O trabalho foi apoiado pelo financiamento de base do Conselho de Investigação Médica. Somos gratos a Craig Nicol para preparar desenhos técnicos. Somos gratos a Matthew Pearson e Paul Perry por seu apoio de imagem.

Todo o trabalho animal foi executada de acordo com as diretrizes institucionais sob licença pela UK Home Office (número de licença do projeto PPL 60/3785 e 60/4424). 1. Preparação <ol><li> Identifique os melanoblastos na pele em desenvolvimento, combinando uma linha de expressar rato Cre-recombinase apropriado com uma linha de rato repórter fluorescente. :: CreA Tyr, Tyr :: CREB 8 e Wnt1 :: Cre 14 têm sido utilizados com sucesso como linhas de Cre-expressando e R26YFPR 9 como uma linha de repórter. </li><li> Preparar o meio de cultura numa câmara de fluxo laminar; complementar de Dulbecco Modified Eagle Médium (DMEM) com 1% (v / v de Penicilina / Estreptomicina), 10% v / v de soro fetal de vitelo e 0,584 g / L de L-glutamina. </li><li> O aparelho de imagem ao vivo está descrito na Figura 1 Esterilizar a base da câmara de imagiologia, limpando-se com etanol a 70%. Esterilizar as inserções, clipes de imagem, e O-rings por imersão overnight em etanol a 70%. Use uma tampa estéril a partir de uma placa de 6 poços, como a tampa da câmara. </li><li> A superfície do fundo da câmara de imagem é composto por uma membrana lummox mantido no lugar por um anel em O (Figura 1). Comece com um 35 milímetros gás permeável lummox prato. Coloque o prato sobre a câmara de imagem e cortar a membrana permeável a gás com uma única lâmina de barbear gumes. Empurrar o anel de vedação ao longo da membrana para assegurar que a câmara de imagem. </li><li> Os clipes de imagem (6 no total) fixar a pele embrionária no local (Figura 1) antes do uso, devem ser preenchidos com 1% de agarose. Prepara-se uma solução de 2% de agarose com dH 2 O estéril por microondas e arrefecida a 60 ° C. Mistura a 1:1 com 10 ml de meio de cultura (ver passo 2) pré-aquecido a 60 ° C. Levante os seis clipes de imagens em um estéril 6 bem-placa. Escorrer a solução de agarose a 1% para o centro de cada grampo usando um fino pastette e deixa-se arrefecer. Adicionar 1 ml de PBS estéril frio a cada poço para evitar a umgarose sequem. Os clipes de imagens podem ser armazenadas durante várias horas em PBS. </li><li> Para levar a cabo a separação de pele delicada embrionário e de manipular o tecido dissecado utilizar o &#39;método vara cabelo &quot;, tal como descrito em Kashiwagi et al. 3 Em vez de usar um pauzinho um kebab espeto de bambu podem ser usadas. Faça um pequeno corte na extremidade plana do espeto usando uma única lâmina de barbear afiada e inserir uma escova de dentes de cerdas macias. Apare o espeto de modo que é de aproximadamente 15 cm de comprimento. </li><li> Usar um microscópio confocal com uma câmara ambiental completo ou fase superior da câmara fornecer 5% de CO 2 no ar. Pré-aquecer o estágio de microscópio de 37 ° C durante pelo menos 1 hora antes da imagiologia. Isso ajuda a impedir a dispersão da amostra causada pela expansão dos componentes do estágio como eles se aquecer. </li><li> Preparar um conjunto multi-posição usando o software de controle do microscópio para que se possa rapidamente e facilmente centralizar no meio de cada cultura para criar uma experimentaçãot. </li></ol> 2. Procedimento <ol><li> Companheiro os ratos e designar o primeiro dia pós coitum como o dia E0.5. No dia E14.5, abater a fêmea por deslocamento cervical e expor a cavidade do corpo através de uma pequena incisão na linha média, separando a pele na direcção da