저자는 Dagmar Dirvonskis의 탁월한 기술 지원에 감사드립니다.

이 프로토콜의 실험은 국가 및 기관 동물 보호 위원회(Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz, Koblenz, Germany, TVA G21-1-080)의 승인을 받았습니다. 실험은 ARRIVE 지침에 따라 수행되었습니다. 이 연구에는 생후 2-3개월, 체중 30-35kg의 건강한 독일 재래종 수컷 돼지 6마리가 사용되었습니다. 실험 일정은 그림 1에 요약되어 있습니다. 이 프로토콜에 사용되는 모든 재료 및 도구와 관련된 세부 정보는 재료 표에 나열되어 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66039/66039fig01.jpg"> 그림 1: 실험 타임라인. 기준 건강 측정은 동물의 준비 및 30분의 안정화 기간 후에 수행되었습니다. 내독소혈증은 30분 이상 LPS 주사에 의해 유도되었고, 0시간 측정은 또 다른 30분 후에 수행되었다; 그 후, 4시간 동안 시간별 측정을 계속했습니다. 약어: BLH = baseline healthy; LPS = 지질다당류. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66039/66039fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
1. 동물 준비
<ol><li>스트레스를 최소화하기 위해 동물을 가능한 한 오랫동안 평소 환경에 두십시오. 마취제를 투여하기 전에 6시간 동안 음식을 먹지 않고 물을 자유롭게 이용할 수 있도록 합니다.</li>
	<li>정상 환경에서 아자페론(3mg∙kg-1)과 미다졸람(0.5mg kg-1)을 근육 주사하여 동물을 진정시킵니다.</li>
	<li>일반적으로 투여 후 약 15-20분 이내에 진정 효과가 나타나면 돼지를 실험실로 이송합니다. 알림: 이송 내내 지속적인 진정제가 유지되도록 하는 것이 중요합니다. 지역 입법부에 따라 수의사의 영구적인 감독이 필요할 수 있습니다.</li>
	<li>운송 중 돼지의 정상 체온(~38°C)을 유지하는 데 세심한 주의를 기울이십시오. 예를 들어, 저체온증을 예방하기 위해 동물을 담요로 덮는 것을 고려하십시오. 알림: 일반적으로 30분에서 60분 사이의 진정 시간을 초과하지 않도록 운송 시간을 제한하는 것이 중요합니다.</li>
	<li>소독 후 귓바퀴 정맥에 22G 카테터를 삽입하여 정맥 주사를 설정합니다. 돼지의 추가 움직임이나 마취 유도를 진행하기 전에 갑작스러운 움직임으로 인한 탈구를 방지하기 위해 카테터가 단단히 고정되어 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>꼬리나 귀에 고정된 센서를 사용하여 말초 산소 포화도를 지속적으로 모니터링합니다.</li>
</ol>2. 마취 및 기계적 환기
<ol><li>펜타닐(4μg kg-1)과 프로포폴(3mg kg-1)을 정맥 투여하여 마취를 유도합니다.</li>
	<li>돼지를 누운 자세로 놓습니다.</li>
	<li>근육 이완제로 atracurium(0.5mg kg-1)을 투여하고 즉시 개 환기 마스크를 사용하여 비침습적 환기를 시작합니다. 마스크를 주둥이에 대고 엄지손가락으로 세게 누르면서 중지/약지를 사용하여 아래턱을 앞으로 당깁니다. 인공호흡기를 흡기 산소 분율(FiO2 ) = 100%, 일회 호흡량 = 6-8mL kg-1, 호기말 양압(PEEP) = 5mbar, 최대 흡기압 ≤ 20mbar, 호흡수 = 18-20min-1.</li>
	<li>균형 잡힌 전해질 용액(5mL kg-1 h-1), 펜타닐(10μg kg-1 h-1) 및 프로포폴(6mg kg-1 h-1)을 지속적으로 주입하여 마취를 유지합니다.</li>
	<li>표준 기관내관(내경 6-7mm), 가이드와이어 및 Macintosh Blade(크기 4)가 장착된 후두경을 사용하여 기관내 삽관을 수행합니다.<ol><li>보조자에게 입을 벌리고 혀를 왼쪽으로 잡습니다.</li>
