Os autores gostariam de agradecer a André Han e Yen Lawrence para assistência técnica, e os membros do laboratório Jenkins ajuda para o desenvolvimento deste protocolo.

1. Isolamento de células a partir de tecido linfóide <ol><li> Adicionar 1 ml de gelo frio cEHAA (EHAA + 10% FBS, pen / strep, gentamicina, 2 mM de L-glutamina, 55 mM 2-mercaptoetanol), ou outro meio equivalente de células T, para uma placa de cultura de 60 milímetros, contendo um pequeno quadrado de 100 malha de nylon fim e colocar no gelo. </li><li> Euthanize mouse. </li><li> Remover o baço e os linfonodos como muitos facilmente acessível quanto possível. Estes devem incluir pelo menos os inguinais, axilares, braquiais, linfonodos cervicais, e mesentérica. Colocá-las em cima da rede de nylon na placa de cultura. </li><li> Utilizando o plano superior de um sistema fechado de tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, suavemente esmagar o tecido linfóide sobre a malha de nylon para libertar os linfócitos. Adicionar 1 ml de uma outra cEHAA e pipeta cima e para baixo para o trabalho de células numa suspensão. Transferir as células através de um outro pedaço de malha de nylon colocada sobre a parte superior de um tubo de centrífuga de 15 ml de polipropileno. Lave o prato e malha com outro 1 ml de gelo frio cEHAA, pooling os volumes no mesmo tubo. Repetir para atingir um volume de suspensão final de células de 4 ml. </li><li> Adicionar tampão classificador frio (PBS + Azida de 2% de FBS, 0,05%) a um volume final de 15 ml e centrifugar o tubo durante 5 minutos a 300 xg, 4 ° C. </li><li> Aspirar o sobrenadante cuidadosamente, certificando-se gotículas de líquido não são deixados sobre os lados do tubo. Ressuspender o sedimento de células em Fc bloco (classificador de tampão + 2.4G2 anticorpo) a um volume final igual a cerca de duas vezes maior que o pellet em si. Por exemplo, os gânglios linfáticos e do baço de um ratinho ingénuo geralmente produz um pelete de células de cerca de 100 uL. Nesse caso, adicionar 100 ul de bloco de Fc para levar o volume para 200 ul. Se um grande grau de aglomeração de células ocorreu, remova cuidadosamente o aglomerado de células neste momento com uma pipeta. </li></ol> 2. Coloração tetrâmero <ol><li> Adicionar PE-ou APC-rotulado pMHC tetrâmero para uma concentração final de 10 nM (concentração ou empiricamente optimizados). </li><li> Mix e incubaçãote durante 1 hora à temperatura ambiente (ou a hora empiricamente optimizados e temperatura). </li><li> Adicionar tampão classificador fria até um volume de 15 ml e centrifugar o tubo durante 5 minutos a 300 xg, 4 ° C. Manter as amostras em gelo ou a 4 ° C a partir de agora. </li><li> Aspirar o sobrenadante cuidadosamente, certificando-se gotículas de líquido não são deixados sobre os lados do tubo. Ressuspender o sedimento de células em tampão de classificador para um volume final de 200 ul. Para o enriquecimento de tetrâmero de casal, ressuspender a um volume final de 150 ul. </li></ol> 3. Enriquecimento magnética <ol><li> Adicionar 50 ul de microesferas de Miltenyi anti-PE ou anti-APC. Para o enriquecimento de tetrâmero de casal, adicionar 50 ul de ambas. </li><li> Misturar e incubar durante 20 min a 4 ° C. </li><li> Adicionar tampão classificador fria até um volume de 15 ml e centrifugar o tubo durante 5 minutos a 300 xg, 4 ° C. </li><li> Enquanto espera, configurar uma Miltenyi coluna LS magnético em um ímã MidiMACS ou QuadroMACS. Uma posição aberta 15 ml tubo de centrífuga de polipropileno com umacumular diretamente abaixo da coluna. </li><li> Adicionar 3 ml de tampão de classificador para a parte superior da coluna, o que permite que seja drenado para o tubo de 15 ml. </li><li> Coloque um quadrado de 100 um de malha de nylon no topo da coluna. </li><li> Quando as células de ter terminado a fiação, aspirar cuidadosamente o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 3 ml de tampão de classificador. </li><li> Transferir a suspensão de células através da malha de nylon para o topo da coluna. </li><li> Quando a suspensão de células foi completamente drenada para a coluna, lavar o tubo inicial com um outro de 3 ml de tampão e transferir o classificador de tampão através da malha de nylon para a coluna, lavagem da malha durante o processo. Descarte a malha de nylon. </li><li> Quando o tampão foi completamente drenada para a coluna, adicionar 3 ml de um outro tampão classificador para a coluna. </li><li> Repetir o passo 10 para um total de 3 x 3 ml lavagens. </li><li> Remover a coluna do magnete e local ao longo de um novo tubo de 15 ml de