Os autores agradecem os membros do grupo Sharon para a sua revisão crítica, e por suas contribuições ao manuscrito. Estamos gratos pelo apoio dos Programas Morasha e Bikura, a Israel Science Foundation (Grant n. º s 378/08 e 1823-1807), o Josef Cohn Minerva Center for Research biomembrana, a Família Chais Fellows Program para novos cientistas, o Abraham e Sonia Rochlin Foundation, o Family Trust Wolfson Charitable, a Helen e Milton A. Kimmelman Centro de Estrutura Biomolecular e Montagem; o espólio de Shlomo e Beirzwinsky Sabine; Meil ​​de Botton Aynsley, e Karen Siem, Reino Unido. Somos gratos a Dan Tawfik e Yadid Itamar por nos dar a amostra variante lectina.

Parte 1: Preparação de ouro revestidas de capilares para nanofluxo ionização electrospray Análise de não-covalente complexos é normalmente realizada por meio de ionização electrospray nanofluxo (Nesi) 6, usando capilares de vidro ou de quartzo, que foram puxados para uma ponta fina (~ 1 mícron de diâmetro interno) e revestida com material condutor (geralmente de ouro) . Capilares estejam disponíveis ready-to-use de fontes comerciais (Objetivo Novo ou Proxeon), no entanto, pode ser mais rentável para prepará-los em casa: <ol><li> Vara duas tiras de adesivo dupla face para a parte inferior de uma placa de Petri, 2 cm. Coloque uma vareta de vidro (8 cm x 5 mm) no centro de uma das almofadas. O adesivo vai realizar os capilares no local, e da vareta de vidro apoiará os capilares preparado, e manter as pontas de quebrar (Fig. 1). </li><li> Use vidro borossilicato capilares, 1,0 mm de diâmetro externo x 0,78 mm id (usamos embalagens de 500 unidades de parede fina borosilicato capilares da Warner Instruments, cat. Não. G100TF-4). Inserir um capilar para o puxador de agulha (usamos modelo P-97 do Instrumento Sutter Co.). Grampo do capilar suavemente no lugar, e ajustar a sua posição de modo que fica no centro do filamento da agulha extrator de aquecimento. Aperte os grampos com cuidado, até o capilar é mantido firme em ambas as extremidades. </li><li> Puxe o capilar, utilizando um programa pré-definido. Cada capilar puxado dará origem a duas finais, em forma de vasos capilares. O processo de programação do extrator é uma de tentativa e erro, até que uma forma aceitável dica é obtido. Usamos o seguinte programa: <table border="1"><tbody><tr><td> Passo </td><td> Calor </td><td> Puxe </td><td> Vell </td><td> Tempo </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 750 </td><td> - </td><td> 15 </td><td> 80 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 700 </td><td> - </td><td> 15 </td><td> 50 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 750 </td><td> 200 </td><td> 20 </td><td> 80 </td></tr></tbody></table></li><li> Remove os capilares retirado o instrumento e fiscalizar as dicas, descartando qualquer que são deformados ou quebrados. Use uma pinça blunt (usamos pinças de posicionamento de precisão CK), para colocar os vasos capilares na placa de Petri. A base do capilar deve ser anexado ao adesivo ea parte superior deve se inclinar sobre a haste de vidro, com a ponta apontando para cima. </li><li> Uma vez que a placa de Petri está cheia (cerca de 80 capilares se encaixam em um prato de 10 cm de diâmetro), insira a placa no ouro sputter coater (usamos modelo não. EMS550, de EMS). Certifique-se que o fornecimento de gás é escolhido de acordo com as instruções do fabricante, e ativar um ciclo de revestimento pré-definidos (usamos pressão Argon 4 psi, a uma pressão de vácuo de 5 x 10 -2 mbar, uma corrente de 45mA, e um tempo de revestimento de 1 min, por 3-6 ciclos, até os capilares são uniformemente dourada). </li></ol> Parte 2: Preparação da amostra <ol><li> Baixas concentrações micromolar de amostra são necessários (1-20 mM). Se necessário, concentrar a amostra usando dispositivos de ultrafiltração centrífuga (por exemplo, Vivaspin de Sartorius, ou NanoSep da Pall Corporation). É recomendável que você verificar a adsorção do complexo de proteínas para a membrana dispositivo, antes de usar. </li><li> Muitas vezes, os buffers de purificação ou soluções de armazenamento do complexo de proteínas não são compatíveis com Nesi, para o qual apenas soluções voláteis podem ser usadas. Portanto, buffer de troca