		<li>후두개가 보일 때까지 Macintosh Blade를 삽입합니다. 그런 다음 후두경을 위로 들어 올려 후두개를 복부로 이동시키고 성대를 시각화합니다. 때때로, 후두개는 연구개에 달라붙을 수 있습니다. 이 경우 튜브나 부기로 옆으로 부드럽게 문질러 동원하십시오.</li>
		<li>성대를 통해 기관내관을 조심스럽게 삽입하고 인덕터를 제거합니다. 어려움이 있는 경우 과도한 힘을 가하지 않고 튜브를 회전시켜 보십시오. 필요한 경우 더 작은 튜브를 사용하십시오. 튜브가 제자리에 있으면 커프를 10mL의 공기로 팽창시킵니다.</li>
	</ol></li>
	<li>기관내 튜브를 인공호흡기에 연결하고 인공호흡을 시작합니다. 호기말CO2를 검출하고 양측 청진을 수행하여 적절한 튜브 위치를 확인합니다. 다음 환기 설정을 사용하십시오: FiO2 = 40%, 일회 호흡량 = 6-8mL kg-1, PEEP = 5mbar, 흡기-호기 비율 = 1:2, 호흡수 = 호기말 CO2 수준 <45mmHg, 일반적으로 30-40min-1을 달성하도록 조정됩니다. 알림: 튜브를 식도에 잘못 삽입하면 공기가 위를 팽창시켜 눈에 띄게 부풀어 오릅니다. 이러한 경우 즉시 튜브를 제거하고 1-2분 동안 비침습적 환기를 시행한 다음 튜브의 위치를 올바르게 조정하십시오.</li>
	<li>역류나 구토를 방지하기 위해 위관을 삽입하십시오. 삽입이 어려운 경우 후두경을 사용하여 식도 입구를 더 잘 볼 수 있습니다.</li>
</ol>3. 계측
<ol><li>대퇴 동맥과 정맥에 동맥과 중심 정맥 라인을 각각 배치하여 혈류역학적 모니터링 및 정맥 용적 요법을 수행합니다.</li>
	<li>붕대를 사용하여 뒷다리를 집어넣고 고정하여 대퇴골 혈관에 더 잘 접근할 수 있도록 합니다.</li>
	<li>계측 전에 필요한 모든 재료를 준비하십시오. 모든 카테터를 식염수로 채우고 와이어와 카테터에 쉽게 접근할 수 있도록 하여 여러 번의 카테터 삽입 시도와 불필요한 출혈을 최소화합니다.</li>
	<li>사타구니 부위에 알코올 소독제를 바르고 멸균 면봉으로 닦습니다. 이 과정을 두 번 반복합니다. 소독제를 닦지 않고 다시 바르고 3분 동안 기다립니다. 사타구니 부위에 멸균 창호 드레이프를 놓습니다.</li>
	<li>초음파를 사용하여 대퇴골 혈관을 확인합니다. 조직 손상과 출혈을 최소화하기 위해 카테터 삽입을 위해 면내 초음파 유도 Seldinger의 기술을 사용합니다.</li>
	<li>대퇴 동맥을 세로로 시각화합니다. 지속적인 흡인을 위해 바늘에 부착된 주사기로 동맥을 뚫습니다. 선홍색의 맥동하는 혈액은 동맥 천자를 확인합니다. 주사기를 제거하고 준비된 와이어를 삽입합니다. 와이어를 제자리에 둔 상태에서 바늘을 제거합니다.</li>
	<li>대퇴 정맥에 대해 동일한 절차를 반복합니다. 정맥 천자는 천천히 흐르는 검붉은 피에 의해 확인됩니다.</li>
	<li>초음파를 사용하여 양쪽 대퇴부 혈관을 시각화하여 두 와이어의 올바른 위치를 확인합니다.</li>
	<li>Seldinger의 기술을 사용하여 동맥 도입기를 먼저 삽입한 다음 정맥 도입기를 삽입합니다. 두 라인에서 채취한 혈액 샘플의 혈액 가스 분석을 통해 적절한 위치를 확인합니다.</li>
	<li>모든 라인에서 혈액을 흡인할 수 있는지 확인하십시오. 혈전 형성을 방지하기 위해 식염수로 모든 라인을 씻어냅니다.</li>
	<li>탈구를 방지하기 위해 수술용 봉합사를 사용하여 피부에 라인을 단단히 고정합니다.</li>
	<li>혈류역학적 매개변수를 측정하기 위해 동맥 및 중심 정맥선을 변환기에 연결합니다.</li>
	<li>펄스 윤곽 심박출량(PiCCO) 카테터를 동맥 도입기 덮개에 삽입하고 PiCCO 모니터의 동맥압 변환기 및 온도 인터페이스 케이블에 연결합니다.</li>
	<li>Swan-Ganz 카테터를 변환기에 연결합니다.<ol><li>압력을 지속적으로 측정하면서 카테터를 중심 정맥 도입기 덮개에 삽입합니다. 중심 정맥압 곡선이 보이면 약 30cm 후에 풍선을 부풀립니다.</li>
		<li>압력 곡선을 모니터링하면서 카테터를 천천히 전진시킵니다. 카테터가 우심실에 들어갈 때 수축기 수치가 높고 이완기 수치가 낮은 맥박 곡선을 찾습니다. 카테터를 더 발전시키면 수축기 수치가 일정하고 이완기 수치가 증가하여 폐동맥에 배치됩니다.</li>
