인간 지방분지 유래 중간엽 줄기 세포의 분리 및 확장을 위한 효소 없는 방법

이 프로토콜은 가혹한 효소 또는 원심분리 단계를 사용하지 않고 ASC를 분리하는 간단한 비용 효율적인 방법을 제공하며, 이는 세포 표현형 및 행동을 변화시킬 수 있습니다. 가혹한 단계의 부족은 효소와 원심분리를 사용하여 고립된 세포보다는 더 적은 조작된 세포를 산출합니다, 실험관측이 격리 방법의 유물인지에 관해서는 질문을 최소화합니다. 이러한 절제 방법은 다양한 질병을 치료하거나 연구 응용을 감당할 수 있는 삶을 확장하기 위해 환자로 도입될 임상 관련 ASC를 생성할 수 있다.

말로 는 밍칭 방법을 설명하기가 어렵다. 시각적 데모는 다른 과학자들에게 조직 자체를 분해하는 학습의 번거 로움을 제공 할 수 있습니다. 유사한 각질 방법은 탯줄 조직에서 그 것과 같은 MSC의 그밖 인구를 격리하기 위하여 이용될 수 있습니다.

복부 성형술 조직 샘플을 다진 후 먼저 조직을 멸균 100mm 플레이트의 뚜껑으로 옮기습니다. 그런 다음 멸균 바늘을 사용하여 조직의 조각을 제자리에 고정하고 멸균 메스를 사용하여 조직을 1 밀리미터 미만으로 자른다. 조직을 신선한 튜브로 옮기고 샘플을 5~6회 반전하거나 흔들어 모든 층의 혼합을 보장합니다.

그런 다음 멸균 주걱으로 조직의 2.5 ~5 밀리리터를 100mm 진공 가스 플라즈마 처리 조직 배양 판으로 옮길 수 있습니다. 신선한 원심분리기 튜브에 부어 샘플의 부피를 측정합니다. 다음으로, 접시에 동등한 양의 조직 배양 매체를 추가하고 접시를 부드럽게 소용돌이쳐 내용을 혼합합니다.

충분한 수의 세포가 플레이트 의 바닥에 보일 때까지 이산화탄소5%에서 37°C의 플레이트를 배양합니다. 충분한 수의 세포가 접시에 기록되거나 7일 후에 더 빨리 발견되면 남은 모든 조직을 제거하십시오. 다음으로, 조직 배양 매체에서 ASC를 배양하여 70%의 합류에 도달할 때까지 또는 클러스터가 조밀해질 때까지 세포가 통과되어야 합니다.

1X 인산염 완충식식염으로 접시를 부드럽게 헹구십시오. 부착 된 세포를 트립시화하려면 인산완충식 식염수를 흡인하려면 각 플레이트에 0.25 %EDTA로 보충 된 트립신 1 밀리리터를 추가하고 5 분 동안 섭씨 37도에서 배양하십시오. 접시에 소량의 미디어를 추가하여 트립신을 비활성화합니다.

그런 다음 부드럽게 플레이트 의 상단에서 미디어 트립신을 피펫, 플레이트에서 약한 부착 된 세포를 잃고. 세포를 시드하려면 먼저 접시에 미디어를 추가합니다. 그런 다음, 드롭 와이즈 방식으로 세포를 추가 한 다음 플레이트를 통해 균일 한 분포를 보장하기 위해 접시를 소용돌이.

세 구절 후, 세포 측정 및 분화 분석 체형을 흐르십시오. 3개의 구절 후에, 리포아실리피및 복부 성형술 견본에서 격리된 ASC는 효소 소화 다음 고립된 ASC와 유사한 MSC 형태및 표현형을 가지고 있는 것을 발견되었습니다. 다른 MSC와 마찬가지로 절제된 격리된 ASC는 CD45에 대해 음수이며 CD73, CD90 및 CD105에 대해 양수입니다.

조직을 다진 경우 ASC가 조직에서 마이그레이션할 수 있도록 각 조각의 표면적이 충분히 커야 합니다. 이들은 응용 프로그램의 넓은 범위에 사용할 수있는 기본 줄기 세포입니다. 격리된 ASC는 생체 내 또는 시험관 내 모든 다운스트림 응용 프로그램에 사용할 수 있습니다.