é necessária. Este passo crucial, em que todos os vestígios de sais, as moléculas de buffer ou qualquer outro não-volátil adutos, como o glicerol, a TDT, ou EDTA são removidos, determina a qualidade dos espectros. Normalmente, a solução aquosa de acetato de amônio é usado, em uma concentração entre 5 mm e 1 M, e em 08/06 pH. Buffer de troca pode ser realizada utilizando uma coluna de filtração em gel de microcentrífuga (por exemplo, Micro Bio-Spin 6 colunas de cromatografia de Bio-Rad). Este passo pode ser repetido 1-3 vezes com uma diluição mínima (menos de um factor de 1,3 por dispositivo 5), até que a troca máxima é alcançada. Se ambos concentração e troca de buffer são necessárias, estas podem ser feitas em conjunto, utilizando ultrafiltração centrífuga (e, g., Vivaspin de Sartorius, ou NanoSep da Pall Corporation). </li></ol> Parte 3: Calibração de espectrômetro de massa para medições de massa de alta A maioria dos experimentos conduzidos na proteína multi-complexos são realizadas usando um electrospray nano quadrupolo-tempo-of-flight (Q-TOF) instrumento. É sugerido que você use um filtro de massa quadrupolar ajustado para baixas freqüências, para permitir a transmissão ea massa análise de íons com alta m / z valores 7,8. Étambém recomendou que entradas de gás 7,8 ou 9 mangas ser adicionado ao instrumento no guia de íons em primeiro lugar, para permitir o controle da pressão na fase de vácuo em primeiro lugar. Este último permite a otimização da transmissão, e dessolvatação de íons muito grande 7-9. Atualmente, comercial ESI-TOF e Q-TOF instrumentos estão disponíveis em diversos fabricantes (por exemplo, Waters, SCIEX, Bruker, ou Agilent), que podem ser modificados de forma relativamente fácil e econômica, para aplicações nativas MS 7,8. É possível, no entanto, para usar as configurações padrão ou ToF QToF em instrumentos como LCT ou QToF1 (Waters) para adquirir espectros de massa para complexos até 1 MDA, sem a necessidade de modificações de hardware 5. O protocolo descrito a seguir foi realizado em um instrumento Synapt (Waters). <ol><li> Prepare 100 mg / ml de CsI em água purificada. CsI ​​é usado para a calibração de massa de alta como os clusters de sal isoladamente cobrado (CSI) n Cs + se estendem por uma vasta massa de largura, a partir de 393 m / z para mais de 10.000 (Fig. 2). </li><li> Usando uma pinça sem corte, faça um capilar revestido da placa de Petri e 2μL carga da solução CsI no capilar, usando uma ponta de GeLoader Eppendorf. </li><li> Inserir o capilar no suporte capilar, e ajuste o capilar de tal forma que a ponta é de aproximadamente 10 mm de distância da borda do titular. </li><li> Deslize a solução para a ponta do capilar manualmente ou usando um adaptador de spin down. </li><li> Coloque o capilar sob um microscópio óptico e aparar a ponta, utilizando as afiadas AA-tipo pinça. </li><li> Conecte o suporte à interface capilar ES nanofluxo. Gire o estágio xyz para trás para evitar danos ao capilar, e empurre o palco para a sua posição ativada. O capilar deve ser colocado 1-10 mm do orifício de cone. </li><li> Aplique a tensão capilar (1050-1400 V) e pressão nanofluxo baixa (0,00-0,03 bar) até spray é iniciado, em seguida, tentar reduzir a pressão nanofluxo para um valor mínimo. </li><li> Otimizar a intensidade do sinal, ajustando a localização do palco xyz, a tensão capilar, a pressão nanofluxo, eo fluxo de gás dessolvatação. </li><li> Para detectar uma ampla gama de massa CsI pico da série, as tensões de aceleração deve ser otimizada (nós usamos os seguintes parâmetros: 1,3-1,7 kV capilar, cone amostra 80-150V, extração de cone 03/01 V). </li><li> Para otimizar a transmissão de íons de alta massa, que exigem condições dessolvatação suave, a pressão de apoio na fase inicial de vácuo, entre a fonte eo analisador, deve ser levantada. Isto pode ser conseguido com cuidado reduzindo a condutância da linha de vácuo de origem para a bomba de deslocamento, por parte de fechar a válvula de isolamento (SpeediValve). , A fim de definir o ponto ótimo, este último deve ser feito durante o monitoramento do efeito da intensidade do sinal (geralmente usamos mBar 3,0-6,5). </li><li> Coletar cerca de 30 scans em 1 scan / seg, em uma faixa de m / z entre 1.000 