유산균의 배양, 성장 및 생존력: 품질 관리 관점

우리의 프로토콜은 품질 관리 검사로서 순도를 보장하기 때문에 중요합니다. 또한 유산균 발효에서 심각한 발효 성능과 수율의 일관성을 촉진합니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 세포 순도, 생존력 및 기능성을 통해 유산균의 발효 성능을 향상시킬 수 있다는 것입니다.

이 기술은 사용자 친화적이며 많은 기술적 요구 사항없이 기본 장비 만 사용하기 때문에 누구나 쉽게 수행 할 수 있습니다. Philip Yeboah는 우리의 대학원 연구 조교이며 절차를 시연 할 것입니다. 시작하려면 영하 80도의 초저온 냉동고에서 2밀리리터 원심분리기 튜브에 준비된 유산균 또는 LAB 균주의 글리세롤 재고를 가져갑니다.

사용하기 전에 해동하지 마십시오. 사용하기 전에 원심 분리기 튜브의 입구를 70 % 알코올로 청소하고 소독하고 부드럽게 와동하십시오. 원심분리 튜브로부터 약 250 마이크로리터의 스톡 LAB 배양물을 신선한 2 밀리리터 MRS 시험관으로 피펫팅한다.

시험관을 부드럽게 소용돌이 치고 파라 필름을 만들고 섭씨 42도에서 12-16 시간 동안 밤새 혐기성 배양합니다. 다음으로, 2 밀리리터 MRS 시험관에서 밤새 성장한 배양 물에서 약 500 마이크로 리터를 신선한 7 밀리리터 MRS 시험관으로 가져 와서 와류시키고 섭씨 42도에서 12-16 시간 동안 밤새 혐기성 배양합니다. UV 가시광선 분광광도계로 610나노미터에서 배양물의 광학 밀도 또는 성장을 측정하여 미생물 성장을 평가하고 0.7에서 0.9 사이의 허용 가능한 결과를 기록합니다.

7 밀리리터 MRS 튜브에서 밤새 배양 물을 MRS 및 MRCMPYR 한천 플레이트에 넣고 섭씨 42도에서 72 시간 동안 혐기성 배양합니다. 한천 플레이트에서 분리 된 콜로니를 골라 신선한 7 밀리리터 MRS 시험관으로 옮기고 부드럽게 와류를 일으키고 섭씨 42도에서 12-16 시간 동안 밤새 혐기성 배양합니다. 분리 된 균주가 들어있는 한천 플레이트를 섭씨 4도에서 냉장고에 일주일 동안 보관하십시오.

다음으로, 610나노미터에서 줄무늬 플레이트에서 분리된 LAB 배양물의 7밀리리터 MRS 시험관에서 광학 밀도를 측정 및 확인하고 이를 모든 관련 실험을 위한 작업 배양으로 사용합니다. 9 밀리리터의 펩톤 물을 사용하여 최종 7 밀리리터 MRS 시험관에서 성장한 LAB 배양 물의 10 배 오염을 수행하여 1 대 10 비율을 얻습니다. 모든 발효 실험에 적합한 연속 망상에서 약 250 마이크로 리터를 취하고 신선한 7 밀리리터 MRS 국물에 옮기고 섭씨 42도에서 16 시간 동안 혐기성으로 배양하여 균주가 포함 된 국물을 활성화시킵니다.

LAB 배양에서 생존 가능하고 우수한 세포 성장을 보장하기 위해 단계를 반복하십시오. 품질관리 프로토콜로 배양한 S9 및 LB6 락토바실러스 불가리쿠스 균주와 품질관리 프로토콜 없이 배양한 S9 락토바실러스 불가리쿠스 균주의 세포 형태 성장이 여기에 표시됩니다. 균주는 삼중으로 줄무늬가 있었고 섭씨 42도에서 72시간 동안 혐기성 배양되었습니다.

이 절차를 시도할 때 교차 오염을 방지하기 위해 냉동실의 스톡 배양 튜브를 70% 알코올로 소독해야 합니다. 성장 배양의 광학 밀도 측정은 항상 0.7과 0.9 사이여야 합니다. 이 프로토콜에 따라 우수한 배양 사용으로 효율적인 LAB 발효 또는 바이오 프로세싱 작업을 달성 할 수 있습니다.