centrífuga de polipropileno. </li><li> Adicionam-se 5 ml de tampão de classificador de tele coluna. </li><li> Imediatamente inserir o êmbolo no topo da coluna e com um movimento contínuo, empurre o êmbolo para baixo, forçando o tampão para fora da coluna dentro do tubo. </li><li> Centrifugar os tubos contendo a fracção eluída ligado e a fracção não ligada por escoamento durante 5 minutos a 300 xg, 4 ° C. </li><li> Aspirar cuidadosamente o sobrenadante a partir da fracção ligada, certificando-se gotículas de líquido não são deixados sobre os lados do tubo. Ressuspender o sedimento de células em tampão de classificador para um volume final de 95 ul exactamente. Aspirar e ressuspender a fracção não ligada a um volume final de 2 ml. </li></ol> 4. Citometria de Fluxo <ol><li> Para cada fracção, remover e adicionar 5 ul a 200 ul de pérolas de contagem (ajustada para uma concentração de 200,000 / ml em tampão sorter) em um tubo de 5 ml de FACS. Separe a 4 ° C para análise posterior. Para poupar tempo, os grânulos podem ser pré-aliquotadas para tubos marcados antes do início da experiência. </li><li> Prepare amaster mistura de anticorpos para marcadores de superfície de manchar as células (Tabela 1). Para poupar tempo, isto pode ser feito antes do início da experiência. </li><li> Para a fracção ligada, adicionar uma dose de cocktail de anticorpos directamente para o ~ 90 ul de células no tubo. Se a análise da fracção não ligada é desejada, transferir 90 ul de células para um tubo de 5 ml de FACS e adicionar uma dose de cocktail de anticorpos. </li><li> Criação de um painel de controles de cor única compensação para o citômetro de fluxo. Para cada fluorocromo a ser utilizado, misturar 50 ul de células não ligadas que tenham ficado fracção num tubo de 5 ml de FACS com 1 ul de anticorpo anti-CD4 conjugado com o fluorocromo correspondente. Lembre-se de configurar um controle sem manchas também. </li><li> Agitar em vórtice e incubar as amostras durante 30 min a 4 ° C. </li><li> Adicionam-se 5 ml de tampão de classificador a cada tubo e centrifugar durante 5 minutos a 300 xg, 4 ° C. </li><li> Para a fracção ligada, aspirar cuidadosamente o sobrenadante e ressuspender as células em 200 ul de buf classificadorfer. Transferir as células para um microtubo de 1,2 ml de FACS. Enxaguar o tubo com outro ul de tampão 200 e separador de piscina para o microtubo mesmo. Se aglomerados de células são evidentes, passar as células através de um filtro ^ M 50. </li><li> Para a fracção livre e controles de compensação, decantar ou aspirar o sobrenadante e ressuspender em tampão classificador 2 ml. </li><li> Configure o citômetro de fluxo, utilizando os controles de cor única compensação. Selecione lado dispersão de largura (SSC-W) como parâmetro adicional a ser gravado. </li><li> Analisar as amostras coradas utilizando uma sequência de sucessivas portas de inclusão para identificar células CD4 + ou CD8 +, como ilustrado nas Figuras 1 e 2. Para frações encadernados, coletar células como muitos como possível até um máximo de 2.000.000 total de eventos. Para fracções não ligadas, recolher 1.000.000 total de eventos. Manter a velocidade de aquisição em ou abaixo de 3000 eventos por segundo. </li><li> Usando as configurações da máquina mesmo, analisar as amostras de contagem de contas. Colete 10.000 total de eventos. &lt;/ Li&gt; <li> Guarde todos os dados como arquivos FCS. </li></ol> 5. Análise de Dados <ol><li> Analisar os arquivos de dados de FCS para as amostras de contagem de contas usando o software FlowJo. Dispersão trama para frente por FITC e definir uma porta aroung os colares de contas (ver Figuras 1 e 2). Determinar o número total de pérolas de contagem detectadas em cada amostra. Subtrair a partir do número total de eventos recolhidos para determinar o número de eventos celulares recolhidos. </li><li> Calcula-se o número total de todas as células em cada amostra, utilizando as equações descritas no Quadro 1. </li><li> Analisar os arquivos de dados para os FCS manchadas amostras fração associados e não associados. Defina-se uma sequência de sucessivas portas de inclusão para identificar + linfóide, do lado de dispersão de largura de eis-despejo, CD3 +, CD4 + ou CD8 +, células tetrâmero + T em cada uma das amostras tal como é ilustrado nas Figuras 1 e 2. </li><li> Multiplicar o número total de células na amostra por as frequências de cada um dos portões de inclusão usados ​​para definir CD4 + tetrâmero+ Ou CD8 + + tetrâmero células para calcular o número total de células T específicas do epítopo (Quadro 1). </li></ol>