a 15.000 m / z. </li><li> Após a aquisição, calibrar o TOF usando a tabela de calibração adequadas. </li></ol> Parte 4: MS análise de complexos de proteínas intactas <ol><li> Carregar sua amostra, como descrito (Parte 3, secções 2-5), e iniciar spray. </li><li> Comece por otimização inicial do spray (Parte 3, secções 6-9), até que o sinal é detectado. A posição exata dos estados de carga é a proteína-dependente, no entanto, pode ser previsto, utilizando a relação entre a massa de íons e estado de carga média, assim: (Z médio) 10: Z = 0,0778 av √ (m), em que m é a massa do complexo em Daltons. Para evitar a dissociação complexo, não aquecem a fonte de íons: ou mudar o aquecedor desligado, ou manter a temperatura abaixo de 40 ° C. </li><li> Variar a posição capilar, cone de amostra e tensões extractor para maximizar a transmissão de íons, e verificar as mudanças resultantes nos espectros. Um possível ponto de partida poderia ser tensão cone 100 V; extractor cone: 1 V; tensão capilar 1,5 kV. Otimizar esses parâmetros, em combinação com a pressão nanofluxo. </li><li> Para melhorar dessolvatação e retirar a água residual e componentes buffer, aumentar a tensão de polarização ea pressão do gás na célula de colisão. Esta etapa deve ser realizada com cuidado, para evitar a dissociação do complexo. Tensões de polarização típica estão dentro da faixa de 10-100 V, com um fluxo de gás armadilha de 10-10 ml / min (Fig. 3). Ajuste manual da configuração RF e perfil quadrupolo pode melhorar a transmissão de íons de alta massa. </li><li> Ajuste Trap e energias de colisão de Transferência. Muitas vezes, altas tensões são necessárias para a transmissão de íons de massa elevada (geralmente dentro da faixa de 10-30 V). Neste ponto, é importante para evitar a colisão induzida dissociação do complexo. </li><li> Após um sinal estável é reached, recomenda-se que a pressão ea tensão capilar nanofluxo ser reduzida para valores mínimos, mantendo pulverização estável. </li></ol> Parte 5: espectrometria de massas Tandem: complexos de proteína dissociar <ol><li> Uma vez que um sinal ótima e estável foi obtida, selecione um íon precursor. Definir o centro de massa e largura de isolamento (geralmente usamos uma resolução LM, de 12, e uma resolução de HM entre 13 e 15). Use uma ampla variedade de massas para detectar a massa de alta / products carga baixa dissociação. É recomendável que você defina o intervalo de m / z para o nível máximo, e depois reduzi-lo para os valores desejados. Sugerimos ainda a superposição de MS e MS / MS espectros, para validar o isolamento do íon precursor escolhido. </li><li> Para executar MS / MS, dissociar o íon precursor, aumentando a energia de colisão (CE) ea pressão na célula de colisão. Aumentar ou Armadilha ou Transferência CE gradualmente, em passos de 10-20V, e elevar a pressão do gás de colisão para 0-5 ml / min (valores comuns). Monitorar as mudanças nos espectros até que as condições ótimas de ativação são alcançados. Energia de ativação elevada pode induzir a dissociação de uma ou mais subunidades do complexo intacta, e esclarecer as afinidades interação de diferentes subunidades. Normalmente usamos Argon como um gás de colisão nas células Armadilha / Transferência, embora os benefícios de usar um gás mais pesado (por exemplo, Xe ou SF 6) foram relatados, no entanto, esses gases são substancialmente mais caros 11 (Fig. 3). </li><li> Recomenda-se que mais de um estado de carga ser selecionado para MS / MS análise. No caso de componentes sobrepostos, a aquisição de um conjunto de espectros em tandem MS vai ajudar a resolver a série de carga das diferentes populações. Além disso, os estados superiores carga vai se dissociam mais facilmente, em comparação aos estados carga mais baixa 12. </li><li> Além da caracterização do complexo intacta, sugere-se que subcomplexes menores em solução será gerado, em condições moderadamente desnaturação. As análises de MS e MS / MS de subcomplexes formam a base para a definição da arquitetura subunidade do complexo 13. De ruptura parcial da subunidade subunidade interações, gradualmente adicionar solventes orgânicos (por exemplo, metanol, isopropanol ou acetonitrila) até uma concentração de 50%, ou alterar o pH da solução pela