		<li>카테터를 이 위치(보통 50cm에서 70cm 사이)에 고정합니다. PiCCO 시스템의 주입 온도 센서를 Swan-Ganz 카테터의 근위 내강에 연결합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>돼지의 이마를 면도하고 접착 센서 전극을 적용하여 대뇌 지역 산소 포화도를 측정합니다.</li>
	<li>마취 유도 및 기구 사용 후 30분 동안 또는 혈류역학적 매개변수가 안정화될 때까지 동물을 안정시킨 후 기준선 측정을 수행하고 내독소 쇼크를 유발합니다.</li>
</ol>4. 충격 유도
알림: LPS로 작업할 때는 항상 장갑, 보호 고글, 마스크 및 실험실 가운을 착용하십시오. LPS와의 직접적인 접촉을 피하십시오.
<ol><li>0.9% NaCl 50mL에 LPS 5mg을 용해시켜 100μg mL-1 농도의 LPS 용액을 준비합니다.</li>
	<li>LPS 주입을 시작하기 직전에 기준선 혈류역학적 측정을 얻습니다.</li>
	<li>150μg kg-1 용량의 LPS를 30분 동안 투여합니다(30분 동안 300μg kg-1∙h-1 의 연속 주입 속도에 해당).</li>
	<li>30분 후 실험의 나머지 기간 동안 주입 속도를 15μg∙kg-1∙h-1 로 줄입니다.</li>
	<li>동맥 및 폐동맥 혈압, 심박수 및 환기 매개변수를 포함한 혈류역학적 매개변수를 지속적으로 모니터링합니다. 정상 체온을 유지하기 위해 지속적으로 체온을 모니터링하십시오.</li>
</ol>5. 혈역학적 불안정성의 치료
<ol><li>평균 동맥 혈압이 60mmHg 미만으로 떨어지면 PiCCO를 사용하여 심장 지수(CI), 전체 이완기 용적 지수(GEDI) 및 혈관 외 폐수 지수(ELWI)를 측정합니다. 그림 2의 순서도에 있는 권장 사항에 따라 저혈압을 치료하십시오.<ol><li>PiCCO 모니터에서 열희석 버튼 (TD)을 누릅니다.</li>
		<li>중심 정맥압(CVP) 입력 버튼을 누르고 현재 CVP 값을 입력합니다.</li>
		<li>시작 버튼을 누릅니다.</li>
		<li>지시가 있으면 Swan-Ganz 카테터에 연결된 주사 온도 센서에 10mL 의 냉식염수를 주입합니다. 알림: 측정이 손상될 수 있으므로 PiCCO 측정 직전이나 측정 중에 다른 것을 주입하지 마십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>CI, GEDI 및 ELWI에 대한 측정값을 얻은 후 그림 2의 순서도에 따라 혈역학적 불안정성을 치료합니다. 부피 로딩이 권장되는 경우 200mL 의 균형 전해질 용액을 빠르게 주입합니다. 카테콜아민 요법이 권장되는 경우 노르에피네프린 주입 속도를 1μg kg-1 h-1 증가시킵니다.</li>
	<li>평균 동맥 혈압이 60mmHg 이하로 떨어질 때마다 이 과정을 반복합니다. 심각한 혈역학적 불안정의 경우, 치료의 신속한 확대를 선택하십시오.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66039/66039fig02.jpg"> 그림 2: 혈역학적 불안정성에 대한 PiCCO 유도 요법. CI, GEDI 및 ELWI에 대한 측정값을 얻은 후 차트에 따라 치료를 적용합니다. 이 그림은 PiCCO 사용자 가이드북12에서 발췌한 것입니다. 약어: PiCCO = 펄스 윤곽 심박출량; V+ = 볼륨 로딩; 고양이 = 카테콜아민 요법; V- = 부피 감소; CI = 심장 지수; GEDI = 글로벌 이완기 말단 부피 지수; ELWI = 혈관외 폐수 지수. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66039/66039fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
6. 실험 종료 및 안락사
<ol><li>펜타닐 0.5mg을 정맥 주사합니다. 5분 동안 기다립니다. 프로포폴 200mg을 주사합니다.</li>
	<li>중심 정맥 라인을 통해 40mL의 1M 염화칼륨을 빠르게 주입하여 돼지를 안락사시킵니다.</li>
</ol>

