저자 스포트라이트: 중간엽 줄기 세포의 정제된 집단을 분리하는 데 있어 단일 세포 분류의 중요성

이 프로토콜은 단일 플랫폼에서 인간 중간엽 줄기 세포를 정확하게 특성화하고 정제하여 줄기 세포 이식과 같은 효율적인 다운스트림 애플리케이션을 가능하게 하는 중요한 방법을 자세히 설명합니다. 이는 조작된 줄기 세포 또는 자연 줄기 세포의 정밀한 단일 세포 분류를 통해 분자 및 세포유전학 분석을 강화하는 임상 실험실에 특히 중요합니다. 정제된 줄기 세포 집단의 분리에 일반적으로 사용되는 방법은 면역자기 분리, 밀도 구배 또는 미세유체 세포 분류와 같은 기술을 말합니다.

인덱스 정렬과 같은 기술을 사용하면 정렬된 각 세포의 전사체 정보를 추출할 수 있는 단일 세포 RNA 프로파일링에 연결할 수 있습니다. 주요 과제는 시료 품질 유지, 세포 밀도 및 분류 중 및 분류 후의 생존력을 포함한 세포 배양 조건의 최적화입니다. 또한 기기에 적합한 노즐 크기를 선택하고 선별기에 적시에 접근할 수 있도록 하는 것도 고려해야 합니다.

이 프로토콜은 면역표현형 분석 및 원하는 세포 집단 분류를 위한 정밀한 염색 패널을 보여줍니다. 표준화된 시료 품질, 최적의 세포 생존율, 세포 집단 분류를 위한 밀도를 보장하고 FACSDiva 소프트웨어에서 분류 실험 매개변수를 정의합니다. 이 방법을 사용하면 특정 바이오마커를 발현하는 줄기세포 집단을 간단하게 선택하고 면역표현형을 분석할 수 있습니다.

이 간단한 플랫폼을 사용하면 대상 모집단을 기반으로 효율적으로 분류할 수 있으며, 후속 다운스트림 응용 분야를 위해 정제된 샘플을 얻고 얻을 수 있습니다.