cabeça e cauda e, em seguida, o corte do peritoneu subjacente e repicante volta para qualquer um dos lados do corpo. Dissecar o útero em frio PBS estéril, segurando firmemente com uma pinça e cortando ao longo da mesométrio usando uma tesoura cirúrgica. Manter o útero no gelo até ser necessária. Para uma descrição detalhada ver Shea et al. (2007) 15. </li><li> Dissecar de embriões no útero, em primeiro lugar o corte do comprimento da parede uterina com tesouras cirúrgicas para libertar a decídua e dissecando os embriões do decidua por separá-las com os dois pares de pinças finos. Tela para a expressão repórter fluorescente (se necessário). </li><li> Cull embriões por decapitação antes da dissecção. Subsequently retirar a cauda e membros posteriores e depois os membros anteriores usando uma única lâmina de barbear gumes. Reter tecido para genotipagem, se necessário. </li><li> Faça uma incisão na ventrum perto da linha média em uma direção rostro-caudal. Usando as varas do cabelo descritos na etapa 1.6, cuidadosamente provocar longe da pele a partir do tecido conjuntivo subjacente rodar o embrião ao mesmo tempo. Não remova a pele completamente, mas sim deixá-lo ligado ao longo da borda mais distante ventral da primeira incisão. </li><li> É importante não deixar que a pele se tornar asneira, pois é então muito difícil de montar. Para evitar isso, alisar a pele usando os paus de cabelo (lado dérmico para cima) sobre a superfície de uma placa de Petri, seco e, em seguida, cortado a partir do tronco de embriões utilizando uma única lâmina de barbear afiada. O lado dérmico pode ser distinguido do lado epidérmico por observação cuidadosa da junção entre o tecido dissecado e o embrião, antes que a pele é retirada. A área de tecido é dissecadocerca de 0,5 mm 2 quando dissecando o embrião E14.5. </li><li> Coloque um grampo de imagem em cima da pele, de modo que a agarose é tocar o lado dérmico do tecido. Deixar em repouso durante 60 segundos e, em seguida, cuidadosamente provocar as bordas do tecido acima dos lados do clipe. Inverter o grampo e usar o cabelo varas para alisar a pele e remover quaisquer bolhas de ar, tendo o cuidado de tocar a superfície do tecido (na zona que vai ser trabalhada) tão pouco quanto possível. </li><li> Use fio de sutura de seda para amarrar a pele para o clipe de imagiologia utilizando dois nós do polegar simples em qualquer um dos lados do clipe de imagem de modo que apertar e retirar a pele para dentro da ranhura estreita para a parte superior do grampo. Inverta o clipe, empurre para dentro a inserção de imagens e coloque na base. Encha a inserção com ~ 5 ml de meio de cultura (veja o passo 1.2). Figura 1 apresenta a montagem da câmara de imagem. </li><li> Repita Protocolo para os restantes 5 amostras. </li></ol> 3. ViverImagem <ol><li> A câmara de imagem tem as mesmas dimensões que uma placa de 6 poços padrão. Use uma placa de inserção apropriado para montar a câmara na fase do microscópio confocal. </li><li> Uma fase automatizada é necessária para a imagem das culturas em paralelo. Definir as seis posições de imagem no software confocal. As definições exactas irão depender da capacidade do microscópio utilizado. Tipicamente, uma pequena pilha z-(3-5 z-posições para ter em conta qualquer variação fase) é usado em cada uma das seis posições e uma pilha z é capturado a cada 2 min durante 18-24 h. Para aplicações de live-imagem geralmente é vantajoso usar uma definição mais ampla do que pinhole opticamente ideal para reduzir a potência do laser e do número de z-seções necessárias. </li></ol>