<ol>
	<li>Knutson, K. L., dela Rosa, C., Disis, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+analysis+of+T-cell+immunity.">Laboratory analysis of T-cell immunity.</a> Front Biosci. 11, 1932-1944 (2006).</li><li>Kearney, E. R., Pape, K. A., Loh, D. Y., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+peptide-specific+T+cell+immunity+and+peripheral+tolerance+induction+in+vivo.">Visualization of peptide-specific T cell immunity and peripheral tolerance induction in vivo.</a> Immunity. 1, 327-339 (1994).</li><li>Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+epitope-specific+T+cells.">Tracking epitope-specific T cells.</a> Nat Protoc. 4, 565-581 (2009).</li><li>Hataye, J., Moon, J. J., Khoruts, A., Reilly, C., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+and+memory+CD4++T+cell+survival+controlled+by+clonal+abundance.">Naive and memory CD4+ T cell survival controlled by clonal abundance.</a> Science. 312, 114-116 (2006).</li><li>Marzo, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+T+cell+frequency+dictates+memory+CD8++T+cell+lineage+commitment.">Initial T cell frequency dictates memory CD8+ T cell lineage commitment.</a> Nat Immunol. 6, 793-799 (2005).</li><li>Davis, M. M., Altman, J. D., Newell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+the+repertoire:+broadening+the+scope+of+peptide-MHC+multimer+analysis.">Interrogating the repertoire: broadening the scope of peptide-MHC multimer analysis.</a> Nature reviews. Immunology. 11, 551-558 (2011).</li><li>Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+CD4(+)+T+cell+frequency+varies+for+different+epitopes+and+predicts+repertoire+diversity+and+response+magnitude.">Naive CD4(+) T cell frequency varies for different epitopes and predicts repertoire diversity and response magnitude.</a> Immunity. 27, 203-213 (2007).</li><li>Seah, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+linear+range+for+accurately+quantifying+antigen-specific+T-cell+frequencies+by+tetramer+staining+during+natural+immune+responses.">The linear range for accurately quantifying antigen-specific T-cell frequencies by tetramer staining during natural immune responses.</a> European Journal of Immunology. 41, 1499-1500 (2011).</li><li>Obar, J. J., Khanna, K. M., Lefrancois, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+naive+CD8++T+cell+precursor+frequency+regulates+primary+and+memory+responses+to+infection.">Endogenous naive CD8+ T cell precursor frequency regulates primary and memory responses to infection.</a> Immunity. 28, 859-869 (2008).</li><li>Daniels, M. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+for+CD8+in+T+cell+receptor+binding+and+activation+by+peptide/major+histocompatibility+complex+multimers.">Critical role for CD8 in T cell receptor binding and activation by peptide/major histocompatibility complex multimers.</a> J Exp Med. 191, 335-346 (2000).</li><li>Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha+3+domain+mutants+of+peptide/MHC+class+I+multimers+allow+the+selective+isolation+of+high+avidity+tumor-reactive+CD8+T+cells.">Alpha 3 domain mutants of peptide/MHC class I multimers allow the selective isolation of high avidity tumor-reactive CD8 T cells.</a> Journal of Immunology. 171, 1844-1849 (2003).</li><li>Choi, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+avidity+antigen-specific+CTL+identified+by+CD8-independent+tetramer+staining.">High avidity antigen-specific CTL identified by CD8-independent tetramer staining.</a> Journal of Immunology. 171, 5116-5123 (2003).</li><li>Chu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+selection+optimizes+the+number+and+function+of+MHCII-restricted+CD4++T+cell+clones+in+the+naive+polyclonal+repertoire.">Positive selection optimizes the number and function of MHCII-restricted CD4+ T cell clones in the naive polyclonal repertoire.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 11241-11245 (2009).</li><li>Chu, H. H., Moon, J. J., Kruse, A. C., Pepper, M., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+Selection+and+Peptide+Chemistry+Determine+the+Size+of+Naive+Foreign+Peptide-MHC+Class+II-Specific+CD4++T+Cell+Populations.">Negative Selection and Peptide Chemistry Determine the Size of Naive Foreign Peptide-MHC Class II-Specific CD4+ T Cell Populations.