후두 이식 모델은 마우스와 래트에서 설명되었습니다. Senior alter의 이전 연구는 문합을 위해 기증자 경동맥을 사용하여보다 효율적인 방법을 고안하여 상 갑상선 동맥을 해부 할 필요가 없도록하는 데 중점을 두었습니다. 이 비디오에서는 마우스에서이 절차를 설명했습니다.
이 마우스 후두 이식 모델을 사용하면 면역학 연구를 쉽고 저렴한 비용으로 수행 할 수 있습니다. 쥐 모델에 비해 혈관의 크기가 작기 때문에 기술적으로 더 어렵지만, 수술 단계에 익숙해지면 이 절차를 약 3시간 안에 수행할 수 있습니다. 동물이 완전히 마취 된 후, 마우스를 면도 부위로 옮겨 분당 1 리터의 산소 흐름으로 1.5 % 이소 플루 란이 마취 유지를 위해 안면 마스크를 통해 전달됩니다.
발가락 꼬집음으로 마취 깊이를 확인하십시오. 마우스의 가슴과 목을 턱선까지 면도하고 제모 크림을 바릅니다. 그리고 30 초 후에 크림을 닦아내고 마우스를 수술 부위로 옮깁니다.
마우스를 고정시키고 포비돈 요오드와 알코올로 수술 부위를 세 번 준비한 다음 마우스를 드레이프하십시오. 흉골 상부 노치보다 우수한 작은 수평 절개를 만드십시오. 가는 가위를 사용하여 해당 절개를 통해 피부를 하악까지 양측으로 들어 올리고 사다리꼴 모양의 피부 부분을 절제합니다.
샘을 통해 이동하는 작은 정맥이 시각화되는 상부 부분에서 소작을 사용하여 양측 타액선을 절제하십시오. 주변 조직에서 양측 흉쇄 유돌근을 해부하고 옆으로 수축시킵니다. 스트랩 근육에 정중선 절개를하고 기저 갑상선을 손상시키지 않도록주의하여 양측으로 절제하고 후두 식도 또는 LTE 복합체에 남겨 둡니다.
이 단계가 끝나면 양측 경동맥이 보입니다. 총 경동맥을 쇄골 수준까지 열등하게 그리고 경동맥 분기 수준까지 우월하게 해부합니다. 미주 신경과 내부 경정맥은 경동맥에서 자유롭게 해부되며 조달 된 이식편에 포함되지 않습니다.
내부 및 외부 경동맥을 결찰하고 분열 할 수있을만큼 충분히 멀리 해부하십시오. 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 경동맥 분기보다 2-3mm 우수한 내부 경동맥을 결찰합니다. 상부 갑상선 동맥의 분기점보다 최소 3mm 높은 외경동맥을 결찰하고 흉골 수준에서 총 경동맥을 결찰합니다.
모든 결선 용기를 양측으로 절단하십시오. 추가 해부 중에 우발적 인 손상을 방지하기 위해 LTE 복합체 위에 혈관 척추를 유지하십시오. 가스 누출이나 부주의한 마취 상실을 방지하려면 기도 절단을 하기 전에 동물이 만료되었는지 확인하십시오.
다섯 번째 기관 링 아래의 기관을 횡단하고 절개를 식도를 통해 추척 전 근막으로 운반하여 LTE 복합체를 열등하게 제거합니다. 밑에있는 척추 전 근막에서 기관과 식도를 열등한 것에서 상급으로 자유롭게하십시오. 설골보다 열등한 전두 인두 절제술을 만듭니다.
절개 부위를 추척전 근막까지 옮겨 LTE 복합체를 우수하게 자유롭게합니다. 나머지 림프 또는 결합 조직 부착물을 LTE 복합체와 주변 조직 사이에 나눕니다. 마지막으로 이식편을 제거하십시오.
조달 된 이식편을 멸균 된 페트리 접시에 넣고 일반 식염수로 씻어 혈전을 제거하십시오. 1 밀리미터 마이크로 확장기를 사용하여 양측 경동맥을 확장하십시오. 30 게이지의 무딘 바늘을 사용하여 각 경동맥에 약 2 밀리리터의 헤파린 화 된 식염수를 주사하여 이식편을 플러시합니다.
혈액과 식염수가 반대쪽 경동맥과 작은 자유 혈관 끝에서 흘러 나오는 것을 볼 수 있으며 이는 손상되지 않은 상부 갑상선 동맥을 확인합니다. 이식편은 헤파린 화 된 식염수에 남겨 둘 수 있으며 수혜자에게 이식하기 전에 최대 3 시간 동안 짧은 휴식을 취할 수 있습니다. 마취 유도, 면도 및 수술 준비 단계 후에 공여자에 대해 기재된 것과 정확히 동일한 방식으로 수용자 마우스를 준비한다.