<ol>
	<li>Thomas, A. J., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+making+of+a+melanocyte:+the+specification+of+melanoblasts+from+the+neural+crest.">The making of a melanocyte: the specification of melanoblasts from the neural crest.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 21 (6), 598-610 (2008).</li><li>Mayer, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+migratory+pathway+of+neural+crest+cells+into+the+skin+of+mouse+embryos.">The migratory pathway of neural crest cells into the skin of mouse embryos.</a> Developmental Biology. 34 (1), 39-46 (1973).</li><li>Kashiwagi, M., Huh, N., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture+of+Developing+Mouse+Skin+and+Its+Application+for+Molecular+Mechanistic+Studies+of+Morphogenesis.">Organ Culture of Developing Mouse Skin and Its Application for Molecular Mechanistic Studies of Morphogenesis.</a> Epidermal Cells: Methods and Protocols. 289, 39-45 (2005).</li><li>Kashiwagi, M., Kuroki, T., Huh, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+inhibition+of+hair+follicle+formation+by+epidermal+growth+factor+in+an+organ+culture+of+developing+mouse+skin.">Specific inhibition of hair follicle formation by epidermal growth factor in an organ culture of developing mouse skin.</a> Developmental Biology. 189 (1), 22-32 (1997).</li><li>Van Der Wel, L. I., Wei, L., Prens, E. P., Laman, J. D., Companjen, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+ex+vivo+skin+organ+culture+system+for+functional+studies.">A modified ex vivo skin organ culture system for functional studies.</a> Archives of Dermatological Research. 293 (4), 184-190 (2001).</li><li>Mort, R. L., Hay, L., Jackson, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+live+imaging+of+melanoblast+migration+in+embryonic+mouse+skin.">Ex vivo live imaging of melanoblast migration in embryonic mouse skin.</a> Pigment Cell &amp; Melanoma Research. 23 (2), 299-301 (2010).</li><li>Jordan, S. A. A., Jackson, I. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MGF+(KIT+ligand)+is+a+chemokinetic+factor+for+melanoblast+migration+into+hair+follicles.">MGF (KIT ligand) is a chemokinetic factor for melanoblast migration into hair follicles.</a> Developmental Biology. 225 (2), 424-436 (2000).</li><li>Delmas, V., Martinozzi, S., Bourgeois, Y., Holzenberger, M., Larue, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+recombination+in+the+skin+melanocyte+lineage.">Cre-mediated recombination in the skin melanocyte lineage.</a> Genesis. 36 (2), 73-80 (2003).</li><li>Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus.">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Developmental Biology. 1 (1), (2001).</li><li>Li, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rac1+Drives+Melanoblast+Organization+during+Mouse+Development+by+Orchestrating+Pseudopod.">Rac1 Drives Melanoblast Organization during Mouse Development by Orchestrating Pseudopod.</a> Driven Motility and Cell-Cycle Progression. Developmental Cell. 21 (4), 722-734 (2011).</li><li>Li, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+Mutant+NRas(Q61K)+Drives+Aberrant+Melanocyte+Signaling,+Survival,+and+Invasiveness+via+a+Rac1-Dependent+Mechanism.">Activated Mutant NRas(Q61K) Drives Aberrant Melanocyte Signaling, Survival, and Invasiveness via a Rac1-Dependent Mechanism.</a> The Journal of Investigative Dermatology. , 1-12 (2012).</li><li>Schachtner, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+inducible+Lifeact+expression+allows+visualization+of+actin+dynamics+in+vivo+and+ex+vivo.">Tissue inducible Lifeact expression allows visualization of actin dynamics in vivo and ex vivo.</a> European Journal of Cell Biology. 91 (11-12), 923-929 (2012).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fascin+1+is+transiently+expressed+in+mouse+melanoblasts+during+development+and+promotes+migration+and+proliferation.">Fascin 1 is transiently expressed in mouse melanoblasts during development and promotes migration and proliferation.</a> Development. 140 (10), 2203-2211 (2013).</li><li>Danielian, P. S., Muccino, D., Rowitch, D. H., Michael, S. K., McMahon, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+gene+activity+in+mouse+embryos+in+utero+by+a+tamoxifen-inducible+form+of+Cre+recombinase.">Modification of gene activity in mouse embryos in utero by a tamoxifen-inducible form of Cre recombinase.</a> Current Biology. 8 (24), 1323-1326 (1998).</li><li>Shea, K., Geijsen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+6.5+dpc+mouse+embryos.">Dissection of 6.5 dpc mouse embryos.</a> Journal of Visualized Experiments. (2), (2007).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Nós descrevemos um método para a cultura da pele embrionária que é particularidade passíveis de imagem de células vivas para a microscopia confocal invertidos. O método inclui os melhoramentos recentes que permitem seis culturas a ser trabalhada em paralelo e elimina a dependência de matrigel e membranas Nuclepore do método original 6. A diferença fundamental técnica a partir de técnicas similares é a utilização de uma membrana permeável ao gás lummox para estabelecer uma interface líquido d...