LPS 주입을 통한 돼지의 내독소혈증의 용량 의존적 유도

<ol>
	<li>Vincent, J. -. L., Jones, G., David, S., Olariu, E., Cadwell, K. 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Getinge Deutschland GmbH PiCCO Technologie Erweitertes h&#228;modynamisches Monitoring auf h&#246;chstem Niveau Available from: <a target="_blank" href="https://www.getinge.com/dam/hospital/documents/german/picco_haemodynamisches_monitoring_broschuere-de-non_us.pdf">https://www.getinge.com/dam/hospital/documents/german/picco_haemodynamisches_monitoring_broschuere-de-non_us.pdf</a> (2023)</li><li>Breslow, M. J., Miller, C. F., Parker, S. D., Walman, A. T., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+vasopressors+on+organ+blood+flow+during+endotoxin+shock+in+pigs.">Effect of vasopressors on organ blood flow during endotoxin shock in pigs.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 252 (2), H291-H300 (1987).</li><li>Fink, M. 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NIRS 장치는 실험 연구 목적으로 미국 Medtronic PLC에서 무조건 제공했습니다. Alexander Ziebart는 Medtronic PLC로부터 강의비를 받았습니다. 저자 중 누구도 재정적 또는 기타 이해 상충을 보고하지 않습니다. 원고는 ChatGPT®(Python Software, 버전: 2023년 5월 24일)가 교정 및 편집했습니다.

패혈증 및 패혈성 쇼크에서 일반적으로 관찰되는 변화를 안정적으로 유도하는 것을 목표로 LPS 주입을 통해 돼지의 실험적 내독소혈증을 유도하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜에서는 몇 가지 중요한 단계를 고려해야 합니다. 운송 전에 돼지를 적절하게 진정시키는 것은 스트레스로 인한 카테콜아민 수치 상승을 방지하는 데 매우 중요하며, 이는 잠재적으로 결과를 손상시킬 수 있습...

