Pour l’électroanténnographie, l’utilisation de moustiques dans un état physiologique spécifique et cohérent est essentielle pour obtenir des résultats fiables. Le protocole étape par étape permet des enregistrements électroanténnographiques durables chez les moustiques. La méthode peut être utilisée chez plusieurs espèces de moustiques, et chez les mâles et les femelles.
La technique électroantennographique peut également être transposée à d’autres modèles d’insectes, y compris les coléoptères, les mouches, les punaises et les fourmis. Pour commencer, retirez les flacons d’ambre de 1,5 millilitre contenant les mélanges odorants et un contrôle de solvant du congélateur à 20 degrés Celsius dans lequel ils sont stockés pour éviter leur dégradation. Ensuite, pipeter 10 microlitres de la solution odorante sur un morceau de papier filtre chargé à l’intérieur d’une seringue en verre étiquetée.
Isolez les moustiques le jour de l’expérience. En travaillant au microscope, briser doucement l’extrémité de deux capillaires borosilicatés avec des filaments à l’aide d’une paire de pinces. Avant d’exécuter l’électroanténnographie, ou expérience EAG, assurez-vous que les porte-électrodes sont dégagés à l’intérieur, sans débris borosilicatés.
Ensuite, effectuez la chloration en trempant les fils argentés des porte-électrodes dans de l’eau de Javel pure pendant cinq minutes, jusqu’à ce que les fils deviennent gris mat foncé. Rincez ensuite les fils. Desserrez le bouchon en caoutchouc et utilisez une aiguille de calibre 20 pour remplir l’intérieur du capillaire avec une solution saline.
Rincez les capillaires et insérez les fils dans les deux capillaires. Gardez la pointe du fil à moins d’un millimètre de l’extrémité du capillaire. Passez le capillaire à travers l’anneau en caoutchouc à l’intérieur du porte-électrode sans le casser et serrez doucement le bouchon en caoutchouc, après avoir vérifié qu’aucune bulle d’air n’est présente.
Utilisez le capillaire avec l’ouverture la plus large sur le porte-électrode de référence et l’ouverture plus petite sur le support d’électrode d’enregistrement. Laissez les deux porte-électrodes montés sur une lingette de nettoyage humide pour empêcher l’embout de sécher jusqu’à ce qu’il soit prêt à monter la tête. Assurez-vous que la table d’air est relevée.
Il n’y a pas de blocage dans la compagnie aérienne et l’air est allumé. Vérifiez que le réservoir d’air médical est plein pour éviter de le changer au milieu de l’expérience et confirmez la présence de bulles dans l’humidificateur. Mettez sous tension les ordinateurs, les applications logicielles et l’alimentation de la vanne.
Après avoir vérifié la connexion Internet, délivrez une impulsion de commande pour vérifier que la vanne délivrant les impulsions est fonctionnelle. Placez une plaque d’aluminium sur de la glace avec un morceau de lingette de nettoyage humide dessus et mettez une petite cuillerée de gel d’électrode dans un coin. Placez une tasse anti-moustique sur de la glace pour laisser le moustique refroidir.
Clipser la pointe de chaque antenne du moustique avec des micro-ciseaux. Utilisez une pince pour faire glisser le moustique à côté de la cuillerée de gel d’électrode et trempez doucement l’extrémité de chaque antenne dans le gel. À l’aide de forceps, retirez les antennes des moustiques tout en les maintenant les unes à côté des autres.
Hachez la tête du moustique à l’aide de micro-ciseaux. Trempez doucement l’extrémité de l’électrode de référence dans le gel et placez-la en contact avec le cou, en laissant la tête s’y coller. Placez l’électrode de la tête de référence sur un micromanipulateur.
Connectez les deux porte-électrodes à l’amplificateur. Utilisez le micromanipulateur pour placer l’électrode d’enregistrement aussi près que possible des extrémités de l’antenne. Insérez ensuite les pointes de l’antenne dans l’électrode d’enregistrement.
Placez le tube de la compagnie aérienne près de la préparation de la tête de moustique, à un centimètre. Allumez l’amplificateur et le réducteur de bruit et assurez-vous que le signal de base n’est pas bruyant. Une fois que le niveau sonore est satisfaisant, insérez la première seringue odorante dans le trou de l’avion pour effectuer le test et fermer la cage de Faraday.
Cliquez ensuite sur enregistrer sur le logiciel EAG pour donner l’impulsion. Mesurez les réponses EAG en amplitude en millivolts, puis passez à l’odeur ou à la concentration suivante. L’expérience démontre avec succès que les espèces de moustiques peuvent présenter des réponses olfactives variables à différents produits chimiques.
Il n’y avait pas de réponse à l’huile minérale, qui a été utilisée comme témoin négatif. L’erreur dans les résultats due au bruit électrique peut être réduite en mettant les éléments à la terre dans la cage de Faraday, à l’aide de pinces crocodiles. Le seuil de réponse à la même substance odorante peut varier en ampleur pour différentes espèces de moustiques.
Par exemple, les moustiques Toxorhynchites rutilus septentrionalis produisent de très gros EAG, par rapport à Aedes aegypti, Anopheles stephensi et Culex quinquefasciatus. Une grande déviation en réponse au témoin positif, le benzaldéhyde, a été remarquée. Bien qu’il n’y ait pas eu de réponse au contrôle négatif, l’huile minérale.
Ces réponses antennaires moyennes sont présentées dans un diagramme à barres. De plus, le seuil de détection d’un produit chimique spécifique pour chaque espèce de moustique a été déterminé en présentant l’antenne, les concentrations croissantes du produit chimique et en traçant une courbe dose-réponse. Il est important de commencer l’enregistrement le plus tôt possible après que la tête a été hachée et montée, afin d’assurer une grande réactivité de la préparation.
L’EAG permet de déterminer si les antennes des moustiques répondent à un produit chimique donné à une concentration donnée. Cependant, il ne permet pas de déterminer l’équilibre de ce produit chimique. Par exemple, s’il s’agit d’un attrait ou d’un repentir.