</a> J Immunol. 185, 4705-4713 (2010).</li><li>Legoux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+TCR+reactivity+and+HLA+phenotype+on+naive+CD8+T+cell+frequency+in+humans.">Impact of TCR reactivity and HLA phenotype on naive CD8 T cell frequency in humans.</a> J Immunol. 184, 6731-6738 (2010).</li><li>Alanio, C., Lemaitre, F., Law, H. K., Hasan, M., Albert, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+human+antigen-specific+naive+CD8++T+cells+reveals+conserved+precursor+frequencies.">Enumeration of human antigen-specific naive CD8+ T cells reveals conserved precursor frequencies.</a> Blood. 115, 3718-3725 (2010).</li><li>Kwok, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+Epitope-Specific+Naive+CD4++T+Cells+Correlates+with+Immunodominance+in+the+Human+Memory+Repertoire.">Frequency of Epitope-Specific Naive CD4+ T Cells Correlates with Immunodominance in the Human Memory Repertoire.</a> Journal of Immunology. 188, 2537-2544 (2012).</li><li>Jenkins, M. K., Chu, H. H., McLachlan, J. B., Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+composition+of+the+preimmune+repertoire+of+T+cells+specific+for+Peptide-major+histocompatibility+complex+ligands.">On the composition of the preimmune repertoire of T cells specific for Peptide-major histocompatibility complex ligands.</a> Annu Rev Immunol. 28, 275-294 (2010).</li><li>Matechak, E. O., Killeen, N., Hedrick, S. M., Fowlkes, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+class+II-specific+T+cells+can+develop+in+the+CD8+lineage+when+CD4+is+absent.">MHC class II-specific T cells can develop in the CD8 lineage when CD4 is absent.</a> Immunity. 4, 337-347 (1996).</li><li>Burchill, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linked+T+cell+receptor+and+cytokine+signaling+govern+the+development+of+the+regulatory+T+cell+repertoire.">Linked T cell receptor and cytokine signaling govern the development of the regulatory T cell repertoire.</a> Immunity. 28, 112-121 (2008).</li><li>Pepper, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+routes+of+bacterial+infection+induce+long-lived+TH1+memory+cells+and+short-lived+TH17+cells.">Different routes of bacterial infection induce long-lived TH1 memory cells and short-lived TH17 cells.</a> Nature Immunology. 11, 83-89 (2010).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O pMHC tetrâmero método de enriquecimento baseado célula apresentada por este protocolo é uma ferramenta poderosa para estudar epítopo-específicas células T de endógenos repertórios de células T. O uso de tetrâmeros pMHC permite a detecção de células T específicas para epitopo diretamente dependente da capacidade dos seus TCR se ligar ligandos cognatos pMHC. O enriquecimento fornece um nível de sensibilidade de modo que as populações extremamente raros de células T específicas de antigénio pode ser ...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Reagente</strong</td&gt;<td<strong&gt; Vendedor</strong</td&gt;<td<strong&gt; Número de catálogo</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PE ou APC conjugada pMHC tetrâmero (ou multimeros)</td&gt;<td&gt; Made pelo investigador, obtido a partir do núcleo do tetrâmero NIH, ou adquiridos de fontes comerciais</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anti-PE conjugados microesferas magnéticas</td&gt;<td&gt; Miltenyi</td&gt;<td&gt; 130-048-801</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anti-APC conjugados microesferas magnéticas</td&gt;<td&gt; Miltenyi</td&gt;<td&gt; 130-090-855</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Colunas LS magnéticos</td&gt;<td&gt; Miltenyi</td&gt;<td&gt; 130-042-401</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; MidiMACS ou QuadroMACS ímã</td&gt;<td&gt; Miltenyi</td&gt;<td&gt; 130-042-302 ou 130-090-976</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Contagem de células contas</td&gt;<td&gt; Life Technologies</td&gt;<td&gt; PCB-100</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