수술 시작 30분 전에 연장 방출 진통제를 수용자 마우스에게 피하 주사합니다. 메스를 사용하여 턱선에서 흉골까지 아래쪽으로 연장되는 정중선 목 절개를하십시오. 왼쪽의 피부를 들어 올리고 옆으로 집어 넣습니다.
앞서 설명한 대로 상부 혈관을 소작하는 왼쪽 타액선을 절제하십시오. 눈에 보이는 혈관을 저온 소작기로 나누어 지방과 림프 조직을 절제하십시오. 밑에있는 외부 경정맥을 손상시키지 않도록주의하십시오.
외부 경정맥을 원주 방향으로 해부하십시오. 문합을 위해 혈관의 명확한 길이를 최소 5 밀리미터 이상 사용하십시오. 흉골 유돌근을 해부하고 옆으로 수축시킵니다.
쇄골에서 경동맥 분기점까지 총 경동맥을 원주 방향으로 우월하게 해부합니다. 외부 경정맥 아래에 배경 재료를 통과시키고 이중 근사 B-3 용기 클램프를 적용하십시오. 원하는 단절제술 위치에 외부 경정맥의 전벽을 통해 10-0 나일론 봉합사를 놓고 봉합사를 사용하여 혈관을 앞쪽으로 당깁니다.
마이크로 가위로 봉합사 깊숙이 절단하여 적절한 크기의 단일 슬릿 정맥 절개술을 쉽게 만들고 절단이 정맥벽을 완전히 통과하도록 합니다. 30 게이지 무딘 바늘을 사용하여 헤파린 화 된 식염수로 정맥 내부를 씻어냅니다. 공여 LTE 복합체를 수용자 좌경동맥과 좌측 외부 경정맥 사이에 위치시킨다.
기증자 왼쪽 경동맥의 자유 끝을 수혜자 왼쪽 외부 경정맥쪽으로 맞추고 날카로운 가위를 사용하여 끝을 경사지게합니다. 4 개의 10-0 나일론 중단 봉합사를 사용하여 기증자 왼쪽 경동맥과 수혜자 왼쪽 외부 경정맥을 종단 간 방식으로 문합합니다. 수령인 총 경동맥 아래로 배경 재료를 밀고 이중 근사 A-3 혈관 클램프를 적용합니다.
정맥 절개술과 같은 방식으로 동맥 절개술을 만듭니다. 기증자 오른쪽 경동맥을 수혜자 왼쪽 경동맥에 종단 간 방식으로 문합합니다. 10-0 나일론으로 6 개의 중단 된 봉합사를 사용하는 것이 동맥 문합에 이상적입니다.
정맥 쪽의 클램프를 제거하십시오. 출혈이 발생하면 면봉으로 부드러운 압력을 가하십시오. 동맥의 클램프를 제거하고 즉시면 팁으로 부드러운 압력을가하십시오.
보통 부드러운 압력으로 1 분 후에 멈추는 단계에서 약간의 출혈이 예상됩니다. 정맥의 동맥에서 혈류의 완전성을 확인하십시오. 온전한 동맥 흐름으로 기증자 경동맥의 맥동이 일반적으로 나타나고 기증자 갑상선은 플러시 된 투명한 색에서 원래의 붉은 색으로 다시 바뀝니다.
LTE 단지에있는 작은 혈관의 붉은 색도 관찰 할 수 있습니다. 달리기 방식으로 5-0 모노 필라멘트 봉합사로 피부 절개를 닫습니다. 절개 부위에 피부 접착제를 바르십시오.
수술 중 체액 손실을 설명하기 위해 따뜻한 식염수 1 밀리리터를 피하에 주사하십시오. 마취를 멈추고 마우스를 회복 케이지로 옮깁니다. 저체온증을 피하기 위해 완전히 깨어날 때까지 가열 패드에서 마우스를 관찰하십시오.
수술 성공은 혈관 클램프를 제거한 직후에 평가할 수 있습니다. 그림 A는 기증자 후두의 경동맥에서 혈류를 시각화 할 수 있고 갑상선이 빨갛게 변하기 때문에 성공적인 수술을 나타냅니다. 그림 B는 기증자 후두의 경동맥에서 혈류를 시각화 할 수없고 갑상선이 창백하게 남아 있기 때문에 실패한 수술을 나타냅니다.
면역 억제가없는 상태에서 15 일 후에는 대부분의 수혜자가 이식으로 혈류가 없습니다. 동맥의 개통성은 주변 수용자 조직에서 후두 복합체를 해부하고 종단 간 문합을 시각화하여 거시적으로 평가할 수 있습니다. 감사. 이 비디오를 본 후에는 약 3 시간 내에 한 마우스에서 다른 마우스로 후두 기관 식도 복합체를 이종 학적으로 이식하는 방법을 이해해야합니다.
이 실현 가능하고 상대적으로 저렴한 모델은 후두 복합체의 거부에서 면역 체계의 역할을 연구하는 데 상당한 잠재력을 제공하여 장기 이식에서 새로운 치료법의 잠재력을 제공합니다.