Tradicionalmente pele embrionária foi cultivada por dissecar a partir do embrião do rato e montagem em uma membrana de policarbonato Nuclepore. A membrana é então lançada em meio de cultura, mantendo, assim, uma interface ar-líquido através da superfície do tecido em desenvolvimento 3,4. Esta técnica tem sido utilizada para avaliar o comportamento melanoblasto pela fixação do tecido e a avaliação de distribuição melanoblasto usando β-galactosidase como marcador 7. Nós desenvolvemos um método que permite melanoblastos live-imaging de fluorescente etiquetado em ex vivo cultura pele 6. Aqui vamos descrever o método em detalhes de dissecação, a configuração, a viver de imagem confocal e incluem algumas melhorias recentes. Melanoblastos são os precursores embrionários dos melanócitos, as células que produzem o pigmento no cabelo e na pele. Melanoblastos surgem na crista neural adjacente ao tubo neural embrionária por volta do dia 9 (E9) no rato em desenvolvimento embryo. Subsequentemente migram ao longo de um percurso entre a dorsolateral ectoderme e somitos desenvolvimento. No E12.5 eles se movem da derme para a epiderme, onde proliferam e continuar sua migração. O padrão primário folículo piloso começa a se formar na epiderme em E14.5 e E15.5 por melanoblastos está localizando a esses folículos. Para uma revisão do desenvolvimento melanoblasto / melanócito ver Thomas &amp; Erickson (2008) 1. A fim de marcar a população melanoblasto combinamos Tyr :: CREB animais que expressam Cre-recombinase, conduzido pelo promotor de rato de tirosinase com 8 animais R26YFPR que expressam a proteína fluorescente amarela (YFP) condicionalmente a partir do locus Rosa26 9. Nós descrevemos um método para cultura da pele e capturar imagens embrionárias usando um microscópio confocal invertido. É adaptado forma do método original descrito em Mort et al. (2010) 6. O presentemétodo permite a formação de imagens de um formato de 6 poços e elimina a dependência de membranas Nuclepore e em matrigel para suportar a cultura. Em vez disso, utilizando um pequeno bloco de agarose a 1% para estabilizar a pele embrionário. Removendo a dependência de matrigel é importante, especialmente em situações em que a resposta da pele embrionário a factores de crescimento solúveis é o foco de estudo. Nosso método original já foi usado para ganhar novos insights sobre o desenvolvimento melanoblasto 10-13 e nós antecipamos que as melhorias que descrevemos aqui vai torná-lo mais poderoso como uma técnica experimental, especialmente onde várias culturas paralelas são uma exigência.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM high glucose</td>
			<td style="width:132px;">Biochrom AG</td>
			<td style="width:119px;">F0475</td>
			<td style="width:167px;">without phenol red</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin</td>
			<td style="width:132px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:132px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:132px;">Hyclone</td>
			<td style="width:119px;">SV30160.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glutamax</td>
			<td style="width:132px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">35050-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:132px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Live imaging chamber</td>
			<td style="width:132px;">Custom made</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lummox dishes</td>
			<td style="width:132px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">94.6077.410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">6-well plate</td>
			<td style="width:132px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">657-160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Single edged razor blade</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1244-3170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:132px;">Biogene</td>
			<td style="width:119px;">300-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fine pastette</td>
			<td style="width:132px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS</td>
			<td style="width:132px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kebab skewers</td>
			<td style="width:132px;">Waitrose</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Bamboo BBQ skewers 30cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Toothbrush</td>
			<td style="width:132px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:132px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">633185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Suture thread</td>
			<td style="width:132px;">Look</td>
			<td style="width:119px;">SP115</td>
			<td>Black silk suture thread</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo culture of mouse embryonic skin and live-imaging of melanoblast migration

