이식 모델은 종종 외과 전문 지식이 필요한 면역 학적 연구를위한 귀중한 도구입니다. 여기에서, 우리는 쥐에 있는 이성애 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 실행 가능한 접근을 제시합니다. 우리의 모형의 모든 중요한 단계를 강조하고 단순화함으로써, 외과 배경이 없는 연구원은 적당한 시간 안에 이 모형을 마스터할 수 있어야 합니다.
두 이식 모델은 허용 오차 및 거부 메커니즘에 대한 귀중한 통찰력을 제공하며 다양한 종에 적용 될 수 있습니다. 우리는 사전 수술 훈련없이 개인에게이 모델을 가르치는 경험이 많이 있습니다. 중요한 단계를 배운 후, 우리는 죽은 동물과 인내와 충분한 연습을 조언한다.
기증자 심장 절제의 경우, 마취 된 7 - 22 주 된 쥐 기증자 동물에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 눈 윤활유를 적용하고 복부와 흉부 모피를 제거하기 위해 기계 클리퍼를 사용합니다. 가열 베이스에 쥐를 배치하고 탄성 밴드와 수술 테이블의 베이스에 사지를 고정합니다. 노출된 피부를 70%에탄올로 소독하고 중앙분리대를 수행합니다.
개절에 리트랙터를 삽입하고 멸균 된 면봉을 사용하여 기증자의 왼쪽에 내장을 동원하여 열등한 베나 카바를 노출시하십시오. 다음으로 열등한 베나 카바를 천자에 맞아 얼음-차가운 동위 원소식 용액의 1밀리리터에 용해된 500개의 국제 헤파린 유닛을 정맥 주사할 수 있습니다. 면 봉면을 사용하여 가벼운 압축에 의해 바늘 을 철회 한 후 천공 부위에서 출혈을 중지합니다.
다이어프램을 절개하고, 기증자의 양쪽에 측면 흉부 절제술을 수행하고 흉부 벽을 고정시하십시오. 두 개의 마이크로 바늘 홀더를 사용하여 무딘 준비로 심낭과 골신경을 제거하십시오. 멸종의 경우 복부 혈관을 횡단하고 프로브 뾰족한 가위의 무딘 가지를 횡회 회복 부비동에 삽입합니다.
압축을 사용하여 심장의 가벼운 소달 견인하에서 가능한 한 해부하는 오름차순 대동맥과 폐 동맥을 해부하십시오. 우수하고 열등한 베나 카바와 폐 정맥 주위에 단일 5-0 합자를 배치하고 가능한 한 dorsally로 합자 단계적 조여. 조직 등갈을 합자에 세게 하고 심장을 추출합니다.
각질된 심장을 견딜 수 있도록 정맥 카테터의 18게이지 캐뉼라를 사용하여 얼음 냉기, 동상 풍삭용 액약 30밀리리터를 1000개의 국제 헤파린 유닛으로 보충한 후 15밀리리터의 식염수 용액에 심장을 배치하십시오. 방금 입증 된 대로 10 에서 14 주 된 받는 사람 쥐를 준비 한 후, 따뜻하고 젖은 압축에 받는 사람의 왼쪽 상단에 내장을 동원. 그리고 외과 현미경 또는 충분한 대안을 조정합니다.
각각 십이지장과 근위 제주눔을 동원한 후, 5~7개의 완전한 배율을 사용하여 면봉과 무딘 해부를 사용하여 복부 대동맥과 열등한 베나 카바를 노출한다. 두 개의 마이크로 바늘 홀더를 사용하여 요추 정맥을 손상시키지 않고 복부 혈관을 상승시키고 쿨리 혈관 클램프를 용기에 놓습니다. 30~45도 아치형 27도 게이지 캐뉼라를 사용하여 복부 혈관에 구멍을 뚫습니다.
그리고 포츠 가위를 사용하여 구멍 부위를 기증자 혈관의 루멘 크기와 일치하는 세로 절개로 확대합니다. 혈전을 제거하고 수술 후 혈전증을 방지하기 위해 식염수로 혈관을 인퓨전하고 접목을 정분에 넣습니다. 간단한 중단 8-0 두 가지 사용 모노필라멘트 비 리설주 봉합사, 세로 절개의 두개골과 caudal 모서리에 받는 사람 복부 대동맥에 기증자 상승 대동맥을 고정.
