Isolation, Culture, and Characterization of Dental Pulp Stem Cells from Human Deciduous and Permanent Teeth(인간 낙엽 및 영구치에서 치과용 치수 줄기 세포의 분리, 배양 및 특성화)

발치한 사람의 치아를 치과 겸자로 제자리에 고정하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 치과 핸드피스에 연결된 다이아몬드 디스크와 물 냉각수를 사용하여 치아를 자릅니다. 치과용 굴삭기를 사용하여 치아에서 치수를 제거합니다.

다음으로, 멸균 수술용 칼날을 사용하여 치수 조직을 작은 조각으로 조심스럽게 다집니다. 그런 다음 이 조각을 PBS가 있는 미니 조직 분쇄기에 넣어 균질한 혼합물을 형성합니다. 다진 조직 조각을 15 밀리리터 튜브에 옮기고 콜라겐 분해 효소 유형 1과 dispase의 혼합물을 사용하여 소화시킵니다.

효소 혼합물에 조직을 섭씨 37도에서 2시간 동안 배양합니다. 배양 후 효소를 중화시킵니다. 다음으로 소화된 조직을 15밀리리터 튜브에 옮기고 300G에서 실온에서 5분간 탈수합니다.

그런 다음 상층액을 조심스럽게 버리고 펠릿을 10-20% FBS가 보충된 신선한 DMEM에 다시 현탁시킵니다. 세포 배양의 경우 세포 현탁액을 25제곱센티미터 배양 플라스크에 조심스럽게 옮깁니다. 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소로 세포를 배양합니다.

2-3일 후, 멸균 혈청학적 피펫을 사용하여 배지를 조심스럽게 흡입하고 새로운 배지로 교체합니다. 다음으로, DPSC의 특성 분석을 위해 유세포 분석기를 켜고 분리된 세포의 중간엽 줄기 세포 특성을 확인합니다. DPSC를 조골세포, 지방세포 및 연골세포로 성공적으로 분화한 것은 DPSC의 다능성 특성을 입증합니다.

DPSC의 배증 시간은 중간엽 줄기 세포에 대해 보고된 것과 일치했으며, 이는 건강하고 증식성 있는 세포 집단을 시사합니다. 유세포 분석 결과 대다수의 DPSC가 CD-90, CD-73 및 CD-105에 양성인 것으로 나타났으며, 이는 중간엽 줄기세포로서의 정체성을 확인시켜 주었습니다. 또한, 세포의 2% 미만이 CD-34, CD-45 및 HLADR에 대해 양성이었으며, 이는 유의미한 조혈 또는 내피 세포 오염이 없음을 확인했습니다.