Transformação da Raiz do Tomate Seguida de Inoculação com Ralstonia Solanacearum para Análise Genética Direta da Doença de Wilt Bacteriano

Rafael J. L. Morcillo; Achen Zhao; María I. Tamayo-Navarrete; José M. García-Garrido; Alberto P. Macho

doi:10.3791/60302

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Resumo
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Resumo

Aqui, apresentamos um método versátil para transformação da raiz do tomate seguido de inoculação com Ralstonia solanacearum para realizar análise genética simples para o estudo da doença de murcha bacteriana.

Resumo

Ralstonia solanacearum é um patógeno vascular devastador que pode infectar uma grande variedade de espécies vegetais, causando uma importante ameaça à agricultura. No entanto, o modelo de Ralstonia é consideravelmente pouco explorado em comparação com outros modelos envolvendo patógenos bacterianos vegetais, como pseudomonas singae em Arabidopsis. Pesquisas voltadas para a compreensão da interação entre ralstonia e plantas agrícolas são essenciais para desenvolver soluções sustentáveis para combater a doença bacteriana, mas atualmente é dificultada pela falta de ensaios experimentais simples para caracterizar os diferentes componentes da interação em plantas hospedeiras nativas. Nesse cenário, desenvolvemos um método para realizar a análise genética da infecção por Ralstonia do tomate, um hospedeiro natural da Ralstonia. Este método baseia-se na transformação mediada do Agrobacterium rhizogenesdas raízes do tomate, seguida pela inoculação de ralstonia encharcada de solo das plantas resultantes, contendo raízes transformadas expressando a construção de interesse. A versatilidade do ensaio de transformação raiz permite realizar a superexpressão genética ou o silenciamento genético mediado pela RNAi. Como prova de conceito, utilizou-se este método para mostrar que o silenciamento mediado pela RNAI de Sisa6 nas raízes do tomate conferiu resistência à Ralstonia. Aqui, descrevemos este método em detalhes, permitindo abordagens genéticas para entender a doença de murcha bacteriana em um tempo relativamente curto e com pequenas exigências de equipamentos e espaço de crescimento vegetal.

Introdução

Ralstonia solanacearum, o agente causal da doença da murcha bacteriana, é um patógeno vascular devastador do solo com uma distribuição mundial que pode infectar uma grande variedade de espécies vegetais, incluindo batata, tomate, tabaco, banana, pimenta e berinjela, entre outras¹^,². As perdas de rendimento causadas pela Ralstonia podem chegar a 80-90% da produção em tomate, batata ou banana, dependendo da cultivar, clima, solo e outros fatores³. No entanto, o modelo de Ralstonia é consideravelmente pouco explorado em comparação com outros modelos envolvendo pa....