Para começar, baixe os programas de pulso de RMN para o diretório no computador que opera o espectrômetro de RMN e ajuste a versão do TopSpin. Baixe os pulsos em forma de NMR para o diretório e verifique se a versão do TopSpin está atualizada de acordo. Depois de determinar as larguras espectrais e os tempos de aquisição apropriados, digite edc no software TopSpin para um novo diretório para copiar o experimento HSQC.
Para abrir os parâmetros de sequência de pulso tipo ased, clique nos três pontos ao lado do parâmetro PULPROG para alterar o programa de pulso para o experimento nitrogênio-15 R1 rho. Clique duas vezes no programa de pulso, clique em Definir PULPROG para o conjunto de dados e confirme com OK. Digite ased para abrir os parâmetros da sequência de pulsos. Insira todas as intensidades e comprimentos de gradiente ausentes, conforme fornecido na sequência de pulsos.
Em seguida, insira para o contador de loop L3 metade da entrada de nitrogênio-15 TD na janela de parâmetros de aquisição. Insira para o contador de loops L6 o número de pontos de dados de relaxamento registrados para ajustar a curva de relaxamento. Defina o TanhTan_half adiabático.
nl como a forma do pulso de nitrogênio-15 SP8. Em seguida, defina o TanhTan_half2nd adiabático. pulso nl como a forma do pulso de nitrogênio-15 SP9.
Certifique-se de que os comprimentos de pulso sejam suficientemente longos para adiabaticidade com P8 definido para 3.000 microssegundos. Em seguida, defina o atraso de recuperação entre varreduras, D1, para pelo menos dois segundos ou mais. Defina as varreduras fictícias para pelo menos 64.
Como ponto de partida, defina o número de varreduras para quatro e use múltiplos de quatro se a relação sinal-ruído for muito baixa. Defina o O1 para a frequência portadora calibrada, O2P para 176 partes por milhão e copie o O3P do experimento HSQC de nitrogênio de prótons-15. Agora, defina o comprimento de pulso P7 para o comprimento de pulso de 90 graus calibrado anteriormente.
Em seguida, copie o nível de potência do pulso de 90 graus para PLW3 e PLW7. Em seguida, defina os comprimentos de pulso P1 e P19 para o comprimento de pulso de prótons de 90 graus. Defina o número de incrementos na dimensão indireta, TD é igual a L3 por dois por L6. Em seguida, defina o pulso moldado SP5 para uma forma I-BURP2 e o comprimento do pulso P15 para 2.000 microssegundos.
Em seguida, abra a tela da Ferramenta Forma clicando no E ao lado do pulso em forma de I-BURP2 na janela de parâmetros da sequência de pulsos TopSpin. Para simular o pulso moldado, clique no botão Iniciar simulação de RMN. Verifique o comprimento do pulso moldado e o ângulo de rotação na janela de simulação e clique em Iniciar NMR SIM para prosseguir.
Verifique a faixa de excitação na simulação e selecione o comprimento de pulso I-BURP2 apropriado para cobrir a dispersão espectral do próton, evitando a excitação da água. Defina P15 para o comprimento do pulso moldado da janela de simulação com o melhor pulso I-BURP2. Agora, defina SPOFFS5 para ajustar a frequência portadora do pulso I-BURP2, deslocando a faixa de excitação para a esquerda ou para a direita para evitar distúrbios na magnetização da água.
Em seguida, abra a ferramenta Bruker Shape e clique em Start NMR Simulation para determinar o nível de potência apropriado do pulso moldado. Defina o comprimento do pulso I-BURP2 para o comprimento do pulso moldado e observe o comprimento do pulso de prótons retangular suave de 90 graus mostrado na janela de simulação. Digite calcpowlev para calcular a diferença do nível de potência em decibéis entre o pulso de prótons rígido de 90 graus e o pulso de prótons retangular suave de 90 graus.
Copie o nível de potência do pulso de prótons de 90 graus para SPW5 e ajuste adicionando a diferença memorizada em decibéis. Para determinar o nível de potência do bloqueio de rotação, calcule o comprimento de pulso de nitrogênio-15 de 90 graus correspondente. Use calcpowlev para calcular a diferença de potência em decibéis entre a potência de bloqueio de rotação e o pulso de nitrogênio-15 de 90 graus.
Copie o nível de potência do pulso de nitrogênio-15 de 90 graus para PLW7 e ajuste o nível de potência de bloqueio de rotação PLW8 adicionando a diferença de potência calculada. Copie o nível de potência do bloqueio de rotação PLW8 para os níveis de potência SPW8 e SPW9. Para determinar o nível de potência do desacoplamento de nitrogênio-15, use calcpowlev para calcular a diferença de potência entre a potência do pulso de desacoplamento de nitrogênio-15 de 90 graus e o pulso forte de nitrogênio-15 de 90 graus.
Copie o nível de potência do pulso forte de nitrogênio-15 de 90 graus PLW7 para o nível de potência de desacoplamento PLW31 e ajuste adicionando a diferença de potência calculada em decibéis. Para compensação de temperatura, inclua a definição de linha TEMP_ no programa de pulso. Defina P18 para a duração máxima do bloqueio de rotação usado no experimento nitrogênio-15 R1 rho.
No caso do nitrogênio-15, as amostras marcadas com carbono-13 incluem a linha define LABEL_CN no programa de pulso. Defina P4 para o comprimento de pulso calculado. Use calcpowlev para calcular a diferença de potência em decibéis entre P4 e o pulso forte de carbono-13.
Copie o nível de potência do pulso forte de carbono-13 para PLW4 e adicione a diferença de potência calculada em decibéis. Copie PLW4 para PLW2. Para determinar os atrasos de relaxamento apropriados para a amostragem, execute os primeiros oito decaimentos de indução livre, ou FIDs, e processe-os.
Escolha entradas vplist em que a intensidade de pico do experimento de atraso mais longo diminui para pelo menos um sobre e, mas não inferior a 25% em comparação com o experimento de atraso mais curto. Digite rga na linha de comando para determinar o ganho do receptor. Inicie um teste do experimento nitrogênio-15 R1 rho digitando zg na linha de comando.
Verifique se o sinal de água está suprimido para todos os atrasos. Além disso, verifique o incremento nove, o segundo incremento do esquema de detecção de quadratura.