패혈증과 패혈성 쇼크는 집중 치료를 받는 환자의 주요 사망 원인중 하나입니다 1,2,3. 패혈증은 감염이 면역 반응 조절 장애를 일으켜 다장기 부전을 일으킬 때 발생합니다. 혈역학적 불안정, 호흡 곤란, 간 및 신부전, 인지 장애 등 생명을 위협하는 증상이 특징이다 4,5. 패혈성 쇼크는 사망률을 크게 증가시키는 특히 심각한 증상을 가진 패혈증의 하위 집합입니다. 이러한 증상에는 승압제 요법이 필요한 지속적인 저혈압과 2mmol∙L-1 4,5를 초과하는 혈청 젖산염 수치가 포함됩니다. 패혈성 쇼크 환자의 사망률은 병원 치료에도 불구하고 40%까지 높은 것으로 추정된다 1,3,5. 
슈도모나스(Pseudomonas)나 대장균(Escherichia coli)과 같은 그람 음성 박테리아는 종종 면역 반응 조절 장애를 유발하는 감염을 일으킨다4. 근본적인 병태생리학적 메커니즘은 복잡하고 아직 완전히 이해되지 않았습니다. 잘 설명된 한 가지 측면은 병원체 관련 분자 패턴(PAMP)에 의해 면역 세포에서 톨 유사 수용체가 활성화되어 종양 괴사 인자 알파(TNFα) 또는 인터루킨 1(IL 1)4과 같은 사이토카인의 방출을 유도하는 것입니다. 이러한 PAMP 중 하나는 그람 음성 박테리아6에서 세포막의 구성 요소를 구성하는 지질 다당류(LPS)입니다. LPS는 내독소혈증 및 내독소혈증 쇼크를 유도하기 위해 동물 모델에 사용되었다 7,8.
동물 모델은 새로운 치료 전략을 개발하고 조사할 수 있는 통제되고 표준화된 환경을 제공합니다. 유사한 해부학적 구조, 면역학적 생리학 및 유사한 혈류역학적 매개변수로 인해 돼지 모델은 내독소 쇼크의 영향을 연구하는 데 특히 적합합니다 9,10. 또한, 인간 환자에게 일반적으로 사용되는 표준 의료 장비는 기도와 혈관의 크기가 비슷하기 때문에 돼지에 쉽게 적용할 수 있어 기기 및 혈류역학적 모니터링이 용이합니다.
이 프로토콜을 통해 우리는 대장균에서 추출한 LPS를 정맥 주사하여 돼지의 내독소혈증 쇼크에 대한 실험 모델을 제공합니다. 효과를 모니터링하기 위해 동맥 혈압, 심박수, 말초 산소 포화도, 폐동맥압 및 기도 압력을 포함한 혈역학적 및 폐 매개변수를 측정했습니다. 내독소혈증이 대뇌 산소 공급에 미치는 영향을 평가하기 위해 근적외선 분광법(NIRS)을 사용했습니다. 이 방법에 의해, 이마(11)에 도포된 접착 전극을 통해 뇌 산소 포화도를 평가할 수 있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Atracurium Hikma 50 mg/5mL</td>
			<td>Hikma Pharma GmbH, Martinsried</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azaperone (Stresnil) 40 mg/mL</td>
			<td>Lilly Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Discardit II Spritze 2, 5, 10, 20 mL</td>
			<td>Becton Dickinson S.A. Carretera, Mequinenza Fraga, Spain</td>
			<td>syringe</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer Connecta&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson Infusion Therapy, AB Helsingborg, Schweden</td>
			<td>3-way-stopcock</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curafix i.v. classics</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher International GmbH &#38; Co. KG, Rengsdorf, Germany</td>
			<td>Cannula retention dressing</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Datex Ohmeda S5</td>
			<td>GE Healthcare Finland Oy, Helsinki, Finland</td>
			<td>hemodynamic monitor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Engstr&#246;m Carestation</td>
			<td>GE Heathcare, Madison USA</td>
			<td>ventilator</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl-Janssen 0.05 mg/mL</td>
			<td>Janssen-Cilag GmbH, Neuss</td>
			<td>fentanyl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F&#252;hrungsstab, Durchmesser 4.3</td>
			<td>R&#252;sch</td>
			<td>endotracheal tube introducer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incetomat-line 150 cm</td>
			<td>Fresenius, Kabi Deutschland, GmbH</td>
			<td>perfusor line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intrafix Primeline</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>Infusion line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introducer sheath 5 Fr.</td>
			<td>Terumo Healthcare</td>
			<td>arterial introducer&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INVOS</td>
			<td>Medtronic, Dublin, Ireland</td>
			<td>near infrared spectrometry</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JOZA Einmal Nitril Untersuchungshandschuhe&#160;</td>
			<td>JOZA, M&#252;nchen, Germany</td>
			<td>disposable gloves</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laryngoscope, 45.48.50, KL 2000</td>
			<td>Medicon</td>
			<td>Laryngoscope handle</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Littmann Classic III Stethoscope</td>
			<td>3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany</td>
			<td>stethoscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS (E. coli; Serotype O111:B4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAC Two-Lumen Central venous access set</td>
			<td>Arrow international inc. Reading, PA, USA</td>
			<td>venous introducer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maimed Vlieskompresse</td>
			<td>Maimed GmbH, Neuenkirchen, Germany</td>
			<td>Fleece compress to fix the tongue</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masimo LNCS Adtx SpO2 sensor</td>
			<td>Masimo Corporation Irvine, Ca 92618 USA</td>
			<td>saturation clip for the tail</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masimo LNCS TC-I SpO2 ear clip sensor</td>
			<td>Masimo Corporation Irvine, Ca 92618 USA</td>
			<td>Saturation clip for the ear</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masimo Radical 7</td>
			<td>Masimo Corporation Irvine, Ca 92618 USA</td>
			<td>periphereal oxygen saturation&#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam 15 mg/3 mL</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midmark Canine Mask Small Plastic with Diaphragm FRSCM-0005</td>
			<td>Midmark Corp., Dayton, Ohio, USA</td>
			<td>dog ventilation mask</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl surgical suture</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson, Belgium</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td>saline solution</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9 %</td>
			<td>Sanofi- Aventis, Seutschland GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octeniderm farblos</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH, Nordenstedt, Germany</td>
			<td>Alcoholic disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Original Perfusor syringe 50 mL</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td>perfusor syringe</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA-Katheter Swan Ganz 7.5 Fr 110 cm</td>
			<td>Edwards Lifesciences LLC, Irvine CA, USA</td>
			<td>Swan-Ganz catheter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusor FM Braun</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td>syringe pump</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PiCCO catheter</td>
			<td>PULSION Medical Systems SE, Feldkirchen, DE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride 1 M</td>
			<td>Fresenius, Kabi Germany GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol 2% 20 mg/mL (50 mL flasks)</td>
			<td>Fresenius, Kabi Deutschland, GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pulse-contour continous cardiac output System PiCCO2</td>
			<td>PULSION Medical Systems SE, Feldkirchen, DE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R&#252;schelit Super Safety Clear &#62;ID 6/6.5 /7.0 mm</td>
			<td>Teleflex Medical Sdn. Bhd, Malaysia</td>
			<td>endotracheal tube</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonosite Micromaxx Ultrasoundsystem</td>
			<td>Sonosite Bothell, WA, USA&#160;</td>
			<td>ultrasound&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Macintosh Gr&#246;&#223;e 4</td>
			<td>Welch Allyn69604</td>
			<td>blade for laryngoscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterofundin</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>Balanced electrolyte solution</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vasco OP sensitive&#160;</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td>sterile gloves</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vasofix Safety 22 G-16 G</td>
			<td>B.Braun Melsungen AG, Germany</td>
			<td>venous catheter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VBM Cuff Manometer</td>
			<td>VBM Medizintechnik GmbH, Sulz a.N., Germany&#160;</td>
			<td>cuff pressure gauge</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipopolysaccharide infusion as a porcine endotoxemic shock model

