Um modelo confiável de retalho fasciocutâneo suíno para estudos de bioengenharia de aloenxertos compostos vascularizados

Resumo

O presente protocolo descreve o modelo de retalho fascio-cutâneo suíno e seu potencial uso na pesquisa de tecidos compostos vascularizados.

Resumo

Os aloenxertos compostos vascularizados (VCA), como o transplante de mão, face ou pênis, representam o tratamento de ponta para defeitos devastadores da pele, falhados pelos primeiros passos da escada reconstrutiva. Apesar dos resultados estéticos e funcionais promissores, o principal fator limitante continua sendo a necessidade de uma imunossupressão ao longo da vida drasticamente aplicada e seus riscos médicos bem conhecidos, impedindo indicações mais amplas. Portanto, levantar a barreira imunológica na VCA é essencial para inclinar a escala ética e melhorar a qualidade de vida dos pacientes usando as técnicas cirúrgicas mais avançadas. A criação de novo de um enxerto específico do paciente é o próximo avanço no transplante reconstrutivo. Usando técnicas de engenharia de tecidos, os VCAs podem ser liberados de células doadoras e personalizados para o receptor através de perfusão-descelularização-recelularização. Para desenvolver essas novas tecnologias, é necessário um modelo de VCA animal em larga escala. Assim, os retalhos fasciocutâneos suínos, compostos por pele, gordura, fáscia e vasos, representam um modelo ideal para estudos preliminares em VCA. No entanto, a maioria dos modelos de VCA descritos na literatura inclui músculo e osso. Este trabalho relata uma técnica confiável e reprodutível para a colheita de retalho fasciocutâneo de safena em suínos, uma ferramenta prática para diversos campos de pesquisa, especialmente a engenharia de tecidos compostos vascularizados.

Introdução

Os aloenxertos compostos vascularizados (VCA) revolucionaram o tratamento de perdas de partes do corpo de difícil reparo, como mãos, face e pênis ^1,2,3. Infelizmente, os primeiros resultados a longo prazo⁴ mostraram que a administração ao longo da vida de agentes imunossupressores de altas doses pode levar a condições médicas colaterais graves, incluindo diabetes, infecções, neoplasias e disfunção reno-vascular⁵. Ultimamente, equipes especializadas de VCA têm tido que gerenciar o risco de rejeição crônica que leva à perda do enx....

Protocolo

Todos os animais receberam cuidados humanos seguindo o Guia do Instituto Nacional de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. O Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais aprovou o protocolo experimental (IACUC- protocolo #2020N000015). Sete fêmeas de porcos Yorkshire (20-25 kg) foram utilizadas para todos os experimentos.

1. Cuidados pré-operatórios

1. Jejue o animal para alimentos sólidos 12 h antes da cirurgia.
2. Sedadar o animal com 4,4 mg/kg de Telazol, 2,2 mg/kg de Xilazina e 0,04 mg/kg (IM) de sulfato de atropina (ver Tabela de Materiais).
3. Coloque um catete....

Resultados

Este trabalho em animais vivos foi precedido pela determinação do perforassomo safeno em três espécimes cadavéricos (Figura 2). Uma solução de enchimento colorida foi injetada na artéria safena para opacificar a rede vascular específica proveniente da artéria. A solução é composta por 10 ml de agente glicerina de cor azul misturado com 10 ml do agente diluente (ver Tabela de Materiais). Isso gerou um mapa colorido da pele vascularizada pela artéria safena e per.......

Discussão

Este artigo descreve um retalho fasciocutâneo confiável e reprodutível colhido em membros posteriores de suínos. Seguir este protocolo cirúrgico passo-a-passo permitirá a obtenção de dois retalhos em apenas um animal em menos de 2 h. A etapa mais crítica da cirurgia é a esqueletização do pedículo vascular dentro das fibras musculares do grácil, o que requer uma dissecção completa por um cirurgião qualificado. Fixar a pele à fáscia usando suturas cutâneas é uma dica crucial para evitar um efeito de ci.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
18 G angiocatheter	BD Insyte Autoguard	381409
20 G angiocatheter	BD Insyte Autoguard	381411
Adson Tissue Forceps, 11 cm, 1 x 2 Teeth with Tying Platform	ASSI	ASSI.ATK26426
Atropine Sulfate	AdvaCare	212-868
Bipolar cords	ASSI	228000C
Buprenorphine HCl	Pharmaceutical, Inc	42023-179-01
Dilating Forceps	Fine science tools (FST)	18131-12
Endotrachel tube	Jorgensen Labs	JO615X	size from 6 to 15mm depending on the pig weight
Ethilon 3-0 16 mm 3/8	Ethicon	MPVCP683H
Euthasol	Virbac AH	200-071
Heparin Lock Flush Solution, USP, 100 units/mL	BD PosiFlush	306424
Isoflurane	Patterson Veterinary	14043-704-06
Jewelers Bipolar Forceps Non Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter	ASSI	ASSI.BPNS11223
Metzenbaum scissors 180 mm	B Braun	BC606R
Microfil blue	Flow tech	LMV-120
Microfil dilution	Flow tech	LMV-112	colored filing solution
Monopolar knife	ASSI	221230C
N°15 scalpel blade	Swann Morton	NS11
Omnipaque	General Electric	4080358	contrast product
Perma-Hand Silk 3-0	Ethicon	A184H
Small Ligaclip	Ethicon	MCM20
Stevens scissors 115 mm	B Braun	BC008R
Telazol	Zoetis	106-111
Xylamed (xylazine)	Bimeda	200-529