Melanoblastos são a crista neural precursores de melanócitos derivados; as células responsáveis ​​pela produção do pigmento na pele e no cabelo. Melanoblastos migra através da epiderme do embrião onde subsequentemente colonizar o cabelo desenvolver folículos 1,2. Migração das células da crista neural é amplamente estudada in vitro, mas em métodos in vivo ainda não estão bem desenvolvidos, especialmente em sistemas de mamíferos. Uma alternativa é a utilização ex vivo de cultura organotípica 3-6. Cultura de rato embrionário pele requer a manutenção de uma interface ar-líquido (ALI) em toda a superfície do tecido de 3,6. Alta resolução de imagem de live-rato pele embrionária tem sido dificultada pela falta de um bom método que não só mantém este ALI, mas também permite que a cultura seja invertida e, portanto, compatível com lentes objetivas de distância de trabalho curta e microscópios mais confocal. Este artigo descreve as recentes melhorias para a metanfetaminaod que utiliza uma membrana permeável a gás para superar estes problemas e permitir alta resolução de imagem confocal de pele embrionário em cultura ex vivo 6. Ao utilizar um melanoblasto específica Cre-recombinase expressa linha de rato combinado com a linha de repórter R26YFPR que são capazes de marcar por fluorescência da população melanoblasto dentro destas culturas de pele. A técnica permite ao vivo de imagem de melanoblastos e observação de seu comportamento e interações com o tecido em que se desenvolvem. Os resultados representativos são incluídos para demonstrar a capacidade de viver-imagem seis culturas em paralelo.

A Figura 2 mostra resultados representativos de um experimento de lapso de tempo usando pele embrionária de Tyr :: CREB x embriões R26YFPR em E14.5. 6 culturas de pele embrionários foram fotografadas por microscopia confocal a cada 2 min durante 18 horas. O pacote ImageJ software de análise de imagem gratuito foi usado para analisar o comportamento dos melanoblastos YFP-rotulados nos 6 filmes. Os melanoblastos foram automaticamente rastreados usando o plugin wrMTrck desenvolvido po...

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Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Descrevemos a dissecção e ex vivo cultura de rato pele embrionária. O sistema mantém uma cultura de interface ar-líquido através da superfície do tecido e permite imagens em um microscópio invertido. Melanoblastos, um componente da pele em desenvolvimento, são marcadas por fluorescência, permitindo o seu comportamento a ser observada por meio de microscopia confocal.

Ex vivo Cultura do Rato Embryonic pele e Live-imaging de Migração melanoblasto

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

ex-vivo-culture-mouse-embryonic-skin-live-imaging-melanoblast

Research

JoVE Journal

Biology

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

12.5K visualizações.  University of Edinburgh.  Descrevemos a dissecção e ex vivo cultura de rato pele embrionária. O sistema mantém uma cultura de interface ar-líquido através da superfície do tecido e permite imagens em um microscópio invertido. Melanoblastos, um componente da pele em desenvolvimento, são marcadas por fluorescência, permitindo o seu comportamento a ser observada por meio de microscopia confocal. 