HTX 연구소는 새로운 구조를 해결하기 위해 적용할 수 있는 구조화된 파이프라인에 완전 자동화된 단백질에 대한 온라인 액세스를 제공하고, 더 큰 규모의 단편 및 레간 스크리닝을 수행합니다. 과학자들이 인터넷을 통해 전체 결정학 공정을 제어할 수 있는 CRIM 소프트웨어에서 자동화된 크리스탈 수확 및 CRI 냉각을 위한 CrystalDirect 기술의 조합을 통해. 먼저 웹 브라우저에서 크리스탈 그래픽 정보 관리 시스템을 열고 로그인한 후 샘플 메뉴를 클릭하여 샘플 관리 도구에서 프로젝트와 인터페이스를 엽니다.
새 샘플을 클릭하고 샘플 창에서 요청된 정보를 입력하고 저장을 클릭하고 요청을 합니다. 요청 패널에서, 결정화 프로토콜, 인큐베이션 온도, 사용할 결정화 스크린 및 시료 선적에 필요한 시간과 호환되어야 하는 실험에 대해 원하는 날짜를 선택한다. 주석 필드를 사용하여 HDX 랩 운영자가 알아야 할 중요한 샘플에 대한 표시를 제공합니다.
제출 후 결정화 요청은 고처리량 결정화 랩 팀에 의해 검증됩니다. 실험 일정에 대한 확인은 이메일을 통해 전송됩니다. 샘플이 도착하면 시설에 도착합니다.
실험실 직원은 실험을 설정하고, 이메일을 통해 설치 확인을 보내고, 결정화 트레이를 자동화된 이미저로 전송합니다. CRIMS는 모든 실험 매개 변수에 대한 액세스를 제공하고 실시간으로 새로운 이미징 세션을 추적할 것입니다. 새 이미지를 사용할 수 있는 경우 이메일 알림이 자동으로 전송됩니다.
결정화 플레이트의 이미지를 보려면 플레이트 메뉴를 열고 샘플로 이동합니다. 보기를 클릭하여 마지막 이미징 세션을 보거나 확장 기호를 클릭하여 다른 이미징 세션을 선택하고 드롭 기록을 확인합니다. 선택한 프로젝트에 대한 샘플을 필터링합니다.
특정 프로젝트 상자를 클릭합니다. 검색 함수는 대부분의 테이블 열에서도 사용할 수 있습니다. 결정화 실험의 결과를 평가하고 점수를 얻으려면 플레이트 뷰 인터페이스를 선택하고 결정화 플레이트의 다른 벽을 탐색합니다.
이미지 유형을 선택하고 이미지 품질을 선택하거나 점수를 기록합니다. 뷰 인터페이스는 또한 결정화 용액의 조성을 포함하여 결정화 실험에 사용되는 모든 실험 파라미터를 제공한다. 초기 스크리닝을 통해 식별된 기본 적중 조건에 따라 크리스탈 최적화 화면을 설계하려면 개선 메뉴를 열고 화면 하위 메뉴를 선택합니다.
실험 설계에 가장 적합한 플레이트 유형, 스톡 솔루션 또는 그라데이션 구성을 선택합니다. CRIMS에게 공식화 로봇 공식과 직접 호환되는 파일을 출력하여 화면을 플레이트에 자동으로 피펫하거나 인쇄 가능한 문서를 출력하도록 요청하거나 수동 작동을 위한 볼륨을 출력할 수 있습니다. 일단 결정이 X선 회절 실험이 확인되면 플레이트 뷰 인터페이스로 이동하여 미리 저장된 점수를 사용하여 올바른 결정화 낙하에 해당하는 이미지를 선택합니다.
크리스탈 수확을 클릭하여 크리스탈 직접 수확기 로봇의 자동 크리스탈 수확 계획을 기록합니다. CRIMS는 수확된 결정의 위치를 자동으로 기록하고 척추 또는 단위 퍽에 보관합니다. 다음으로, 우리 시설이 이미저에서 수확 계획으로 플레이트를 제거하고 CrystalDirect 로봇으로 전송할 운영자.
크리스탈 수확이 완료되면 샘플을 포함하는 퍽을 CX 100 Dewar에 배치하거나 선택한 싱크로트론으로 옮겨갑니다. 냉동 냉각 샘플을 검사하려면 크리스탈 매니저 메뉴를 열고 수확된 크리스탈을 선택합니다. 수확된 결정핀의 이미지를 포함한 수확 과정의 이미지를 사용할 수 있습니다.
X선 회절 분석을 위한 샘플 발송물을 만들려면 발송 메뉴를 열고 발송물 생성을 클릭하여 관심 있는 싱크로트론과 가방 번호를 선택합니다. 완전히 자동화된 빔라인에서 데이터 수집을 위한 미리 정의된 매개 변수뿐만 아니라 데이터 수집을 지원하는 주석도 입력할 수 있습니다. HDX 랩은 또한 완전히 자동화된 대규모 조각 스크리닝에 대한 액세스를 제공합니다.
글로벌 데이터 처리 및 적중 식별을 위한 CRIMS 리소스는 단일 프로젝트에서 수백~수천 개의 데이터 집합을 통해 결과를 신속하게 평가하고 우선 순위를 정할 수 있도록 합니다. CRIMS는 Synchrotron 정보 관리 시스템과 통신하고 실제 회절 실험에 대한 정보를 검색합니다. 크리스탈 관리자 메뉴를 열고 결정 회절 데이터를 선택하여 요약 정보와 Synchrotron에서 초기 데이터 처리 결과를 볼 수 있습니다.
이 대표적인 분석에서, 자동화된 결정학 파이프라인은 다른 단백질의 구조적 식별을 위해 입증된 바와 같이 사용되었다. 관찰된 바와 같이, 병원성 박테리아로부터 프로테아제의 세 가지 다른 확인 상태는 결정 선별 최적화 및 회절 측정의 급속한 연속 덕분에 매우 짧은 시간에 확인되었다. 이 파이프라인은 또한 최근에 트리파노소마 브루시의 여러 분단 부위에서 활성에 모두 바인딩, 조각의 식별에 적용되었다.
파네실 파이로포스페이트는 인간 아프리카 의 트라이파노소미증을 유발하는 기생충의 주요 효소이다. 이 공정은 결정 성장과 측정 사이의 지연을 최소화하여 진행을 가속화합니다. 또한 과학자들이 크리스탈 처리 및 빔 라인 작동 렌더링 결정예 촬영과 같은 복잡한 작업에서 과학자를 해방하여 비 전문가가 더 쉽게 접근할 수 있습니다.
이 접근은 번역 연구를 육성하고 약 발견의 과정을 가속화하는 데 기여할 수 있습니다. 더 많은 수의 표적에 대해 더 좋고 안전한 약물의 개발에 기여합니다.