패혈증과 패혈성 쇼크는 중환자실(ICU)에서 치료받는 환자에서 자주 발생하며 이러한 환자의 주요 사망 원인 중 하나입니다. 감염에 대한 면역 반응 조절 장애로 인해 발생합니다. 최적화된 치료에도 불구하고 사망률은 여전히 높기 때문에 병태생리학에 대한 더 많은 통찰력과 새로운 치료 옵션이 필요합니다. 지질다당류(LPS)는 그람 음성 박테리아의 세포막 구성 요소로, 종종 패혈증과 패혈성 쇼크를 유발하는 감염의 원인이 됩니다. 
패혈증과 패혈성 쇼크의 중증도와 높은 사망률은 인간을 대상으로 한 표준화된 실험 연구를 불가능하게 만듭니다. 따라서 추가 연구를 위해 동물 모델이 필요합니다. 돼지는 해부학, 생리학 및 크기가 인간과 매우 유사하기 때문에 이러한 목적에 특히 적합합니다. 
이 프로토콜은 LPS 주입에 의한 돼지의 내독소 쇼크에 대한 실험 모델을 제공합니다. 패혈성 쇼크 환자에서 자주 관찰되는 혈역학적 불안정성, 호흡 부전, 산증 등의 변화를 안정적으로 유도할 수 있었습니다. 이를 통해 연구자들은 이 관련성이 높은 질환에 대한 귀중한 통찰력을 얻고 실험 환경에서 새로운 치료 접근법을 평가할 수 있습니다.

