이 방법은 hOMING 수술 기술에 의해 최적화될 수 있는 섬세 이식과 같은 세포 치료 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니까? 이 기술의 주요 장점은 간단하고 빠르며 튜닝 할 수 있으며 생체 재료 검증도 매우 빠르다는 것입니다. 바늘 배치의 시각적 데모는 잘못 배치 된 바늘이 섬 누출을 초래할 수 있기 때문에 omentum 내부에 적절한 이식 주입을 보장하는 것이 중요합니다.
당뇨병을 유도하기 위하여는, 각 6 주 나이, 150 에서 190 그램 루이스 수신자 쥐에 연쇄상 조토신의 킬로그램 당 75 밀리그램을 주입하고, 주사 후에 첫번째 4 일 동안 매일 혈당 측정을 통해 당뇨병 상태를 확인하십시오. 쥐는 리터 당 2 그램 에 걸쳐 글리혈을 전시 할 때, 피하 당뇨병 합병증과 체중 감소를 방지하기 위해 하루에 긴 행동 인슐린의 여섯 단위를 주입. 200 picomolar 미만C-펩티드 수준으로 2일 연속 리터당 4~5그램 이상의 꼬리 정맥 혈당 수치의 두 가지 측정값이 있을 때 실험 코호트에 쥐를 포함한다.
펠릿 이식의 경우 마취 당뇨병 수혜자 동물의 발가락 핀치에 대한 반응부족을 확인하고 포비단 요오드로 목을 청소하십시오. 이식 부위를 면도하고 노출된 피부를 추가 포비도요오드로 청소하십시오. 3분 후, 1~5개의 포비단 요오드 용액에 1/2 인슐린 펠릿 1개를 살균하고 16 게이지 트로카를 사용하여 노출된 목 피부를 관통합니다.
그런 다음 가이드와 스타일트를 사용하여 펠릿을 삽입하고 개구부를 단일 점으로 봉합합니다. 더 많은 포비도요오드로 스티치를 청소하고 쥐가 저혈당을 피하기 위해 모니터링 및 음식케이지에서 회복 할 수 있도록합니다. 펠릿의 효율을 측정하기 위해, 인슐린 펠릿 이식 후 한 달 에 꼬리 정맥 혈액 C-펩티드 수준의 측정이 200 picomolar 이하로 유지될 때 실험 코호트에서 쥐를 포함하여 이식 후 1 개월 동안 매주 글리혈 감소를 측정한다.
인탈 매트릭스 섬 채우기의 경우, 섬 등가물에서 건강한 기증자 쥐로부터 분리 된 섬의 수를 계산하고 개별 1.5 밀리리터 튜브에서 받는 사람의 킬로그램당 7, 660 개의 섬을 준비합니다. 각 알리코에 500 마이크로리터의 CMRL 배지를 태아소 세럼 없이 세척하고 튜브당 갓 준비된 알지네이트 하이드로겔 캐리어 150마이크로리터에 섬 펠릿을 재차 놓는 후 튜브를 얼음에 배치합니다. 다음으로, 150 마이크로리터의 빈 알기네이트가 있는 외상성 21게이지 바늘을 장착한 1밀리리터 주사기를 적재하고, 그 다음으로 150마이크로리터의 알기네이트 플러스 섬이 있습니다.
주사기를 얼음 위에 놓고 첫 번째 수령인 동물의 목을 방금 시연한 대로 준비합니다. 메스를 사용하여 오래된 상처를 절개하고 집게를 사용하여 펠릿을 제거하십시오. 하나 또는 두 개의 단일 스티치 포인트로 스티치를 닫고 쥐를 척추 위치에 놓습니다.
각막 부위를 살균하고 면도합니다. 메스를 사용하여 흉골 바로 아래에 1/2 센티미터 복강경 을 만듭니다. 절개 주위에 젖은 살균 거즈를 놓고 위 옆에 있는 오멘탈 지방 패드를 식별합니다.
집게를 사용하여 복막 구멍에서 지방 패드를 부드럽게 당겨 거즈에 퍼뜨리십시오. 오멘탈 조직을 미리 데운 37도 의 멸균 식염수의 두 밀리리터로 잘 수화하고, 한 손에 작은 곡선 포셉으로 조직을 잡고, 다른 한 손으로 섬로드 주사기의 바늘과 오멘탈 층 사이의 오멘탈 가장자리를 관통한다. 바늘을 삽입 할 때, 주사를 시작하기 전에 오멘트 조직의 얇은 층에 둘러싸여 있는지 확인하십시오.
주입된 섬이 조직 전체에 퍼질 수 있도록 바늘을 완전히 삽입하고 천천히 섬 제제를 주입하기 시작합니다. 주사 하는 동안, 조직의 가장자리에 바늘을 철회, 바늘이 거의 밖으로 때 주사를 중지. 그런 다음 다음 위치에서 새 주입을 시작하기 전에 5초 동안 기다립니다.
그리고 입증 된 바와 같이 또 다른 3 ~ 4 개의 알리쿼트주입. 모든 하이드로겔이 분배되면 주입된 섬의 손실을 피하기 위해 바늘을 조심스럽게 철회하고, 주사가 끝날 때 주사기에 섬이 군집되지 않는지 확인한다. 모든 섬이 전달되었을 때, 조심스럽게 복강에 오멘티드 조직을 반환하기 전에 복강경의 연고와 벽을 수화.
쥐를 수분을 공급하기 위해 복강에 미리 따뜻워진 멸균 식염수 2밀리리터를 복강에 주입합니다. 그런 다음 연속 스레드 봉합사로 근육 벽을 닫고 단일 스티치 점으로 큐탄 층을 스티치합니다. 신진 대사 후속의 1 ~ 2 개월 후, 입증 된 대로 각 받는 사람의 외과 절개를 열고, 조심스럽게 절개 옆에 배치 된 거즈의 식염수 에 오멘타를 확산하는 집게를 사용합니다.
췌장 꼬리에 부착 된 지역에서 시작, 오멘티브 조직을 소비하고 입증 된 대로 각 동물을 닫기 전에 미리 따뜻하게 식염수의 두 밀리리터를 주입하는 가위를 사용합니다. 파라핀에 포함하기 전에 4% 파라포름알데히드에 회수된 오멘타를 수정합니다. 그런 다음, 마이크로톤에 조직의 4 마이크로미터 두께의 섹션을 획득하고 이식의 형태학적 평가를 위해 헤마톡슬린과 에오신 얼룩을 적용한다.
입증된 바와 같이 hOMING 방법을 사용하여 이식된 Dextran 구슬은 혈관 에 가깝게 자주 관찰되었고 지방 조직 내에 잘 이식되었다. 이 대표적인 동종 제 연구에서, 글리혈은 먼저 1/2 인슐린 펠릿1의 이식에 의해 입증된 바와 같이 이식된 다음, 리터당 약 2그램의 글리혈과 500개 이상의 피코몰라의 C-펩티드미아에 의해 입증된 것으로 서 게 이식하여 조절되었다. 또한, 이식 된 영양의 조직학적 분석은 혈관에 근접한 결과로 매우 재해석 된 섬을 밝혔습니다.
개발 후, 이 기술은 세포 치료 분야의 연구원들이 전임상 모델에서 생체 공학적 세포 미세 환경을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.