peptide:mhc tetramer-based enrichment of epitope-specific t cells

Uma necessidade básica para os investigadores que estudam a imunidade adaptativa com modelos experimentais in vivo é a capacidade de identificar as células T com base no seu receptor de células T de antigénio (TCR) especificidade. Muitos métodos indirectos estão disponíveis em que uma população a granel de células T é estimulada in vitro com um antigénio específico e células T específicas do epítopo são identificadas através da medição de uma resposta funcional, como a proliferação, a produção de citocinas, ou a expressão de marcadores de activação 1. No entanto, estes métodos apenas identificar as células T específicas para epitopo que exibem uma de muitas possíveis funções, e eles não são suficientemente sensíveis para detectar epítopos específicos de células T naive em frequências precursoras. Uma alternativa popular é o TCR transgénico modelo de transferência adoptiva, em que as células T monoclonais a partir de um ratinho transgénico TCR são semeadas em hospedeiros histocompatibilidade para criar um precursor população grande de células T específicas para epitopos que podem ser easily rastreados com o uso de um anticorpo marcador Congênicos 2,3. Embora poderoso, este método sofre de artefactos experimentais associados não fisiológicas da frequência de células T com especificidade para um único epítopo 4,5. Além disso, este sistema não pode ser utilizado para investigar a heterogeneidade funcional do epítopo específicos clones de células T dentro de uma população policlonal. A forma ideal para o estudo da imunidade adaptativa deve envolver a detecção directa do epítopo de células T específicas a partir do repertório de células T endógeno, utilizando um método que diferencie a especificidade TCR unicamente pela sua ligação ao péptido cognato: (pMHC) do MHC complexos. O uso de tetrâmeros pMHC e citometria de fluxo realiza esta 6, mas está limitado à detecção de populações de alta frequência de células T específicas para epitopo apenas encontrados a expansão induzida pelo antigénio seguinte clonal. Neste protocolo, descrevemos um método que coordena o uso de tetrâmeros pMHC e magnetic tecnologia de enriquecimento de células para permitir a detecção de frequências extremamente baixas células epítopo T específicas de tecidos de camundongos linfóides 3,7. Com esta técnica, pode-se rastrear exaustivamente inteiras epitopo-populações específicas de células T endógenas em ratinhos em todas as fases da resposta imune.

A Figura 1 mostra gráficos representativos de fluxo de citometria de pMHCII baço enriquecida tetrâmero e amostras de nódulos linfáticos de ratinhos ingénuos, enquanto que a Figura 2 mostra os dados representativos dos ratos anteriormente imunizados com o péptido relevante + CFA. Gating Serial remove autofluorescente e outros eventos indesejados a partir da análise das células T CD4 + populações de células T. A CD8 + da população de células T serve como um controlo interno...

Watch this Scientific Journal Video about Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells at JoVE.com

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

Este protocolo descreve o uso de péptido: MHC tetrâmeros e microesferas magnéticas para isolar populações de baixa frequência de células T específicas para epitopo e analisá-las por citometria de fluxo. Este método permite o estudo direto de endógenos populações de células T de interesse de<em&gt; In vivo</em&gt; Sistemas experimentais.

Péptido: Enriquecimento tetrâmero com base MHC das células T específicas para epitopos

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

peptidemhc-tetramer-based-enrichment-of-epitope-specific-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

17.7K visualizações.  Massachusetts General Hospital and Harvard Medical School. Este protocolo descreve o uso de péptido: MHC tetrâmeros e microesferas magnéticas para isolar populações de baixa frequência de células T específicas para epitopo e analisá-las por citometria de fluxo. Este método permite o estudo direto de endógenos populações de células T de interesse de In vivo Sistemas experimentais.