adição de amônia ou ácido fórmico (até uma concentração de 4 %). </li><li> Para determinar as massas das unidades individuais que compõem o complexo, é importante para adquirir um espectro em condições de desnaturação. Isto pode ser efectuado através de Zip Tip-C 4 (Millipore), com uma relação água / acetonitrila 25:75, com 1% de ácido fórmico como o solvente de eluição. </li></ol> Parte 6: Processamento de dados e análise <ol><li> Os dados são analisados ​​off-line, usando um programa de análise espectral para MS espectros. Normalmente usamos o programa MassLynx (Waters). </li><li> Para espectros que abrangem toda uma gama m / z de largura, recomendamos que diferentes regimes de alisamento e parâmetros centróide ser aplicado para a alta e baixa m / z regiões, de modo a reflectir a diferença na resolução de pico destas regiões. </li><li> Para identificar série de carga e calcular os estados de carga e massas, o &quot;manual encontrar&quot; função de MassLynx pode ser aplicada. Em casos de espectros de massa complexa com componentes que se sobrepõem, o cálculo manual de massas pode ser mais fácil. </li><li> Para facilitar estes processos de atribuição, software adicional pode ser usado, por exemplo: MaxEnt para espectros deconvolução 14, SOMMS para a montagem de pico e 15 de simulação, e SUMMIT para atribuir a composição e estequiometria da subcomplexes proteína e gerar redes de interação protéica 13,16,17 . </li></ol> Parte 7: Resultados Representante <img src="/files/ftp_upload/1954/1954fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Preparando-se revestidas de ouro nano-electrospray capilares. A. Coloque duas tiras dupla face adesiva a uma placa de Petri, 2 cm. Para apoiar os vasos capilares preparado, coloque uma vareta de vidro (8 cm x 5 mm) no centro de uma das almofadas. B. Cole a extremidade sem corte dos capilares preparado para o adesivo, e magra a ponta da vareta de vidro. C. Uma vez que a placa de Petri é preenchido com os capilares preparado, revesti-los com o ouro até que uma fina película de ouro é depositado uniformemente sobre a superfície externa dos capilares. <img src="/files/ftp_upload/1954/1954fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Calibração de massa de alta usando íons iodeto de césio. Os grandes aglomerados e monisotopic de CsI tornaram o composto de escolha para a calibração de espectrômetros de massa para análise de massa elevada. A série de picos igualmente espaçados se estendem por uma ampla gama, de m / z 393 para mais de 10.000. Eles são ASSIGned às isoladas cobrado aglomerados sal da composição geral (CSI) n + Cs. Sinais adicionais entre os picos principais são causadas por espécies de duplo e triplo-carregada da série; [(CSI) n CS2] 2 + e [(CSI) n Cs3] 3 +, respectivamente. Aumentando a pressão na fase inicial de vácuo é essencial para detectar os clusters de alta massa. O efeito da pressão sobre os picos de alta massa é demonstrado nos Painéis A. e B. readbacks com pressão de 1,2 e 5,3, respectivamente. C. Expansão do espectro de massa mostrado em B. <img src="/files/ftp_upload/1954/1954fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Nanofluxo espectros de massa por electrospray de uma lectina pentamérica. A. A espectrometria de massa de um complexo variante lectina (derivado de lib1 B7 por evolução dirigida 18) dá origem a uma distribuição de carga de estado entre 3.000 e 5.000 m / z, no entanto, devido à dessolvatação inadequada dos íons, os picos são largos. Comparação de painel de A. e B. mostram o efeito de aumentar a voltagem de 4V (A). A 15V (B). Sobre a largura do pico. Este aumento nas condições de aceleração faz com que o stripping de água residual e de componentes do tampão, produzindo um espectro altamente resolvido. A massa medida (60.240 ± 38 Da) corresponde a um complexo pentamérica. C. O estado de carregamento 15 foi, então, selecionados para análise em tandem MS (sombreados em cinza no painel B). D. O aumento da energia de colisão provoca a libertação de um monômero altamente carregada, centrado em 1.664 m / z, e um complexo despojado tetramérica, na faixa de 5.000 - 8.000 m / z. Todos os espectros foram obtidos a partir de uma amostra contendo 20 mM de solução em acetato de amónio 0,5 M.

