electroantennography의 경우, 구체적이고 일관된 생리 학적 상태의 모기를 사용하는 것이 신뢰할 수있는 결과를 얻는 데 중요합니다. 단계별 프로토콜은 모기에서 지속적인 전기 기록을 허용합니다. 이 방법은 여러 모기 종과 수컷과 암컷 모두에서 사용할 수 있습니다.
electroantennographic 기술은 또한 딱정벌레, 파리, 키스 벌레 및 개미를 포함한 다른 곤충 모델로 전치 될 수 있습니다. 시작하려면 분해를 방지하기 위해 보관된 섭씨 20도 냉동고에서 냄새 혼합물과 용매 제어 장치가 들어 있는 1.5밀리리터 호박색 바이알을 꺼냅니다. 다음으로, 10 마이크로 리터의 냄새 발생기 용액을 라벨이 붙은 유리 주사기 내부에로드 된 여과지 조각에 피펫팅합니다.
실험 당일 모기를 분리하십시오. 현미경으로 작업하면서 한 쌍의 집게를 사용하여 필라멘트로 두 개의 붕규산 모세관 끝을 부드럽게 부수십시오. electroantennography 또는 EAG 실험을 실행하기 전에 전극 홀더가 붕규산 파편없이 내부가 깨끗한지 확인하십시오.
그런 다음 전극 홀더의 은색 와이어를 순수한 표백제에 5분 동안 담가 와이어가 어둡고 무광택 회색으로 변할 때까지 염소화를 수행합니다. 그런 다음 전선을 헹굽니다. 고무 마개를 풀고 20게이지 바늘을 사용하여 모세관 내부를 식염수로 채웁니다.
모세관을 헹구고 두 모세관에 와이어를 삽입합니다. 와이어의 끝을 모세관의 끝에서 1mm 미만으로 유지하십시오. 모세관을 전극 홀더 내부의 고무 링에 깨지지 않고 통과시키고 기포가 없는지 확인한 후 고무 마개를 부드럽게 조입니다.
기준 전극 홀더의 더 넓은 개구부와 기록 전극 홀더의 더 작은 개구부가 있는 모세관을 사용하십시오. 헤드를 장착할 준비가 될 때까지 팁이 마르지 않도록 두 개의 장착된 전극 홀더를 습식 청소 물티슈에 그대로 두십시오. 에어 테이블이 위로 올라갔는지 확인하십시오.
항공사에 막힘이 없으며 공기가 켜져 있습니다. 실험 도중 교체를 방지하기 위해 의료용 공기 탱크가 가득 찼는지 확인하고 가습기의 기포를 확인하십시오. 컴퓨터, 소프트웨어 응용 프로그램 및 밸브 전원 공급 장치를 켭니다.
인터넷 연결을 확인한 후 제어 펄스를 전달하여 펄스를 전달하는 밸브가 작동하는지 확인합니다. 알루미늄 판을 얼음 위에 놓고 그 위에 습식 세정 물티슈를 바르고 모서리에 작은 전극 젤 덩어리를 놓습니다. 모기를 식히기 위해 얼음 위에 모기 컵을 놓습니다.
모기의 각 안테나 끝을 마이크로 가위로 자릅니다. 집게를 사용하여 전극 젤 덩어리 옆에 모기를 끌고 각 안테나의 끝을 젤에 부드럽게 담그십시오. 집게를 사용하여 모기 안테나를 당겨서 서로 옆에 두십시오.
마이크로 가위를 사용하여 모기의 머리를 자릅니다. 기준 전극의 끝을 젤에 부드럽게 담그고 목에 닿아 머리가 달라붙도록 합니다. 기준 헤드 전극을 마이크로 매니퓰레이터에 놓습니다.
두 전극 홀더를 앰프에 연결합니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 녹음 전극을 안테나 팁에 최대한 가깝게 배치합니다. 그런 다음 안테나 팁을 녹음 전극에 삽입합니다.
항공사 튜브를 모기 머리 준비물 가까이에 1cm 정도 놓습니다. 켜기 ampliifier와 노이즈 감속기를 사용하고 베이스라인 신호에 잡음이 없는지 확인합니다. 소음 수준이 만족스러우면 첫 번째 냄새 주사기를 에어라인 구멍에 삽입하여 테스트를 수행하고 패러데이 케이지를 닫습니다.
그런 다음 EAG 소프트웨어에서 녹음을 클릭하여 펄스를 전달합니다. EAG 반응을 밀리 볼트 단위의 진폭으로 측정 한 후 다음 냄새 또는 농도로 진행하십시오. 이 실험은 모기 종이 다른 화학 물질에 대해 다양한 후각 반응을 나타낼 수 있음을 성공적으로 보여줍니다.
음성 대조군으로 사용된 미네랄 오일에 대한 반응이 없었습니다. 전기적 노이즈로 인한 결과의 오류는 악어 클립을 사용하여 패러데이 케이지에 요소를 접지하여 줄일 수 있습니다. 동일한 냄새 물질에 대한 반응 역치는 모기 종에 따라 크기가 다를 수 있습니다.
예를 들어, Toxorhynchites rutilus septentrionalis 모기는 Aedes aegypti, Anopheles stephensi 및 Culex quinquefasciatus에 비해 매우 큰 EAG를 생산합니다. 양성 대조군인 벤즈알데히드에 대한 반응으로 큰 편향이 관찰되었습니다. 음성 대조군에 대한 반응이 부족한 반면, 미네랄 오일.
이러한 평균 안테나 응답은 막대 다이어그램에 표시됩니다. 추가적으로, 각 모기 종에 대한 특정 화학 물질을 검출하는 임계 값은 안테나를 제시하고, 화학 물질의 농도를 증가시키고, 용량 반응 곡선을 플로팅함으로써 결정되었다. 머리가 잘리고 장착 된 후 가능한 한 빨리 녹음을 시작하여 준비의 큰 반응을 보장하는 것이 중요합니다.
EAG는 모기 안테나가 주어진 농도에서 주어진 화학 물질에 반응하는지 여부를 결정할 수 있습니다. 그러나이 화학 물질의 균형을 결정할 수는 없습니다. 예를 들어, 그것이 유인제인지 회개인지.
