실험 및 임상 증거는 간 허혈 재관류가 암세포를 순환하고 미세 전이성 질환의 성장을 순환시킴으로써 전이성 초점의 형성을 증가시킬 수 있음을 보여줍니다. 이 재현 가능한 뮤린 모델은 전이의 확립과 간 내의 기존 종양의 성장에 대한 관련 연구를 허용합니다. 간 수술, 출혈 및 패혈증 쇼크는 모두 간 허혈 재관류와 관련이 있으며 전이성 질환의 성장에 영향을 줄 수 있습니다.
이러한 기술은 임상 환경에서 종양 성장에 대한 허혈 재관류의 해로운 영향을 더 잘 진단하고 예방하기 위한 노력의 일환으로 이 현상의 연구를 허용합니다. 마취 된 8 - 12 주 된 남성 C57 블랙 6 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 포비도네 요오드 스크럽으로 노출 된 복벽 피부를 소독하고 피부를 들어 올리기 위해 이쑤시개를 사용합니다. 외과 메스를 사용하여 피부에 중간 개개를 하고 복부 근육과 복막을 들어 올려 복부 함량을 노출시키기 위해 3센티미터 중간선 절개를 생성할 수 있습니다.
절개 과정의 양면과 시포이트 과정에서 hemostat를 배치 한 후, 꼬리를 아래로 당기고 테이프를 당겨 복부를 확장하고 췌장 지방 조직에서 비장을 분리하고 노출하는 6 인치 멸균 면 팁 어플리케이터를 사용합니다. 다음으로, 어떤 세포 덩어리를 해리시키고 28 게이지 바늘을 장착한 0.5 밀리리터 인슐린 주사기로 세포를 로드하기 위해 관심있는 암 세포 현탁액을 소용돌이시다. 천천히 조심스럽게 비장의 끝에 세포의 100 마이크로 리터를 주입, 주입 하는 동안 비장을 안정화 하는 부드러운 압력을 추가 하는 동안 복 막 구멍으로 가능한 종양 유출을 흡수 하는 바늘 천자의 측면에 인접 면 팁을 배치.
성공적인 주사는 간 색깔의 변화에 의해 분명할 것입니다. 모든 세포가 전달되면 PBS에 젖은 멸균 거즈 조각을 해부 된 영역에 놓고 마우스를 15 분 동안 가열 패드에 배치하여 암세포가 시스템 내에서 순환 할 수 있도록하십시오. 허혈 및 재관류 손상을 유도하기 위해 두 개의 촉촉한 면 팁을 사용하여 내장을 캐비티에서 부드럽게 이동하여 포털 정맥을 노출시키고 마우스를 해부 현미경 아래에 놓습니다.
중앙분리대를 들어 올리고 횡측간 엽을 다이어프램에 대고 들어올립니다. 중앙엽과 오른쪽 측면 엽 사이에 작은 촉촉한 면봉을 놓아 클램핑을 위한 충분한 공간을 만들고, 포탈 트라이어드 뒤에 용기 딜레이터 포셉을 조심스럽게 전달하고, 선박 딜레이터 집게를 사용하여 4-0 폴리프로필렌 봉합사의 10센티미터 조각을 사용하여 뒤로 전달하고 포털 트라이어드를 들어 올립니다. 잠금 장치가 있는 마이크로 세리파인 클램프 어플리케이터를 사용하여 중앙간 엽에 미세 혈관 클램프를 배치하여 포털 트라이어드의 모든 구조를 폐백합니다.
희게 관찰될 때, 4-0 폴리프로필렌 봉합사와 작은 면봉을 제거하고 소장을 복강에 조심스럽게 돌려보라고 한다. 복벽을 PBS에 흠뻑 젖은 거즈로 덮고 거즈를 플라스틱 랩으로 덮어 증발 손실을 최소화합니다. 그런 다음 마우스를 60분 동안 가열 패드에 다시 놓습니다.
허혈 간격을 통해, 허혈 증의 증거를 확인하기 위해 오른쪽 내측, 왼쪽 내측 및 측면 엽의 창백한 희미하게 시각화합니다. 부상 기간이 끝나면 클램프를 제거합니다. 비장 절제술을 수행하려면 부드러운 집게로 비장을 조심스럽게 들어 올리고 핸드헬드 소생 장치를 사용하여 과도한 출혈을 피하기 위해 비장 혈관을 소생시하십시오.
소작 섹션에서 혈관을 분리하여 비장을 제거하고 즉시 4-0 폴리 프로필렌 봉합사를 사용하여 근육과 피부 절개를 이중 층 봉합사 패턴으로 닫습니다. 그런 다음 마우스를 전체 복구할 때까지 모니터링하여 홈 케이지에 다시 배치합니다. 외과 적 스트레스는 간 내의 미리 확립 된 미세 메타아제의 양을 크게 증가시킵니다.
이러한 차이는 허혈성 재관류후 2주 후에도 비허혈 레퍼퓨전 마우스에 비해 관찰된다. 간 허혈 재관 류 및 종양 세포 주입 실온 및 세포 생존가능성에 의해 영향을 받을 수 있습니다., 그래서 이러한 변수를 제어 하는 주의. 이 기술은 전이성 질환의 성장에 대한 외과 적 스트레스와 간 손상의 효과에 대한 연구를 용이하게합니다.
이것은 연구원이 수술 유도한 종양 성장의 현상을 더 잘 이해하는 것을 도울 것입니다.
