동맥 경화증 폰 데이터를 제시하는 에스트로겐 결핍 마우스를 포함하는 실험실 모형은 부족합니다. 이 절차는 폐경 후 심장 혈관 기능 장애의 외인성 에스트로겐 치료를 선별하는 데 특히 도움이됩니다. 이 기술의 주요 장점은 이중 등쪽 절개없이 오뇌 절제술이 심한 복강 부호 접착 및 염증을 피하는 보다 쉽고 시간이 덜 소요되는 방법입니다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생인 유장인(Yue-Zhang Yin)이 될 것입니다. APOE 녹아웃 마우스에서 양측 의 병모 절제술을 수행하기 위해 먼저 페달 반사에 대한 반응부족을 확인하고 동물을 가열 패드에 경향이있는 위치에 놓습니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 수술을 받는 커튼으로 동물을 덮습니다.
중간라인에 1센티미터 절개 측면, 그리고 1센티미터 측면을 코스트 립에 만들고, 집게를 사용하여 피하 조직을 무뚝뚝하게 해부합니다. 해부 고글을 사용하여 복강내의 흰색 지방 조직을 식별합니다. 마이크로 가위와 마이크로 집게를 사용하여, 복강에 도달할 때까지 근막을 통해 0.5~1센티미터 절개를 하고 마이크로 포셉을 사용하여 백색 지방 조직을 부드럽게 후퇴시킵니다.
지방 조직에 싸여 있는 분홍색 뽕나무 모양난소는 복강 내에서 관찰되어야 합니다. 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 0.5~1센티미터의 근위용기와 자궁 경적을 장식하고 마이크로 가위를 사용하여 난소를 수확합니다. 나머지 조직을 복강에 돌려보내고, 개별 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 근육과 피부층을 따로 닫습니다.
그런 다음 동물의 모순된 면에 난소를 수확하고, 방금 설명했듯이, 마우스가 전체 재림까지 모니터링이 있는 가열 패드에서 회복할 수 있도록 합니다. 일주일에 한 번, 수술 후 12 주 전에 주부터, 균형에 각 가짜와 실험 동물의 체중을 측정. 플라즈마 총 콜레스테롤 및 트리글리세라이드 측정을 위해 12주차에 70%에탄올로 복부 가슴 부위를 준비하고 25게이지 바늘을 오른쪽 심실에 삽입합니다.
천천히 흡인, 혈액의 1 밀리리터가 주사기로 흐르고, 0.5 어금니 EDTA의 10 마이크로 리터를 포함하는 1.5 밀리리터 수집 튜브로 샘플을 분배. 튜브를 여러 번 철저히 반전하여 EDTA를 혈액에 섞어 즉시 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 수집 후 30분 이내에 샘플을 400배, 섭씨 4도에서 20분 간 원심분리합니다.
섭씨 영하 80도에서 보관을 위해 플라즈마 상체를 신중하게 수집합니다. 대동맥을 격리하려면 12주차에 PBS로 채워진 50 밀리리터 주사기에 25 게이지 바늘을 부착하고 실험 동물의 왼쪽 심실에 바늘을 삽입합니다. 관류로부터 고압을 피하기 위해 오른쪽 아트리움을 자르고, 분당 PBS의 05~08 밀리리터에서 심장 조직을 퍼퓨아.
실험실 조직으로 관류 유체를 흡수하고 가위와 집게를 사용하여 갈비뼈와 폐를 제거합니다. 대자의 더 나은 보기를 위해, 내부 장기를 제거하기 위해 복강을 엽니 다. 요약 분면으로 심장을 잡고 대마를 척추에서 비강 분기까지 분리할 수 있도록 합니다.
그런 다음 심장과 대어타를 48시간 동안 4%파라포름알데히드로 수정한 후, 실온에서 또는 몇 시간 동안 2~8도의 식염수에 티슈 샘플을 저장합니다. 고콜레스테롤 식단의 12 주 후, ovariectomized 마우스는 혈장 총 콜레스테롤과 트리글리세라이드 농도의 현저한 증가를 보여줍니다. 17베타 oestradiol 또는 헤이즐넛 스프레드를 통해 PPD로 구두로 투여된 Ovariectomized 마우스는 샴 조작 마우스보다 플라즈마 총 콜레스테롤 농도가 현저히 낮습니다.
플라즈마 트리글리세라이드 수준은 17베타 oestradiol로 구두로 투여되었지만 PPD로는 투여되지 않는 소혈관 축화 마우스에서 감소합니다. 증가 된 체중으로 경향은 암소 한 마우스에서 관찰 되는 동안, sham-조작 된 쥐에 비해, 체중에 중요 한 변화는 전반적인 관찰, 동물의 4 그룹 사이. 상승 대동맥의 최대 플라크는 이러한 동물에서 관찰 심장 기능의 전반적인 감소와 함께, 다른 모든 그룹에 비해, ovariectomized 마우스에서 증가한다.
또한, 대동맥 병변 영역의 평균 백분율은 전체 대동맥 부위에 비해, 난소성 마우스에서 현저히 증가된다. 예상대로, 이러한 병변의 존재는 17 베타 oestradiol, 또는 PPD 치료로 감소된다. 오병 절제술 수술의 주요 위험은 높은 사망률을 초래하는 요관 결찰입니다.
또한 대동맥 손상을 피하기 위해 신장 동맥 가지 근처에서 깊이 자르는 것을 기억하십시오.
