エレクトロアンテノグラフィーでは、信頼できる結果を得るには、特定の一貫した生理学的状態の蚊を使用することが重要です。段階的なプロトコルにより、蚊の永続的なエレクトロアンテノグラフィ記録が可能になります。この方法は、いくつかの蚊種、および男性と女性の両方で使用できます。
エレクトロアンテノグラフィ技術は、カブトムシ、ハエ、キスバグ、アリなどの他の昆虫モデルにも転置できます。まず、匂い物質混合物と溶剤コントロールを含む1.5ミリリットルの琥珀色のバイアルを、劣化を防ぐためにそれらが保管されている摂氏20度の冷凍庫から取り出します。次に、10マイクロリットルの匂い物質溶液を、ラベルの付いたガラスシリンジ内にセットされたろ紙にピペットで取り出します。
実験当日に蚊を隔離する。顕微鏡下で作業しながら、一対の鉗子を使用してフィラメントで2つのホウケイ酸毛細血管の先端を静かに破ります。エレクトロアンテンノグラフィーまたはEAG実験を実行する前に、電極ホルダーが内部に透明で、ホウケイ酸の破片がないことを確認してください。
次に、電極ホルダーの銀線を純粋な漂白剤に5分間浸して、ワイヤーが暗くなり、つや消し灰色になるまで塩素化を行います。次に、ワイヤーをすすぎます。ゴム栓を緩め、20ゲージの針を使用してキャピラリーの内側を生理食塩水で満たします。
毛細血管をすすぎ、ワイヤーを2つの毛細血管に挿入します。ワイヤーの先端を毛細管の先端から1ミリメートル未満に保ちます。キャピラリーを電極ホルダー内のゴムリングに壊さずに通し、気泡がないことを確認した後、ゴム栓を軽く締めます。
参照電極ホルダーの開口部が広く、記録電極ホルダーの開口部が小さいキャピラリーを使用してください。ヘッドを取り付ける準備ができるまで先端が乾かないように、取り付けられた2つの電極ホルダーをウェットクリーニングワイプの上に置いておきます。エアテーブルが上がっていることを確認します。
航空会社に閉塞はなく、空気はオンになっています。実験途中で交換しないように医療用空気のタンクがいっぱいになっていることを確認し、加湿器内の気泡を確認します。コンピューター、ソフトウェアアプリケーション、およびバルブ電源の電源を入れます。
インターネット接続を確認したら、制御パルスを配信して、パルスを配信するバルブが機能していることを確認します。その上にウェットクリーニングワイプを付けて氷の上にアルミニウム板を置き、隅に電極ゲルを少し置きます。蚊を冷やすために氷の上に蚊のカップを置きます。
蚊の各アンテナの先端をマイクロハサミでクリップします。鉗子を使用して、電極ゲルのドロップの横にある蚊をドラッグし、各アンテナの先端をゲルにそっと浸します。鉗子を使用して、蚊のアンテナを隣り合わせに保ちながら引き出します。
マイクロハサミを使って蚊の頭を切り刻む。参照電極の先端をゲルにそっと浸し、首に接触させて、頭をくっつけます。基準ヘッド電極をマイクロマニピュレータに配置します。
両方の電極ホルダーをアンプに接続します。マイクロマニピュレータを使用して、記録電極をアンテナ先端のできるだけ近くに配置します。次に、アンテナチップを記録電極に挿入します。
エアラインチューブを蚊の頭の準備の近くに1センチメートルで配置します。電源を入れます ampリファイアとノイズリデューサー、ベースライン信号にノイズがないことを確認します。騒音レベルが満足のいくものになったら、最初の臭気シリンジをエアラインの穴に挿入してテストを実行し、ファラデーケージを閉じます。
次に、EAGソフトウェアの[記録]をクリックしてパルスを配信します。EAG応答をミリボルト単位の振幅として測定し、次の臭気または濃度に進みます。この実験は、蚊種がさまざまな化学物質に対してさまざまな嗅覚応答を示す可能性があることを実証することに成功しました。
陰性対照として使用された鉱油に対する反応の欠如があった。電気的ノイズによる結果の誤差は、ワニ口クリップを使用して要素をファラデーケージに接地することで減らすことができます。同じ匂い物質に対する応答閾値は、蚊の種によって大きさが異なる場合があります。
たとえば、トキソリンチテス・ルチルス・セプテントリオナリスの蚊は、ネッタイシマカ、ハマダラカ、アカイエカと比較して、非常に大きなEAGを生成します。陽性対照であるベンズアルデヒドに応答して大きなたわみが認められた。ネガティブコントロールに対する反応は不足していましたが、鉱油。
これらの平均触角応答を棒グラフで示します。さらに、各蚊種について特定の化学物質を検出する閾値は、アンテナを提示し、化学物質の濃度を増加させ、用量反応曲線をプロットすることによって決定された。準備の優れた応答性を確保するために、ヘッドを切り刻んで取り付けた後、できるだけ早く録音を開始することが重要です。
EAGは、蚊のアンテナが所与の濃度で所与の化学物質に反応するかどうかを決定することを可能にする。しかしながら、それはこの化学物質のバランスを決定することを可能にしない。たとえば、それが誘引剤であろうと悔い改めであろうと。
