환자 유래 이질은 환자 결과를 정확하게 예측할 수 있는 즉각적인 약물 반응 데이터를 제공하는 단기 적인 방법입니다. PD 플랫폼은 지역 종양의 병리학 적 및 건축 적 특징을 가능한 한 가깝게 반영하는 3D 컨텍스트에서 약물 반응을 검사 할 수 있습니다. Explant는 약물의 물질 대사와 작용 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 제공하고 새로운 약동적 바이오 마커의 식별을 용이하게 할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다.
실험을 시작하기 전에 모든 수술 장비를 70 % 산업용 메틸화 된 증류주 솔루션으로 청소하십시오. 10센티미터 의 문화 요리를 얼음 위에 25 밀리리터의 신선한 매체로 채웁니다. 핀셋을 사용하여 시편을 치과 왁스 표면에 옮기고 두 개의 피부 이식 블레이드를 사용하여 조직을 약 2 ~3 입방 밀리미터의 조각으로 자랍시다.
10센티미터 접시에 담근을 옮기고 실온에서 24시간 배양하기 위해 10% 비완충된 포르말린 용액을 함유한 1밀리리터 튜브에 6~9개의 티슈를 배치합니다. 6개의 웰 플레이트의 원하는 수의 우물을 우물당 1.5 밀리리터의 신선한 배지로 채웁니다. 그리고 조개 식배 삽입 접시를 각 우물에 배치하여 매체 위에 떠 있습니다.
각 삽입 디스크에 6~9개의 허실을 배치하고 복구를 허용하기 위해 5%의 이산화탄소 인큐베이터에 16시간 인큐베이션을 보관합니다. 다음 날, 새로운 접시의 각 우물에 신선한 매체와 약물을 추가합니다. 차량 제어에 대한 우물을 포함합니다.
모든 약물 치료가 준비되면 핀셋을 사용하여 새로운 6 개의 웰 플레이트의 각 우물에 1 개의 인서트를 전달하여 이산화탄소 인큐베이터에서 24 ~ 48 시간 배양하십시오. 약물 치료 후, 10 %의 포르말린을 포함하는 새로운 여섯 개의 우물 판으로 디스크를 전송합니다. 그리고 각 각 각 절기의 상단에 10 % 포르말린의 몇 방울을 추가하여 실온에서 24 시간 동안 잠복하는 고정으로 완벽한 커버리지를 보장하십시오.
다음 날, 70 % 산업 메틸화 용액에 작은 작기 스폰지의 적절한 수를 담급니다. 그리고 기스펀을 장술 카세트 안에 놓습니다. 모든 스폰지가 배치되었을 때, 삽입 된 디스크에 접촉 각 explant의 약물 치료 측과 함께 하나의 스폰지에 동일한 약물 치료 조건에서 모든 각기를 전송합니다.
각 각 절제의 상단에 또 다른 미리 담근 스폰지를 놓고 카세트에 이출을 확보하기 위해 카세트를 닫습니다. 그런 다음 조직학적 처리를 진행하기 전에 70 % 산업용 메틸화 솔루션에 카세트를 침수합니다. 스캔 후 교육 분석을 수행하고 스탬프가 포함된 스캔을 적절한 분석 소프트웨어에 로드합니다.
단일 모드 보기에서 이미지를 탐색하고 스캔을 선택하여 본질적인 형광으로 분석하고 스캔합니다. 단일 뷰에서 본질적인 형광 스캔을 통해 자동 불발 피커를 클릭하여 스테인드 조직 영역에 세그먼트를 그립니다. 마커와 색상을 편집한 후 각 불소와 연결된 상자에 마커 이름을 입력합니다.
소프트웨어가 업로드된 모든 이미지에서 본질적인 형광의 강도를 빼도록 이미지를 준비하십시오. 세그먼트 조직 단계를 화면 상단의 클릭하여 조직 세분화 훈련 창을 엽니다. 조직 범주 패널에서 분할할 각 조직 범주의 이름을 입력합니다.
관심있는 조직 범주에서 세포의 그룹 주위에 영역을 그리려면 그리기를 클릭합니다. 그런 다음 다음 조직 범주로 전환하고 새로운 영역을 그립니다. 모든 훈련 영역이 정의되면, 기차 조직 세그먼트를 사용하고, 훈련 정확도가 정착 할 때까지 기다립니다.
100%에 가까운 값으로 세그먼트를 클릭하여 조직을 분류할 수 있습니다. 조직 세분화의 품질을 확인한 후 세포 세분화를 클릭하고 셀룰러 구획을 선택하여 세그먼트로 선택합니다. 핵 구성 요소를 구성하려면 일반적인 강도 슬라이더를 사용하여 핵 픽셀을 감지하는 데 사용되는 임계값을 조정합니다.
라이브 피드백은 미리 보기 창에서 제공됩니다. 핵 픽셀의 클러스터를 분할하려면 핵 부품 분할 패널에서 핵의 염색 품질을 가장 잘 설명하는 버튼을 선택하고 슬라이더 막대를 사용하여 분할 감도를 조정합니다. 그런 다음 모든 이미지를 분할하려면 모든 세그먼트를 클릭합니다.
모든 이미지가 분할된 경우 표현형 패널에서 감지할 표현형 목록을 추가하고 표현형의 이름을 해당 텍스트 상자에 입력합니다. 표현형을 편집하여 특정 셀을 선택하고 드롭다운 메뉴에서 해당 표현형을 선택합니다. 교육 선택을 완료한 후 열차 분류기를 클릭하여 각 표현형의 결과를 평가합니다.
표현형을 모두 진행하고 프로젝트를 저장하고 내보내기를 클릭합니다. 일괄 처리 분석 탭을 선택하고 배치 알고리즘 또는 프로젝트 상자에 프로젝트를 로드합니다. 이미지와 테이블을 내보내려면 내보내기 옵션의 모든 상자를 선택하고 슬라이드 를 클릭하고 이전에 준비된 배치에 대한 스탬프가 포함된 모든 이미지를 로드합니다.
그런 다음 한 스탬프의 시작 배치 분석으로 실행을 클릭하고 획득한 경우 해당 데이터를 내보냅니다. 세포 생존가능성의 마커를 위해 염색된 NSCLC 의 다중 스펙트럼 화상 진찰은, 개별 세포 집단의 식별 및 phenotyping을 허용하고, 암소 종양 마이크로 환경 내의 종양 및 기질 성분의 식별을 허용합니다. 세포 생존성 마커의 조직 및 세포 세분화는 입증된 바와 같이 다중 스펙트럼 이미지 얼룩, 관심있는 약물로 치료된 환자 유래 된 자궁에서 세포 사멸 및 증식을 정량화하는 데 사용될 수 있다.
예를 들어, 이러한 분석에서, Nivolumab으로 치료된 종양으로부터의 조직 샘플에서, 처리된 종양 샘플에 비해 더 많은 수의 죽어가는 세포가 확인되었다. 또한, 도시된 바와 같이, 얼룩진 해부로부터 공간 정보를 추출하는 능력은 세포 간 거리의 계산을 허용한다. 또한, 이 종은 광범위한 공간 프로파일링 또는 질량 세포측정에 사용될 수 있으며, 이는 샘플의 3D 구조를 유지하면서 자회사 해상도에서 수백 개의 바이오마커를 동시에 프로파일링할 수 있습니다.
PD는 면역 요법의 효능을 예측할 수 있었습니다. 예를 들면, 면역 체크포인트 억제제에 민감하거나 저항하는 케이스를 구별하고 이 구별을 뒷받침하는 기계장치를 조사하는 것이 가능할 수 있었습니다.