기증자의 승천 대동맥을 받는 사람의 복부 대동맥을 마취하기 위해 8-0으로 마취의 전반을 수행하면서 수신자 혈관의 오른쪽에 접목을 배치합니다. 모노필라멘트 봉합사. 그런 다음 접목을 받는 선박의 왼쪽에 놓고 해부학의 후반을 수행합니다. 기증자 폐 동맥을 두개골과 caudal 모서리에 두 개의 코너 매듭과 유사한 방식으로 열등한 베나 카바에 고정하십시오.
각 구석에 매듭으로 기증자 혈관을 고정 한 후, 해부학의 전반부에 대한 내반 빈민가를 실행하기 위해 선박의 내부에 외부에서 스티치를 배치합니다. 봉합사를 묶기 전에 안쪽에서 바깥쪽으로 다른 스티치를 놓습니다. 해부학의 후반을 마친 후 주변 색전증을 방지하기 위해, 해부학의 후반의 매듭을 조이기 전에 식염수로 해부학을 플러시.
마취제 주위에 혈전성 거즈를 놓고 쿨리 혈관 클램프를 조심스럽게 방출하여 이식 재퍼퓨전을 허용합니다. 가벼운 압축 및 살균 된 면봉으로 출혈을 관리하십시오. 약 60초 후에 심장이 뛰기 시작해야합니다.
조심스럽게 내장을 교체하고 복부 근막과 피부를 별도의 연속 3-0 폴리필라멘트 실행 봉합사로 닫습니다. 적절한 실험 시점에서, 입증된 대로 기증자 쥐 심장을 수확하고 멸균 메스 또는 멸균 가위를 사용하여 심장을 3mm 크기의 조각으로 분쇄합니다. 콜라게나아제 밀리리터당 0.5밀리그램으로 보충된 배양 배지 의 20 밀리리터에서 37도에서 30분간 소화합니다.
소화의 끝에서, 배양 배지를 제거하면서, 큰 포공 체에 조직을 추가합니다. 이소토닉 식염수 용액의 5 ~10 밀리리터를 추가하고 체를 통해 조직 슬러리를 변형시. 그리고 세포 현탁액을 두 번 원심 분리 한 후 40 마이크로 미터 세포 여과기를 통해 필터링하십시오.
남은 세포를 수집하기 위해 이소토닉 식염수 용액의 5~10밀리리터로 여과기를 헹구세요. 그리고 원심분리 후, 밀리리터당 5회 10분의 5의 농도에서 식염수 용액에서 고립된 쥐 심장 세포를 재중단한다. 셀 용액으로 1 밀리리터 주사기를 적재하고 마취된 받는 동물을 측면 위치에 배치하여 대상 귀가 위로 향합니다.
손가락과 양면 테이프로 귀를 고정하고 27 게이지 캐뉼라를 사용하여 시각적 모세관 용기에 가까운 20 마이크로리터의 심장 근육 세포 용액을 받는 사람의 귀에 피하합니다. 적절한 실험 관찰 기간 후, 배수 자궁 경부 림프절을 추출하고 관심의 적절한 다운스트림 분석을 수행한다. Syngenic 이식은 이식 실패의 표시 없이 100 일까지 살아남았습니다.
특정 기증자-받는 사람 조합 이종성 심장 이식 거부의 다른 속도 귀착될 수 있습니다. 거부 된 마음의 Cryostat 섹션은 면역 효과세포의 침투증가를 드러내고, 시너지 이식은 면역 세포가 크게 자유롭습니다. 경부 림프절 절제술 및 구강 심장 근육 세포 주입 후 림프절 세포를 배출의 재 자극 분석은 동종 이식 받는 사람에 이성화 심장 조직에 대한 고유 변형 특정 면역 반응을 밝혀, 사이토카인 프로파일링과 같은 추가 면역 학적 분석을 보증.
바늘을 삽입하고 추출할 때 혈관을 조심스럽게 처리하십시오. 협착을 방지하기 위해 봉합사에 너무 많은 주의를 기울이지 마십시오. 각 해부학에 너무 많은 바늘을 두지 마십시오.
