Para começar, liquefaça as amostras de sêmen humano coletadas e homogeneize-as completamente usando uma pipeta de pasteur. Em seguida, transfira 100 microlitros da amostra de sêmen para um tubo de centrífuga. A este tubo, adicione 900 microlitros da solução corante.
Misture repetidamente por pipetagem e homogeneize completamente o reagente. Coloque o tubo em um agitador bidimensional para agitação contínua a 200 RPM por 30 minutos à temperatura ambiente. Enquanto aguarda a reação de coloração, proceda à análise da concentração de espermatozoides utilizando o sistema CASA.
Depois de ligar o sistema, clique duas vezes no ícone SCAscope para abrir o software do aplicativo. Em seguida, misture bem a amostra de sêmen por pipetagem e transfira até 10 microlitros da amostra na câmara de contagem da SCA. Aguarde 60 segundos para que a amostra de sêmen pare de flutuar.
Em seguida, coloque a câmara de contagem SCA no porta-amostras do sistema CASA. No software aplicativo, insira as informações do paciente na caixa de diálogo. Clique no botão Iniciar para registrar a concentração de espermatozoides no sêmen.
Em seguida, pare o agitador quando a reação de coloração de 30 minutos estiver completa. Antes da análise, misturar o conteúdo do tubo da centrífuga por pipetagem. Transfira até 10 microlitros do reagente para a câmara de contagem de espermatozoides e cubra-a com uma tampa de vidro dedicada.
Coloque a câmara de contagem de espermatozoides no palco microscópico e ligue o microscópio óptico. Em seguida, aguarde 60 segundos para que a amostra do reagente pare de flutuar. Sob a lente objetiva de 10x, ajuste o curso e os botões de ajuste fino para selecionar um campo de visão.
Em seguida, mude para a lente objetiva 40x e observe os espermatozoides e leucócitos positivos para peroxidase. Use o sistema de contador eletrônico para contar pelo menos 200 espermatozoides e o número de leucócitos positivos para peroxidase em marrom. Usando esta técnica, leucócitos positivos para peroxidase foram corados na amostra de sêmen.
Os leucócitos peroxidase positivos apresentaram uma tonalidade marrom contrastando com as células arredondadas, comuns e não coradas.