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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+multiplexed+mass+spectrometric+analyses+of+endogenously+expressed+yeast+nuclear+and+cytoplasmic+exosomes.">Comparative multiplexed mass spectrometric analyses of endogenously expressed yeast nuclear and cytoplasmic exosomes.</a> J Mol Biol. 385 (4), 1300-1313 (2009).</li><li>Sharon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+organization+of+the+19S+proteasome+lid:+insights+from+MS+of+intact+complexes.">Structural organization of the 19S proteasome lid: insights from MS of intact complexes.</a> PLoS Biol. 4 (8), e267-e267 (2006).</li><li>Zhou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+reveals+modularity+and+a+complete+subunit+interaction+map+of+the+eukaryotic+translation+factor+eIF3.">Mass spectrometry reveals modularity and a complete subunit interaction map of the eukaryotic translation factor eIF3.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (47), 18139-18144 (2008).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Para adquirir a atenção espectros de alta qualidade deve ser dada às etapas de preparação de amostra, que incluem concentração da amostra e troca de buffer. Mais de amostras diluídas renderá um sinal de baixa, enquanto que amostras altamente concentrada pode ser bastante viscoso, e bloquear a agulha electrospray. Além disso, os aditivos solução, tais como sais, glicerol, detergentes, íons metálicos e agentes redutores (DTT ou β-mercaptoetanol), tendem a aderir na superfície externa das proteínas, e causar alargamento dos picos. Portanto, a fim de alcançar o bem-resolvida picos, esses componentes devem ser adicionados nas concentrações mais baixas possíveis. Outro parâmetro importante é a posição do nanofluxo capilar, em relação ao orifício espectrômetro de massa. Encontrar o &quot;sweet spot&quot; pode ser um desafio para usuários inexperientes, no entanto, que influencia significativamente a qualidade dos espectros. Também é importante analisar o nanofluxo capilar antes do início do spray. O tamanho da gota é uma função do diâmetro da ponta, que deve ser ~ 1 Hm. Pequenas gotículas levar a ionização mais eficiente, e, portanto, ser vantajoso. Também é importante para validar que não há bolhas de ar dentro do capilar que possam bloquear o fluxo, e que o revestimento de ouro não é despojado do capilar durante a aquisição, em caso afirmativo, mais aparar a ponta. Tenha em mente que uma quantidade excessiva de amostra aumentará a possibilidade de otimizar as condições MS, tais como a tensão capilar, voltagens de aceleração, pressão e energia de colisão. No geral, os procedimentos explicados no protocolo têm sido usados ​​para determinar a composição, estequiometria e arquitetura de complexos de proteínas numerosos (ver comentários 2,3,4). Análise de grandes complexos MDa como o ribossomo e 19 capsídeos do vírus altamente ordenada 20-22, na definição de substrato de ligação para máquinas moleculares 23-25, ou a caracterização das redes de interação subunidade 26,17,16,17,27,28 servir como apenas alguns exemplos do valor desta abordagem.

