Análise quantitativa de metabólitos dietéticos de vitamina A em tecidos oculares e não oculares murinos usando cromatografia líquida de alta eficiência

Nosso laboratório investiga dois transportadores críticos de vitamina A, STRA6 e Rbpr2. Essas proteínas de membrana facilitam a ingestão de vitamina A no sangue em tecidos como o olho e o fígado. Através da HPLC podemos investigar as funções fisiológicas desses transportadores fazendo um perfil sistêmico de vitamina A em camundongos transgênicos.

Outra técnica usada em nosso campo é a Ressonância Plasmônica de Superfície, SPR, que examina as afinidades e cinética de ligação de uma proteína ao seu gosto e aplicamos SPR para investigar a ligação entre STRA6 ou Rbpr2, o complexo de ligação ao retinol RBP4. Um desafio atual desse método é o rendimento da amostra. A etapa de evaporação do solvente é um grande gargalo dentro deste protocolo, e futuros investigadores devem experimentar métodos de secagem, como a evaporação por sopro de nitrogênio, que têm um rendimento muito maior quando comparados à evaporação a vácuo.

Determinamos o papel do Rbpr2 como um importante facilitador na manutenção da homeostase sistêmica da vitamina A por meio de sua função no fígado. E a interrupção da expressão de Rbpr2 em camundongos transgênicos levou à interrupção significativa dos níveis de vitamina A em todos os tecidos sistêmicos examinados, conforme quantificado por HPLC. A maioria dos outros protocolos de detecção de vitamina A baseada em HPLC utiliza métodos de face reversa e normalmente não permite que os isômeros retinóides se resolvam separadamente.

Nosso protocolo facial normal permite a resolução do retinaldeído e dos isômeros da retina, permitindo-nos criar um perfil detalhado de vitamina A, o que é crítico, dada a importância da fotoisomerização da vitamina A na cascata de fototransdução.