이 프로토콜은 고지방 식단 급여와 스트렙토조토신 주사를 결합하여 당뇨병성 심근병증을 유발하는 방법을 설명합니다. 목표는 당뇨병성 심근병증에 대한 과학적 연구를 위한 신뢰할 수 있는 프레임워크를 제공하고 잠재적인 임상 치료 응용 프로그램을 탐색하는 것입니다. 우리는 비대하고 무질서한 심근세포, 심근 섬유 파열, 심근 기능 장애 및 심장 기능 저하가 있는 마우스에서 당뇨병성 심근병증을 유발하는 비용 효율적이고 편리한 방법을 개발했습니다.
다른 방법과 비교했을 때, 당사의 프로토콜은 비용 효율적이고 효율적이며 고지방 식단과 스트렙토조토신 주사를 결합하여 운영하기가 더 쉽습니다. 이 모델의 확립은 당뇨병성 심근병증의 발병과 진행의 기저에 있는 메커니즘을 이해하는 데 더 도움이 될 것입니다. 먼저 1밀리리터 주사기를 사용하여 고지방 식단 또는 HFD/STZ 그룹의 마우스에게 매일 7일 동안 1kg당 30mg의 스트렙토조토신(STZ)을 복강내 주사합니다.
혈당 수치를 측정하려면 최종 주사 후 일주일 후에 마우스를 구속 장치에 조심스럽게 놓고 꼬리가 바깥쪽으로 완전히 확장되었는지 확인합니다. 꼬리의 채혈 부위를 알코올 70% 면봉으로 철저히 소독합니다. 다음으로, 끝이 뾰족한 바늘을 꼬리 정맥에 삽입하여 끝에서 밑부분을 향해 3-4mm 깊이까지 전진합니다.
바늘이 위치에 놓이면 꼬리 윗부분을 부드럽게 짜서 혈류를 자극합니다. 혈액을 테스트 스트립에 조심스럽게 바르고 완전히 흡수되도록 합니다. 혈당 측정기에 혈당 판독값이 표시될 때까지 기다립니다.
구강 포도당 내성 검사(OGTT)의 경우 각 마우스가 14시간 동안 밤새 금식하면서 물에 제한 없이 접근할 수 있도록 합니다. 약 10밀리리터의 20% 포도당 용액을 준비합니다. OGTT 동안 각 마우스에 킬로그램당 1g의 용량을 경구 투여합니다.
포도당 투여 후 0분, 15분, 30분, 60분, 120분에서 혈당 수치를 모니터링합니다. HFD/STZ 그룹의 마우스는 12주에 체중이 최고조에 달했으며, 이는 ND 그룹보다 훨씬 높았습니다. STZ 투여 후 HFD/STZ 그룹의 체중은 감소한 반면, ND 그룹은 12주 동안 꾸준히 증가했다.
HFD/STZ 그룹은 섭식 기간 동안 ND 그룹보다 유의하게 더 높은 무작위 혈당 수치를 유지했습니다. OGTT 곡선은 HFD/STZ 그룹이 ND 그룹보다 유의하게 높았으며, 두 그룹 모두 감소하기 15분 전에 최고조에 달했습니다. ND 그룹의 혈청 인슐린 수치는 처음 12주 동안 HFD 그룹보다 처음에는 더 높았으나 STZ 투여 후 역전되었습니다.심장초음파검사를 수행하기 위해 STZ/HFD 또는 ND 그룹의 마취된 마우스를 가열 패드에 올려놓았습니다.
안정적인 앙와위 위치를 보장하기 위해 마우스의 발톱을 전극에 고정합니다. 제모 크림을 사용하여 가슴에서 마우스의 털을 제거한 다음 노출된 가슴 부위에 초음파 젤을 바릅니다. 최적의 좌심실 장축 보기를 얻으려면 50MHz 프로브를 마우스 가슴 왼쪽에 놓습니다.
프로브를 왼쪽 흉골 선을 기준으로 15도에서 45도 사이에서 시계 반대 방향으로 회전하여 노치를 오른쪽 어깨 쪽으로 정렬합니다. Z축과 Y축을 조정하여 선명한 B 모드 이미지를 확보합니다. 그런 다음 M-모드를 두 번 눌러 측정 라인을 표시합니다.
측정 라인을 유두 근육 수준에 배치한 다음 정확성을 위해 최소 3개의 연속 심장 박동을 측정하고 클립 저장을 눌러 시리즈의 cineloop를 저장합니다. ECGT 파동과 정렬된 위상에서 수축기 말기 차원을 식별하고 ECGR 파와 정렬된 위상에서 이완기 말 차원을 식별합니다. 그런 다음 작동 패드를 기울여 왼쪽 상단 모서리를 내리고 오른쪽 하단 모서리를 올립니다.
심장의 장축과 평행한 심장 정점 방향을 따라 프로브를 조정하여 경정점 4챔버 view. 부피를 조정한 후 샘플링 방향, 승모판 혈역학 정보를 기록하여 E 및 A 파 측정을 캡처합니다. 회수된 쥐를 0주 및 12주 시점에 12시간 명암 주기로 통제된 환경에 보관된 홈 케이지로 반환합니다.
HFD/STZ 그룹의 심장은 ND 그룹에 비해 수축기 및 이완기 기능 장애를 보였으며, 심실 중격의 진폭과 좌심실 후벽 맥동이 감소했습니다.
