벡터 역량 분석

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

면역학 및 감염병학

Detecting Wolbachia Strain wAlbB in Aedes albopictus Cell Lines

As a maternally harbored endosymbiont, Wolbachia infects large proportions of insect populations. Studies have recently reported the successful regulation of RNA virus transmission using Wolbachia-transfected mosquitoes. Key strategies to control viruses include the manipulation of host reproduction via cytoplasmic incompatibility and the inhibition of viral transcripts via immune priming and competition for host-derived resources. However, the underlying mechanisms of the responses of Wolbachia-transfected mosquitoes to viral infection are poorly understood. This paper presents a protocol for the in vitro identification of Wolbachia infection at the nucleic acid and protein levels in Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) Aa23 cells to enhance the understanding of the interactions between Wolbachia and its insect vectors. Through the combined use of polymerase chain reaction (PCR), quantitative PCR, western blot, and immunological analytical methods, a standard morphologic protocol has been described for the detection of Wolbachia-infected cells that is more accurate than the use of a single method. This approach may also be applied to the detection of Wolbachia infection in other insect taxa.

Detecting Wolbachia Strain wAlbB in Aedes albopictus Cell Lines

Four methods were used to detect intracellular Wolbachia, which complemented each other and improved the detection accuracy of Wolbachia infection of Aedes albopictus-derived Aa23 and Aa23-T&#160;cured of native Wolbachia infection using antibiotics.

Aedes albopictus 세포주에서 Wolbachia 균주 wAlbB 검출

As a maternally harbored endosymbiont, Wolbachia infects large proportions of insect populations. Studies have recently reported the successful regulation ...

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, most notably developmental arrest and reduced metabolism. Global gene expression profiling via RNA-Seq can provide important insights into the transcriptional mechanisms of photoperiodic diapause. The Asian tiger mosquito, Aedes albopictus, is an outstanding organism for studying the transcriptional bases of diapause due to its ease of rearing, easily induced diapause, and the genomic resources available. This manuscript presents a general experimental workflow for identifying diapause-induced transcriptional differences in A. albopictus. Rearing techniques, conditions necessary to induce diapause and non-diapause development, methods to estimate percent diapause in a population, and RNA extraction and integrity assessment for mosquitoes are documented. A workflow to process RNA-Seq data from Illumina sequencers culminates in a list of differentially expressed genes. The representative results demonstrate that this protocol can be used to effectively identify genes differentially regulated at the transcriptional level in A. albopictus due to photoperiodic differences. With modest adjustments, this workflow can be readily adapted to study the transcriptional bases of diapause or other important life history traits in other mosquitoes.

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

RNA-Seq analyses are becoming increasingly important for identifying the molecular underpinnings of adaptive traits in non-model organisms. Here, a protocol to identify differentially expressed genes between diapause and non-diapause Aedes albopictus mosquitoes is described, from mosquito rearing, to RNA sequencing and bioinformatics analyses of RNA-Seq data.

아시아 타이거 모기에 Photoperiodic 휴면의 RNA-서열 분석을위한 실험 및 생물 정보학 프로토콜,<em&gt; Aedes albopictus</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness parameters, in particular egg production and hatch rates at the individual level, conventional methods have put a substantial burden on investigators due to high labor intensity and laboratory space requirements. Described is a simple method using 24 well tissue culture plate with agarose in each well and digital imaging of each well to determine egg numbers and hatch rates at an individual level with substantially reduced time and space requirements.

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

Described is a time and space-saving method to count eggs and determine hatch rates of individual mosquitoes using 24 well tissue culture plates, which can substantially increase the scale and speed of fecundity and fertility assays.

24 잘 조직 배양 플레이트를 사용하여 Aedes aegypti에 대한 개선 된 Fecundity 및 불임 분석 (EAgaL 플레이트)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no prevention. Control of mosquito vectors can rely on chemicals applied to the immature and adult stages, which can contribute to the mortality of non-targets and more importantly, lead to insecticide resistance in the vector. The sterile insect technique (SIT) is a method of controlling populations of pests through the release of sterilized adult males that mate with wild females to produce non-viable offspring. This paper describes the process of producing sterile males for use in an operational SIT program for the control of Aedes aegypti mosquitoes. Outlined here are the steps used in the program including rearing and maintaining a colony, separating male and female pupae, irradiating and marking adult males, and shipping Aedes aegypti males to the release site. Also discussed are procedural caveats, program limitations, and future objectives.

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

The sterile insect technique (SIT) is used to control specific, medically important mosquito populations that may be resistant to chemical controls. Here, we describe a method of mass rearing and preparation of sterile male mosquitoes for release in an operational SIT program targeting the Aedes aegypti mosquito.

운영 멸균 곤충 기술 프로그램에서 방출하기 위해 조사되고 표시된 수컷 Aedes aegypti 모기 준비

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...