이 연구를 위해 생후 2-3개월, 체중 30-35kg의 건강한 수컷 돼지 6마리를 마취하고 내독소혈증을 유발하기 위해 지질다당류(LPS)를 주입했습니다. 쇼크 증상을 지속적으로 유발하는 데 필요한 LPS의 적절한 용량을 결정하기 위해, 돼지는 30분 동안 100μg kg-1에서 200μg kg-1에 이르는 다양한 LPS 유도 용량을 투여한 후 실험의 나머지 기간 동안 시간당 초기 용량의 1/10을 유지했습니다. 모든 ?...

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저자 스포트라이트: 혈류역학 및 호흡 부전을 연구하기 위한 돼지의 실험적 내독소혈성 쇼크 유도

우리는 지질다당류를 주입하여 돼지에서 실험적인 내독소 충격 모델을 위한 프로토콜을 제공합니다.

돼지 내독소혈증 쇼크 모델로서의 지질다당류 주입

Sepsis and septic shock are frequently encountered in patients treated in intensive care units (ICUs) and are among the leading causes of death in these ...

이 프로토콜을 사용하여 돼지에게 실험적인 내독소 쇼크를 유도합니다. 혈역학적 불안정 및 호흡 부전과 같은 내독소혈증 증상을 확실하게 유발할 수 있었습니다. 지질다당류는 독성 물질입니다.지질 다당류로 작업할 때는 항상 장갑, 보호 고글, 마스크 및 실험실 가운을 착용하는 것이 필수적입니다. 이 프로토콜은 내독소혈증을 유도하는 쉽고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. 돼지는 해부학적 구조와 생리학이 유사하기 때문에 표준 의료 장비를 사용할 수 있으므로 이러한 종류의 연구에 특히 적합합니다.이 프로토콜을 사용하여 내독소 쇼크 중 호흡 부전 및 폐 손상에 대한 다양한 환기 전략의 효과를 연구할 수 있습니다.

lipopolysaccharide-infusion-as-a-porcine-endotoxemic-shock-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Lipopolysaccharide Infusion as a Porcine Endotoxemic Shock Model

814 조회수.  University Medical Center of the Johannes Gutenberg-University. 이 프로토콜을 사용하여 돼지에게 실험적인 내독소 쇼크를 유도합니다. 혈역학적 불안정 및 호흡 부전과 같은 내독소혈증 증상을 확실하게 유발할 수 있었습니다. 지질다당류는 독성 물질입니다.지질 다당류로 작업할 때는 항상 장갑, 보호 고글, 마스크 및 실험실 가운을 착용하는 것이 필수적입니다. 이 프로토콜은 내독소혈증을 유도하는 쉽고 신뢰할 수 있는 방법을 ...

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Fixed Volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhagic Shock

