이 연구는 급성 신장 손상의 병생리학을 연구하고 잠재적 인 치료 양식에 탐구하는 데 사용할 수있는 신장 허혈 재관류 손상의 재현 가능한 큰 동물 모델을 설명합니다. 이 방법은 매우 재현 가능하며 개방된 접근법에 비해 신체에 대한 모욕의 양을 제한하여 염증 반응의 영향을 최소화합니다. 이 전임상 모델은 신장 이식, 심근 쇼크, 신장 허혈의 결과형 경질 시술, 장기간심장 순환 투순환 정지 시간을 가진 심혈관 절차와 같은 임상 시나리오를 모방합니다.
먼저 베타딘을 적용한 다음 95%에탄올을 세 번 적용하여 목의 오른쪽 측면 부위를 소독합니다. 멸균 방식으로 동물을 드레이프. 오른쪽 경동맥과 오른쪽 경정맥의 카테터화에 대한 컷다운을 수행한다.
흉골 절제술 을 거꾸로 철회하고 오른쪽 경동맥과 오른쪽 경정맥으로 해부하십시오. 동맥과 정맥 모두에 5F 혈관 조영술 칼집을 삽입합니다. 실크 2-0 봉합사로 고정하십시오.
중공 바늘로 동맥을 뚫어 셀딩거 기술을 사용하여 5F 혈관 조영술 칼집을 왼쪽 대퇴 동맥에 삽입합니다. 루멘을 통해 부드러운 팁 가이드 와이어를 삽입하고 대퇴 동맥으로 진행합니다. 바늘을 제거하는 동안 손으로 안내선을 고정하십시오.
가이드 와이어 위에 혈관 조영술 칼집을 통과하여 대퇴 동맥에 넣고 필요한 경우 초음파 지침을 사용하여 가이드 와이어를 철회하십시오. 전이 성 항응고를 달성하기 위해 킬로그램 당 200 IU를 정맥 으로 투여합니다. 혈관 조영술을 수행하려면 형광술 아래에 요등 조영제를 주입하여 신장 동맥을 식별하십시오.
신장 동맥을 식별하고 가이드 카테터에서 가이드 와이어를 수동으로 진행합니다. 오른쪽 경동맥을 통해 왼쪽 신장 동맥에 5F JL4 안내 카테터를 배치합니다. 왼쪽 대퇴 동맥을 통해 오른쪽 신장 동맥에 두 번째 5F JL4 안내 카테터를 배치합니다.
가이드 와이어를 사용하여 각 신장 동맥에서 5F 경피성 경피성 경피 성 혈관 성형술 또는 PTA 팽창 카테터를 지시하십시오. 각 풍선 카테터를 제자리에 배치하고 압력 선을 각 카테터에 연결합니다. 압력 모니터에 동맥 펄스 파 형태의 존재를 확인하여 카테터의 올바른 위치를 확인하십시오.
각 풍선을 팽창시키고 풍선 내부의 약 2.5 대기압의 압력을 목표로합니다. 신장에 혈류의 중단을 확인하려면 풍선 카테터의 끝에서 펄스 파형의 평탄화를 관찰한다. 식염수로 1:1 희석에 요분 처리 된 콘트라스트 배지를 주입하고 신장 혈관의 오태평양을 확인하십시오.
60분간의 폐색 후, 신장 동맥에서 풍선 카테터를 조심스럽게 수축하고 제거합니다. 신장 동맥 가부장제 및 신장 침전의 확립을 확인하기 위해 1:1 희석 된 대조 매체를 사용하여 혈관 조영술을 수행하십시오. 왼쪽 대퇴 동맥에서 5F 혈관 조영술 칼집을 제거합니다.
카테터라이제이션 부위의 압력에서 30분간 신청하십시오. 활성 응고 시간의 정상화까지 프로 타민의 킬로그램 당 3 밀리 그램의 관리에 의해 헤파린의 효과를 반전. 수술 후 기간 동안 소변을 샘플링하려면 피부에 중단된 스티치를 사용하여 실크 2-0 봉합사로 폴리 카테터에 튜브를 고정하십시오.
혈액 샘플링의 경우, 오른쪽 경동맥에 혈관 조영술 칼집과 오른쪽 경정맥을 제자리에 두고 실크 2-0 봉합사로 고정하십시오. 절개 부위에 부피바카인 킬로그램당 3밀리그램을 투여하여 통증을 최소화합니다. 허혈이 끝난 후 총 2시간 동안 0.9염화 나트륨으로 동물에게 수분을 공급합니다.
두 층의 중단 스티치를 사용하여 실크 2-0 봉합사로 목 절개를 닫습니다. 수술 후 통증을 최소화하기 위해 시간당 25~50마이크로그램의 펜타닐 패치를 동물 뒤쪽에 배치하고 동물이 깨어날 때까지 기계적 환기에 대해 모니터링합니다. 최종 혈액 및 소변 샘플을 수집하고 소변 출력을 계산합니다.
심포이드에서 중간 골반까지 크기-10 블레이드를 사용하여 중간 라인 복강경 절개를 수행합니다. 직선 측면 리트랙터를 사용하여 복부 피부를 후퇴시킵니다. 좌우 레트로페리톤을 노출하기 위해 복벽의 측면 복막 부착물을 해부한다.
신장 동맥과 정맥을 식별하고 무뚝뚝하게 해부합니다. 신장 동맥과 정맥을 2-0 실크 봉합사를 사용하여 리게이트하고 조직및 대사 분석을 위한 전체 조직 표본을 수집하기 위하여 양측 신장절제술을 능력을 발휘합니다. 신장 기능은 소변 출력, eGFR, 혈장 크레아틴 및 BUN을 결정함으로써 평가되었다.
양측 신장 동맥 폐색의 60 분 후, 소변 출력은 크게 감소하고 레퍼퓨전 후 6 및 24 시간에이 방법을 유지했다. 유사하게, eGFR에서 현저한 감소가 관찰되었는데, 이는 2시간 6시간, 24시간 의 재퍼퓨전에서 허혈의 끝에 비해 기준선에서 떨어졌다. 플라즈마 크레아티닌은 기준선에 비해 2시간, 6시간, 24시간 의 레퍼퓨전으로 크게 증가하였다.
BUN은 6시간 24시간 의 레퍼퓨전에서 기준선과 비교하여 증가했습니다. 명백한 괴사 및 출혈 지역은 양측 신장 허혈의 60 분의 끝과 24 시간의 레퍼퓨전끝에 두 신장에 고르지 않게 분포되었습니다. 마슨의 삼색 염색은 신장 피질의 근위 투굴에 위치한 컨물류 응고 괴사를 밝혀냈습니다.
플라스틱 임베디드 섹션도 평가되었습니다. 모든 매슨의 트리크롬 슬라이드는 세포 괴사, 브러시 테두리 손실, 주조 형성 및 튜블러 팽창에 대해 평가되었습니다. 급성 관 괴사, 또는 ATN 득점, 신장 피질과 수질에 상당한 부상을 보였다.
이 프로토콜을 수행할 때 RC의 근접성에서 풍선 사이트의 위치를 확인하고 신장으로의 흐름을 완전히 가려놓습니다. 그것은 그 물에 꼬이지 않는지 확인하십시오. 이 절차에 따라, 혈관 내 카테터 흐름 프로브는 신장 혈류를 평가하기 위해 신장 동맥에 삽입 될 수있다, 또는 신장 생검은 신장 조직 손상을 평가하기 위해 수행 될 수있다.