Requisitos da amostra: <table border="1"><tr><td> Amostra </td><td> Exigência </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Volume </td><td> 1-2 mL </td><td> Por capilar </td></tr><tr><td> Concentração </td><td> 1-20Hm </td><td> Por complexos </td></tr><tr><td> Amortecedor </td><td> Aquanos tampão volátil como o acetato de amônio em pH = 6-8 </td><td> Tipicamente 5 mM-1M </td></tr><tr><td> Detergente </td><td> Mínimo </td><td> Aglomerados de moléculas de detergente produzir picos largos e sem solução </td></tr><tr><td> Glicerina </td><td> Mínima (até 5%) </td><td> Adere inespecificamente às proteínas e, conseqüentemente, ampla picos são observados </td></tr><tr><td> Solventes orgânicos </td><td> Até 50% </td><td> Pode desnaturar proteínas complexos </td></tr><tr><td> Ácidos </td><td> Até 4% </td><td> Desnaturar complexos de proteína </td></tr><tr><td> Sais </td><td> Mínimo </td><td> Adutos de sal levar a picos largos e sem solução </td></tr><tr><td> TDT </td><td> Mínimo </td><td> M 02/01 pode estar presente </td></tr><tr><td> Agentes quelantes </td><td> Mínimo </td><td> Acima de 250 mM levar à formação de aduto extensa </td></tr></table>

analyzing large protein complexes by structural mass spectrometry

Células vivas controlar e regular seus processos biológicos por meio da ação coordenada de um grande número de proteínas que se reúnem em uma matriz de dinâmica, proteína multi-complexos 1. Para obter uma compreensão mecanicista dos vários processos celulares, é crucial para determinar a estrutura de complexos de proteínas tais, e revelam como a sua organização estrutural determina sua função. Muitos aspectos da proteína multi-complexos são, no entanto, difícil de caracterizar, devido à sua natureza heterogênea, a estrutura assimétrica e dinâmica. Portanto, novas abordagens são necessárias para o estudo dos níveis de organização superior de proteína. Uma das ferramentas de biologia estrutural emergentes para a análise de complexos macromoleculares é a espectrometria de massa (MS) 2-5. Este método produz informações sobre a composição das proteínas complexas, estequiometria subunidade, e topologia estrutural. O poder do MS deriva de sua alta sensibilidade e, como conseqüência exigência de amostra, baixo, o que permite o exame de complexos de proteínas expressas em níveis endógenos. Outra vantagem é a rapidez da análise, que permite o monitoramento de reações em tempo real. Além disso, a técnica pode medir simultaneamente as características das populações separadas co-existentes em uma mistura. Aqui, nós descrevemos um protocolo detalhado para a aplicação de MS estruturais para a análise de conjuntos de proteínas de grande porte. O procedimento começa com a preparação de ouro revestidas de capilares para nanofluxo ionização electrospray (Nesi). Em seguida, continua com a preparação da amostra, enfatizando as condições de buffer que deve ser compatível com Nesi por um lado, e permitem manter intacta complexos, de outro. Em seguida, explicar, passo-a-passo, como otimizar as condições experimentais para medições de massa de alta e adquirir MS e tandem MS espectros. Finalmente, o gráfico de processamento de dados e análises que se seguem. Ao invés de tentar caracterizar cada aspecto dos conjuntos de proteínas, este protocolo apresenta procedimentos básicos MS, permitindo o desempenho de MS e MS / MS experimentos sobre a não-covalente complexos. No geral, nosso objetivo é fornecer aos pesquisadores não familiarizados com o campo da MS estrutural, com o conhecimento das principais ferramentas experimentais.

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Analyzing Large Protein Complexes by Structural Mass Spectrometry

Espectrometria de massa tem provado ser uma ferramenta valiosa para a análise de grandes complexos de proteínas. Este método permite insights sobre a arquitetura de estequiometria, composição e global da subunidade multi-montagens. Aqui, descrevemos, passo-a-passo, como realizar uma análise de espectrometria de massa estrutural, e caracterizar as estruturas macromoleculares.

Analisar grandes complexos de proteínas por espectrometria de massa estruturais

Living cells control and regulate their biological processes through the coordinated action of a large number of proteins that assemble themselves into an ...

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24.0K visualizações.  Weizmann Institute of Science. Espectrometria de massa tem provado ser uma ferramenta valiosa para a análise de grandes complexos de proteínas. Este método permite insights sobre a arquitetura de estequiometria, composição e global da subunidade multi-montagens. Aqui, descrevemos, passo-a-passo, como realizar uma análise de espectrometria de massa estrutural, e caracterizar as estruturas macromoleculares.