It is common knowledge that severe blood loss and traumatic injury can lead to a cascade of detrimental signaling events often resulting in mortality. 1, 2, 3, 4, 5 These signaling events can also lead to sepsis and/or multiple organ dysfunction (MOD). 6, 7, 8, 9 It is critical then to investigate the causes of suppressed immune function and detrimental signaling cascades in order to develop more effective ways to help patients who suffer from traumatic injuries. 10 This fixed pressure Hemorrhagic Shock (HS) procedure, although technically challenging, is an excellent resource for investigation of these pathophysiologic conditions. 11, 12, 13 Advances in the assessment of biological systems, i.e. Systems Biology have enabled the scientific community to further understand complex physiologic networks and cellular communication patterns. 14 Hemorrhagic Shock has proven to be a vital tool for unveiling these cellular communication patterns as they relate to immune function. 15, 16, 17, 18 This procedure can be mastered! This procedure can also be used as either a fixed volume or fixed pressure approach. We adapted this technique in the murine model to enhance research in innate and adaptive immune function. 19, 20, 21 Due to their small size HS in mice presents unique challenges. However due to the many available mouse strains, this species represents an unparalleled resource for the study of the biologic responses. The HS model is an important model for studying cellular communication patterns and the responses of systems such as hormonal and inflammatory mediator systems, and danger signals, i.e. DAMP and PAMP upregulation as it elicits distinct responses that differ from other forms of shock. 22, 23, 24, 25 The development of transgenic murine strains and the induction of biologic agents to inhibit specific signaling have presented valuable opportunities to further elucidate our understanding of the up and down regulation of signal transduction after severe blood loss, i.e. HS and trauma 26, 27, 28, 29, 30. 
There are numerous resuscitation methods (R) in association with HS and trauma. 31, 32, 33, 34 A fixed volume resuscitation method of solely lactated ringer solution (LR), equal to three times the shed blood volume, is used in this model to study endogenous mechanisms such as remote organ injury and systemic inflammation. 35, 36, 38 This method of resuscitation is proven to be effective in evaluating the effects of HS and trauma 38, 39.

The Hemorrhagic Shock model has been a reliable and reproducible resource facilitating the identification and understanding of signaling cascades associated with inflammation and end-organ damage after trauma. This article provides a step-by-step description of surgical and mechanical aspects associated with the Hemorrhagic Shock experimental procedure in mice.

고정 볼륨 또는 고정 압력 : 출혈성 쇼크의 Murine 모델

It is common knowledge that severe blood loss and traumatic injury can lead to a cascade of detrimental signaling events often resulting in mortality. 1, ...

연구

의학

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

쥐의 만성 영양 주입의 모델

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.
Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

돼지 모델에서 이소성 신장자가 이식 : 단계별 프로토콜

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Porcine As a Training Module for Head and Neck Microvascular Reconstruction

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes have been available for years in many surgical fields. We used the female (because they are easy to handle for the procedure) Yorkshire pigs for the head and neck reconstruction by harvesting the deep inferior epigastric artery perforator or the superior epigastric artery perforator flap. The anastomosis site (neck skin defect or tracheal wall defect) was prepared via the dissection of the common carotid artery and the internal jugular vein, in which 3.5&#215; loupe magnification was used for anastomosis as we use on human cases in real life. This procedure demonstrates a new training method using a reliable learning model and provides a detailed anatomy in a live scenario. We focused on the ischemia time, harvesting, vessel anastomosis, and designing the flap to fit the defect site. This model improves tissue handling and with the use of proper instruments can be repeated many times so that the surgeon is fully confident before starting the surgery on humans.

Here we present a protocol for the use of the pig superior epigastric artery perforator flap as a learning module for head and neck microvascular reconstruction.

돼지 머리와 목 Microvascular 재건을 위한 훈련 모듈

Live models that resemble surgical conditions of humans are needed for training free-flap harvesting and anastomosis. Animal models for training purposes ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

분할 각막 단추를 사용하여 돼지 각막 내피 내피 기관 문화 모형

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the investigation of disease mechanisms and the development of therapeutic strategies. 
To perform the surgery, we enter the cardiac chamber through the third intercostal space and carefully dissect the internal mammary vein and immerse it in normal saline. The right main coronary artery is then treated for ischemia. The target vessel is incised, a shunt plug is placed, and the distal end of the graft vein is anastomosed. The ascending aorta is partially blocked, and the proximal end of the graft vein is anastomosed after perforation. The graft vein is checked for patency, and the proximal right coronary artery is ligated. 
CABG surgery is performed in minipigs to harvest the left internal mammary vein for its use as a vascular graft. Serum biochemical tests are used to evaluate the physiological status of the animals after surgery. Ultrasound examination shows that the proximal, middle, and distal end of the graft vessel are unobstructed. In the surgical model, turbulent blood flow in the graft is observed upon histological examination after the CABG surgery, and venous graft stenosis associated with intimal hyperplasia is observed in the graft. The study here provides detailed surgical procedures for the establishment of a repeatable CABG-induced VGD model.

In this protocol, novel pig vein bypass grafting was performed through a small incision in the left chest wall without cardiopulmonary bypass. A postoperative pathology study was done, which showed intimal thickening.